MÉTHODE BIOLOGIQUE
Pour déterminer la richesse en vitamine B, d’un produit, les chercheurs utilisent comme régimes dépourvus de cette vitamine des régimes dérivant de celui de SHERMAN et BOURQUIN plus ou moins modifié, à base de caséine, amidon, graisse de beurre et sels minéraux. L. RANDOIN, À. RAFFY, AGUIRREZABA- LA, ont adopté un régime de composition suivante
Amidon : 68 ; caséine : 17 ; graisse de beurre : 9 ; huile de foie de morue : 1 ; mélange de sels d’Osborne et Mendel : 4.
La caséine et la graisse de beurre sont débarrassées des traces de lactoflavine qu'elles contiennent par traitement à la franconite.
L'animal de choix utilisé est le jeune rat blanc de 40 grammes.
Les résultats du dosage par la méthode biologique sont généralement exprimés en unités SHERMAN-BOURQUIN. Etant donné un produit quelconque, seule source de vitamine B, dans une ration, la quantité de ce produit qui ajouté chaque jour permet à un jeune rat de gagner 3 grammes par semaine pendant au moins cinq semaines, correspond à une unité SHERMAN-BOURQUIN. Par exemple, s’il faut chaque jour 2 grammes d’un aliment essayé, 100 grammes de cet aliment correspondent à 90 unités SHERMAN-BOURQUIN,
Méthodes chimiques.
CHARITE et KHAUSTOV prennent une certaine quantité du produit à titrer et qu'ils divisent et lavent à l’eau jusqu’à obtention d’un liquide incolore. Ils extraient ensuite pendant 36 à 48 heures par de l’alcool méthylique dilué. Après centrifugation les autres pigments solubles en milieu alcoolique sont éliminés par lavage au chloroforme. Le dosage colorimétrique est ensuite effectué par comparaison avec une solution de bichromate de potassium, sachant que 0,1 g. de ce sel par centimètre cube correspond à 2 y 37 de flavine par em.
Il existe deux autres méthodes plus pratiques et plus précises de dosage de la lactoflavine
1° Méthode basée sur la transformation de la lactoflavine en lumiflavine par irradiation aux ultra-violets de ses solutions alcalines. Extraction par le chloroforme après acidification, et comparaison de la fluorescence à celle d’une gamme préparée à partir de solutions titrées de lactoflavine.
2° Méthode de VAN EECKELEN et A. EMMERIE, extrayant la lactoflavine par de l’alcool méthylique à 75 p. 100 et détruisant les autres pigments solubles par oxydation en milieu acétique par une solution saturée de permanganate de potasse. Puis comparaison de la fluorescence à celle d’une gamme de lactoflavine.
Nous avons utilisé la première méthode pour le dosage de la lactoflavine dans les principaux aliments et la méthode de VAN EECKELEN et À. EMMERIE pour le dosage de la lactoflavine dans la viande, le poisson et surtout dans l’organisme humain.
Vitamine B, dans les aliments.
L’extraction de la vitamine B, peut être effectuée de deux manières différentes en utilisant de l’alcool méthylique dilué et acidifié : à l’ébullition ou à l’étuve à 37°.
Dans le premier cas comme l'ont indiqué WARBURG et CHRISTIAN, puis KUHN et WAGNER-JAUREGG, la substance broyée est additionnée d’alcool méthylique à 50 p. 100 et le tout est acidifié par de l’acide chlorhydrique jusqu’à obtention d’une solution acide N/10. Ensuite on fait bouillir pendant dix minutes, laisse refroidir à l’abri de la lumière, passe
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sur une gaze et exprime, puis finalement on filtre la solution obtenue.
Dans le second cas comme l’a conseillé G. MURTHY, les aliments divisés sont additionnés d’alcool méthylique à 40 p. 100 et le tout est encore acidifié par de l’acide chlorhydrique jusqu’à obtention d’une solution acide N/10. On met à l’étuve à 37° pendant 24 heures et on termine comme précédemment pour obtenir une solution limpide.
Cette seconde méthode nous a paru plus pratique pour le traitement des produits très riches en hydrates de carbone (riz, maïs, patate, etc.).
La solution de lactoflavine limpide étant obtenue, elle est rendue alcaline décinormale par addition d’une solution de soude, Puis la solution alcalinisée est exposée aux ultra-violets sous une épaisseur de 8 à 10 mm., dans une cuvette entourée de glace et placée à 30 centimètres de la lampe. L’'irradiation dure 20 minutes.
Au bout de ce temps la solution est de nouveau rendue acide et décinormale par de l’acide chlorhydrique.
La lumiflavine qui s’est formée au cours de cette irradiation aux dépens de la lactoflavine par perte du chaïînon ribose est extraite par agitation avec un volume connu de chloroforme.
La solution chloroformique présentant toujours un trouble doit être rendue parfaitement limpide avant de comparer la fluorescence jaune de la lumiflavine à celle d’une gamme obtenue dans les mêmes conditions à partir de solutions de üitres connus en lactoflavine. Sinon au cours de l’exposition aux ultra-violets, il se produit des phénomènes de diffusion.
Il est impossible d'utiliser la filtration sur papier, les papiers filtres adsorbant plus ou moins la lumiflavine : comme l'ont fait remarquer GENEVOIS et FLAVIER. Ces auteurs recommandent la filtration sur certaines étoffes de piqué.
Le trouble du chloroforme imputable en majeure partie à de Peau, peut être éliminé par agitation avec du sulfate de soude anhydre comme l’ont conseillé C. WiLzsox et, K. Roy.
Pour préparer la gamme de lumiflavine il ne faut pas parür d’une solution-mère de lumiflavine que l’on dilue et qui a été obtenue à partir d’une solution de lactoflavine de titres connus. En effet de cette façon on commettrait une erreur qui ne serait pas compensée, car au cours de l’irradiation la tota-
lité de la lactoflavine n’est pas transformée en lumiflavine et le pourcentage de perte semble d'autant plus grand que la teneur en lactoflavine de la solution irradiée est plus faible.
Nous avons préparé une gamme en irradiant des solutions contenant
10 +; — 7 ÿ — 5 y de lactofla-
vine et l'extraction a été effectuée de telle façon que la lumiflavine formée soit contenue dans 10 em de chloroforme.
