I. — FIXATION

On trouvera dans les traités techniques d'anatomie microscopique un nombre considérable de formules de réactifs fixateurs et je n’ai qu’à renvoyer le lecteur, curieux de détails, au livre si complet de MM. A. Bolles Lee et L.-F, Henneguy.

Dans ces pages, je me bornerai strictement à indiquer la technique qui me semble la plus pratique pour le diagnostic histologique des affections utérines.

LMD

Je recommande particulièrement les trois liquides suivants :

1° Alcool à 400° ; 2° Liquide de Zenker ; 3° Liquide de Lindsay Johnson.

1° Alcool à 100°.— Les fragments ne doivent pas excéder 1 centimètre de large sur 5 millimètres d'épaisseur. Dans le cas contraire, on doit les débiter en morceaux, en évitant de les malaxer, avec un rasoir bien affilé. Les tissus seront plongés dans vingt fois leur volumede liquide et y séjourneront de deux à six heures.Au bout de ce temps, ils seront éclaircis par le toluène, comme onle verra plus loin.

Dans le cas où l’on ne se servirait pas immédiatement des pièces, celles-ci peuvent séjourner indéfiniment dans l'alcool pourvu qu'on observe la proportion indiquée ceidessus. C'est là un point très important et qui est presque toujours négligé. La plupart du temps, on entasse des fragments volumineux dans un flacon de petite dimension (en général un flacon à catgut) et on remplit les interstices avec de l'alcool à un titre souvent faible; au lieu d’une fixation, c'est-à-dire d’une coagulation du protoplasma, on n'obtient pas d'autre résultat, en procédant ainsi, qu’une hydratation rapide de l'alcool, et, par suite, une macération fâcheuse des éléments lissulaires qui deviennent impropres à toute étude histologique.

L'alcool est un réactif infidèle au point de vue de la conservation de la structure cytologique ; mais, en revanche, lorsque les tissus sont morts depuis quelque temps, ce corps, puisqu il s'agit nécessairement d'études relativement grossières, peut encore rendre de bons services; d'autre part, il se recommande par la simplicité d'emploi.

De plus, la fixation par l’alcool est indiquée lorsqu'on se propose de pratiquerdes réactions histochimiques (amy-

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loïde, fibrine, pigments, etc.) ; tel est le cas notamment pour le glycogène sur la présence duquel M. Brault base, dans une certaine limite, le pronostic des tumeurs (1).

2° Liquide de Zenker. — On prépare séparément les deux solutions suivantes:

Solution À à préparer à chaud

Bichromate de potasse......... 28,5 Sulfate de soude...... a er ee 187 RP ISO Re Le Ne. 10027

Solution B à préparer à chaud

Bichlorure de mercure......... 95" Pavidistiées 5: 2" | ts 2100

Après dissolution complète, mélanger ensemble les solu-

(1) Voici la technique recommandée par M. Brault : pour la mise en évidence du glycogène, les coupes pratiquées sans inclusion ou après inclasion au collodion - sont reçues dans un cristallisoir rempli d'alcool absolu ou d'alcool à 95°, Il est essentiel, en etfet, d'éviter le contact des coupes avec des liquides capables de dissoudre ou d’altérer le glycogène, A peine disposées sur les lames, les coupes doivent subir une demi-dessiccation pour assurer leur adhérence et les débarrasser de leur excès d’alcool.

Puis on fait agir sur elles la gomme iodée. Pour la préparer, on peut utiliser la formule suivante : dissoudre, dans 30 à 40 grammes d’eau, 10 grammes d'iodure de potassium et 1 gramme d’iode. Puis ajouter peu à peu 200 grammes d’une solution de gomme sirupeuse en assurant le mélange intime, au moyen d’un agitateur. On voit, d’après cela, que sauf sa consistance, cette solution se rapproche sensiblement par sa teneur en iode du liquide de Gram.

L’adjonction de la gomme est rendue nécessaire par cette observation que le glycogène ne subit en sa présence aucune modification, tandis que dans une solution aqueuse iodo-iodurée il finit par disparaitre.

La gomme eu perdant son eau reste transparente et, dès le lendemain, la préparation peut être examinée sans être recouverte. Si l’on veut obtenir une préparation persistante, il suffira d'étendre sur la coupe une légère couche de gomme iodée fraiche et de recouvrir d'une lamelle, Celle-ci sera lutée ou non.

Lorsque la gomme iodée à pénétré la préparation, on reconnaît immédiatement le glycogène à sa coloration brun acajou se détachant sur un fond jaune uniforme.

Sur les coupes ainsi traitées, on obtient les renseignements les plus utiles, car on juge, à première vue, de la répartition générale et de la quantité proportionnelle de glycogène contenu dans les cellules.

tions À et B; laisser reposer plusieurs heures, puis filtirer.

Ajouter au moment de l'emploi 1 gramme d'acide acétique glacial pour 40 grammes de liquide de Zenker. -

Ce mélange constitue un fixateur de premier ordre, permettant d'étudier la plupart des détails de la structure Cytologique.

Les fragments doivent avoir les mêmes dimensions que “celles indiquées pour la fixation par l'alcool, la proportion de réactif restant, la même.

Après un séjour dans le liquide de Zenker, variant de quatre à six heures, suivant leur volume, les pièces seront mises à laver dans l’eau courante pendant un temps égal, puis dans les alcools successivement renforcés (33°, 70°, 90°); chacun de ces alcools sera renouvelé jusqu'à ce qu'il ne produise plus de précipité; un dernier lavage sera fait dans de l’alcool à 90°, additionné de teinture d’iode en proportion telle que le mélange ait la teinte du rhum fortement coloré (1). É

3° Liquide de Lindsay Johnson. — Ce mélange est le type par excellence des bons fixateurs (2).

Constitué par un mélange de plusieurs agents fixateurs,

(1) Cette précaution est indispensable si on veut débarrasser les tissus du bichlorure de mercure qui les imprègne ; autrement on s'expose à avoir des préparations remplies de précipités et se colorant difficilement,

(2) Je dois reconnaître que le mélange fort de Flemming est également un des meilleurs fixateurs connus.

Voici sa composition :

Acide osniquetà-2;/pe 100 SR ET AE ARTE Les 4 volumes ACTE ICRTOMIQUE AMP MOD RARES ET NE 45 — Acide acttique(cristalisablen nier Cr Re 1

Mème traitement ultérieur des pièces que dans la fixation par le liquide de . Lindsay Johnson.