EOSINOPHILIE EXPÉRIMENTALE PAR LES EXTRAITS DE DISTOMES

Nous avons recherché à propos de la Fasciola hepatica quelle était la valeur des différents extraits, la date d’apparition de l'éosinophilie qu'ils provoquent, son intensité. Nos expériences ont été faites en grande partie sur le cobaye, animal chez lequel l'hyperéosinophilie sanguine est facile à provoquer (1).

Nous avons emprunté la méthode de J. Favre (de Lyon) pour mettre en évidence les éosinophiles dans les frottis de sang. Après coloration des noyaux à l'hématéine, les lames sont plongées 24 heures dans l'éosinealcool à 1/100, ou quelques heures dans l’éosine-eau. puis différenciées à l'eau bicarbonatée. Les globules rouges, les neutrophiles perdent rapidement la couleur, seules les granulations oxyphiles sont en rouge vif et d'autant plus apparentes que la décoloration a été poussée plus loin. Le lavage à l'alcool absolu. après l’eau bicarbonatée, accélère la différenciation.

Cette coloration permet, mieux que celle de giemsa,

(1) Toutes les numérations que nous donnons ont été faites sur un

chiffre minimum de 500 polynucléaires et atteignant 1.000 à 1.500 pour les points importants.

dre d'établir un pourcentage rapide des éosinophiles, ceuxci ne pouvant passer inaperçus, même à un grossissement un peu faible.

Le polynucléaire amphophile ne doit pas être confondu avec l'éosinophile vrai. Son noyau, coupé par de profondes et nombreuses échancrures, haut en couleur, ne ressemble pas au noyau pâle et peu lobé de l’éosinophile, ses granulations se montrent comme une fine poussière rose disséminée dans le protoplasma et non comme de gros grains rouges occupant toute la cellule.

Puzpe pe pouve. — Nous nous sommes servis de la pulpe de Fasciola hepatica préparée de la façon suivante : Les douves extraites du foie de mouton sont lavées au sérum, puis broyées et inoculées en masse dans le tissu cellulaire sous-cutané de la patte d’un cobaye.

Courbe I. — Un cobaye adulte (1 an environ) est inoculé avec le produit de broyage d’une douve. Avant l'inoculation, le sang contenait 2,5 % d'éosinophiles. La réaction est maxima dans les environs de la vingt-deuxième heure (14,5 %).

La descente est lente, à la soixante-dixième heure on note encore 9.40 % d'éosinophiles. Il est pratiqué à ce moment une deuxième inoculation, au même point que précédemment et dans les mêmes conditions, mais avec le produit de deux douves. Après une chute rapide (5,85 % d'éosinophiles deux heures après l'injection, et 4 % à la ‘vingt-deuxième heure) la courbe remonte pour atteindre 18 %, puis baisse lentement, ne revenànt dans les environs de la normale qu’à la deux cent quarantième heure. Une troisième inoculation permet de reproduire une

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NT éosinophilie sanguine de 13 %, après un crochet de descente qui pourrait être considéré comme douteux, étant donnés les chiffres sur lesquels il porte. À noter que dans ce dernier cas les trois douves aavient été conservées dans la glycérine pendant une quinzaine de jours.

Courbe II. — L'animal en expérience est un jeune cobaye (1 mois 1/2). Les inoculations sont faites dans les mêmes conditions que précédemment.

Sang avant expérience, 2.4 % d'éosinophiles.

La première inoculation de pulpe de deux douves fraî- Nombre

d’éosinophiles

°/ des polynueléaires

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jeune cobaye)

Course II. — Pulpe de Douves

nt Res ches nous donne, en vingt heures, 14 % d'éosinophiles qui tombent rapidement à 2 % à la soixantième heure. Le deuxième extrait provient de deux douves conservées quatre jours dans la glycérine. La réaction, rapide, monte à 28 % et la courbe est revenue à la normale au bout de quarante-huit heures.

Nouvelle inoculation de trois douves conservées. La réaction, aussi rapide mais moins intense, n’atteint pas cOC:

La quatrième infestation, faite avec des douves fraiches, donne, après un brusque crochet de descente, une ascension rapide, mais le cobaye étant atteint d'infection suraJoutée, les examens de sang ne sont pas continués de façon rigoureuse. On note cependant, à la vingt-troisième heure, environ 30 % d’éosinophiles. L'animal meurt.

L'autopsie montre une quantité considérable de cellules à granulations + dans la moelle osseuse des différents os, fémur, os du bassin, mais surtout sternum et clavicule ; on peut évaluer ces cellules acidophiles à la moitié des éléments blancs granuleux.

EXTRAITS AQUEUx. — Les douves sont, après lavage au sérum, broyées dans l’eau physiologique. On élimine par centrifugation les particules solides et le liquide est inoculé à un cobaye ; les courbes obtenues sont analogues à celles que nous venons de donner. Réaction maxima entre la vingtième et la trentième heure, atteignant 104 41e .

EXTRAITS ALCOOLIQUES. — Les extraits alcooliques dont nous nous sommes servis ont tous été préparés de la

Pay NES manière suivante : les douves, lavées au sérum, sont broyées au mortier en présence d'alcool absolu (1), puis le liquide est centrifugé jusqu'à parfaite limpidité. L'évaporation à sec, dans le vide, ou plus simplement à l’étuve à 37°, donne un résidu qui est inoculé en suspension dans du sérum.

Courbe III. — Inoculation dans le tissu cellulaire souscutané d’un jeune cobaye (deux mois) d'un extrait équi-

Nombre d’éosinophiles °/o des polynucléaires

Injection d’extrait alcoolique …… de 8 Douves Injection d'extrait alcoolique dé 3 Douves.

Course Il. — Extrait alcoolique (jeune cobaye)

(1) L’addition d’un peu de sable fin facilite beaucoup le broyage.

PEMTOURES valent à huit douves. A la vingt-deuxième heure, réaclion maxima 24 % ; avant que la courbe ne soit descendue à la normale, il est pratiqué une nouvelle injection (valeur de trois douves), quarante heures après, on note 33 % d'éosinophiles. Cinq jours après, l'hyperéosinophilie a disparu.

Ces expériences répétées plusieurs fois nous ont toujours donné des résultats comparables, et la courbe que nous reproduisons n'est qu'un type de ce que nous avons observé.

EXTRAITS ÉTHÉRÉS. — Les extraits préparés comme ie précédent, mais en remplaçant l'alcool par l'éther, n’ont pas produit d'éosinophilie sanguine chez les animaux en expérience, même après plusieurs injections.

EXTRAITS XYLOLÉS. — Même préparation. Pas de réaction. $

EXTRAITS CHLOROFORMIQUES. — Pas de réaction.

PULPE GLYCÉRINÉE. — Nous n'avons pas obtenu d’ex-

Waits glycérinés vrais, le liquide injecté contenant toujours en suspension quelques débris de douves qu’un fill'age sous pression aurait seul pu éliminer. Signalons cependant une réaction de 19 % d'éosinophiles obtenue à la vingt-unième heure par une injection de six douves broyées dans la glycérine et en partie éliminées par une longue centrifugation.

Nous voyons, d’après ces courbes, qu'on peut obtenir de très fortes éosinophilies sanguines par injections d'extrails de douves. Ceux-ci agissent sur la moelle osseuse, dans laquelle on trouve une augmentation considérable des myclocytes acidophiles. Il nous a semblé que les

de.

réactions aux toxines vermineuses sont plus intenses, plus-æapides, mais moins durables chez les sujets jeunes.

L'éosinophilie maxima se produit entre la vingtième el la quarantième heure, le plus souvent autour de la vinghième heure. Sa disparition varie suivant les sujets.

La deuxième inoculation a toujours produit une réaclion supérieure à la première, même quand les doses ont été moins fortes. On peut supposer que la moelle osseuse sensibilisée par les premières Loxines est plus apte à répondre aux nouvelles incitations même plus faibles. La deuxième injection jouerait donc le rôle d'injection tléchainante, comme dans l'anaphylaxie.

À noter que nous n'avons jamais observé d'accidents anaphylactiques graves (convulsions, mort en quelques heures) comme en ont cité certains auteurs (1).

Il n'y a pas de rapport absolu entre la quantité de toxines injectées et l'éosinophilie produite. M. Weimberg et Moore Alexander (2) avaient déjà constaté que la production de l’éosinophilie n’est nullement proportionnelle au nombre de parasites intestinaux. Il est difficile de donner une explication de ces faits.

Reste à rendre compte de l'accident de descente brusque qui a suivi immédiatement une inoculation, lorsque celle-ci a porté à un moment où la courbe était au-dessus de la normale.

Lorsque nous avons signalé, en 1914, cette chute brus-

(1) H. Boccero, Anafilassia da Distoma épatico, Cent. Blalt. j. Bakt., Referate, t. LIT, 1912, p. 374.

(@) M. WewserG et MooRE Acexanner, Quelques données sur l'oésinophilie dans les helminthiases, Bull. de la Soc. de Path. exotique, t. I, n° 8, 1908, p. 459.

Le Sr que de l'éosinophilie (1) nous avions pensé que les éosinophiles du sang étaient attirés localement par les toxines du parasite et que leur nombre restait diminué dans la circulation générale, tant que la moelle osseuse n'avait pas mis en liberté de nouveaux éléments. Mais les prélèvements locaux, pratiqués au moment de la diminution de l'éosinophilie générale, ne nous avaient pas donné de résultats assez nets pour pouvoir prouver notre supposition.

M. Weinberg et P. Seguin (2) notent également « une baisse de l'éosinophilie sanguine parfois considérable à la suite d’une injection sous-cutanée de liquide hydatique. Cette chute attemt son maximum six à huit heures après l'injection, au moment ou l’éosinophilie locale est complèlement établie » ; la chute est plus rapide quand il y a eu des injections antérieures (deux à quatre heures après l'injection) et ces auteurs concluent, après des expériences précises, que l'éosinophilie locale aiguë, alimentée par l'éosinophilie sanguine, provoque un appauvrissement momentané en cellules acidophiles du sang, d'autant plus marqué que la lésion locale est plus étendue et que l'animal est plus immunisé.

C’est la confirmation de notre hypothèse.

Les faits observés par Melnikoff (3), constatant que le nombre des éosinophiles diminue de façon notable sune

(1) J. Baur et R. Taurrues8, Réactions sanguines au cours des intoxications expérimentales par les extraits de Distomes, Soc. de Path. comparée, séance du 10 fév 1914. #

(2) M. WenserG el P. SécuiN, Recherches biologiques sur l’éosinophile, Ann. de l’Inst. Past., t. XXVIII, n° 5, mai 1914, p. 470.

(3) À. Gizserr et M. WemserG, Traité du sang (Article Eosinophilie, par M. Weinberg et M. Léger), Paris 1918.

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heure après l'injection intraveineuse d'extraits de proglotides de Tænia solium, pour remonter ensuite, ne contredisent pas cette théorie, et on peut admettre que dans ces cas les granulations ont été en grande partie

employées dans le sang même à neutraliser les produits vermineux.

Quelques propriétés des extraits de Distomes,.

D'après les expériences dont nous venons de donner les résultats, les toxines distomiennes, au moins celles qui produisent l’éosinophilie, sont solubles dans l’eau et dans l'alcool, insolubles dans l’éther, le chloroforme, le Xylol, puisque les deux premiers extraits ont fourni une réaction sanguine positive qui n'a pas été obtenue avec les trois autres. | :

Nous voyons de plus que la glycérine permet de conserver longtemps une pulpe active, elle présente l’avantage d'empêcher le développement de la plupart deg germes et ne détruit pas les toxines parasitaires. Bien que les réactions des différents sujets à une même dose d'extrait soient assez variables, il nous a semblé que les propriétés éosinotactiques des toxines distomiennes étaient légèrement atténuées par un séjour prolongé dans la glycérine (Voir Courbe I.)

L'extrait. alcoolique, comme nous l'avons préparé, semble par contre toujours égal à lui-même. Le liquide alcoolique, mis en tube scellé après centrifugation, ne s'altère pas, même au bout de plusieurs mois, et on peut ainsi faire des inoculations de toxicité comparables et de doses connues. Il suffit de prélever à chaque expé-

TR, en rience une dose déterminée de liquide, d'évaporer à sec et de mettre le résidu en suspension dans une quantité

quelconque de sérum.

ACTION DE LA CHALEUR (Courbe IV). — Un extrait alcoolique est divisé en deux parties. La première moitié est inoculé à un jeune cobaye. L'éosinophilie sanguine passe de 5,2 % à 17,5 % en vingt-quatre heures et à

Nombre d'éosinophiles °/, des polynucléaires

d © el a LS 2} 7 s 38 Ste 828 S#5 © © © "To+ 0 + EE FREE EE 5 b & É pas, © Ke) Course IV. — Extrait alcoolique avant et après chauffage à 50°

pendant 10 minutes.

25 % en quarante-huit heures. À ce moment, on injecte la deuxième partie qui a été portée dix minutes à 50°. La courbe, au lieu de remonter, comme dans le cas du tableau III, descend comme si l'injection n'avait pas eu

TES lieu. Au troisième jour, on note 10 % d’éosinophiles, 6 % au cinquième jour.

Nous avons répété la même expérience en employant de la pulpe de douve, de l'extrait aqueux, portés 10 minutes à 50°. Dans tous les cas, la réaction sanguine a été négative.

Action de quelques antiseptiques.

Thymol. — (Courbe V). Il est fait un extrait aqueux d'une dizaine de douves. Une moitié du liquide est inoculée à un cobaye. L'éosinophilie sanguine atteint 13 %

Nombre d'éosinophiles °/, des potynucléaires

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Course V. — Extrait aqueux simple et thymolé.

en vingt-quatre heures, elle est encore de 14 % au troisième jour. L'animal en expérience reçoit alors l'autre moitié du liquide, dans lequel on avait mis un petit cris-

Le QU tal de thymol ; douze heures après, l’'éosimophilie est inférieure à 6 %, elle est de 4,2 % à la vingt-quatrième heure. Acide phénique. Iode. — Un extrait aqueux mis en contact avec de l’acide phénique à 0.50 % ne produit plus d'éosinophilie sanguine. Par contre, la solution de lugol diluée à 10 % n’entrave pas la réaction sanguine.

La Courbe VI résume ces deux constatations, Un extrait alcoolique de douves est repris, après des-

Nombre d’éosinophiles °J, des polynucléaires

Injection d'extrait phéniqué à 0,50 °}.

Injection d'extrait 1/10 de Lugol

Course VI. — Extrait phéniqué et iodé.

sication, par du sérum contenant 0.50 % d'acide phénique et imoculé à un cobaye dont le sang contient 3 % d’éosinophiles. C'est à peine si au bout de quarante-huit heures

pe on nole 4.5 % (1). Le même sujet recoit alors une même dose d'extrait, mais repris par du sérum contenant 1/10 de solution de Lugol (2). Vingt-quatre heures après, il y a 12 % d'éosinophiles, qui tombent ensuite à 4,5 % au quatrième jour de l'expérience.

Ces expériences, dont nous venons de donner des exemples, nous montrent la grande sensibilité des toxines distomiennes aux agents physiques et chimiques. Une température de 50° pendant dix minutes suffit à les détruire. Si l’iode aux doses que nous avons employées n'a pas d'action sur elles, une solution même très faible d'acide phénique entrave leur effet. Le thymol, bien qu'insoluble dans l’eau, ne laisse pas subsister les propriétés éosinotactiques. Bien plus, il semble même diminuer l'éosinophilie préexistante. La descente de la courbe VIT a été plus rapide après qu'avant la deuxième injection. En ce qui concerne d’autres parasites, nous ne connaissons comme expériences analogues que celles de M. Weinberg et M. Léger (3). Ces auteurs citent des éosinophilies de 10 à 19 % succédant aux injections d'extraits de sclérostomes chauffés à 60° pendant une heure, trois jours consécutifs. Il est curieux de constater ces différences de sensibilité pour des produits détermi-

nant des réactions analogues.

(1) Cette augmentation légèré porte sur des chiffres si faibles qu'elle peut être discutable. Nous ne l'avons pas observée dans d’autres expériences, peut-être parce que la durée de contact de l’antiseptique et de l'extrait avait été plus longue (quelques heures).

(2) La solution de Lugol dont nous nous sommes servis contenait 0,50 diode et 1 gr. d'iodure de potassium pour 100 gr. d’eau.

(3) M. Wenger et M. Lécer, Action des substances toxiques du Sclérostome sur l'organisme animal, C. R. Soc. de Biol. ft. LXIV, 11 avril 1908, p. 673.

ARE DICROCOELIUM LANCEATUM. — Les extraits de D. lancealum ont été beaucoup moins actifs que ceux de F. hepatica. Les réactions obtenues n’ont pas dépassé, dans un cas, 6,5 % à la vingt-troisième heure pour un cobaye dont le sang contenait 2 % d’éosinophiles (extrait alcoolique), dans un autre 6 % à la vingt-quatrième heure (extrait aqueux). Sang avant inoculation, 2,2 % d’éosinophiles.