CHOIX DES PROCÉDÉS A METTRE EN ESSAT

Nous nous sommes donnés comme but dans cette étude de longue haleine la recherche du moyen à la fois le plus pratique et le plus sûr de déceler les états anaphylactiques du nourrisson, au lait de vache. Nous avons étudié successivement tous les procédés déjà employés dans la recherche de l’anaphylaxie chez l'adulte. procédés que nous venons de passer en revue dans ce bref historique. D’emblée nous en avons écarté deux, malgré leur valeur intrinsèque : la recherche de la crise hémoclasique et la réaction à l’injection sous-cutanée de lait.

Comme nous l'avons dit plus haut, la recherche du choc hémoclasique, si elle a une valeur capitale chez l'adulte présente chez le nourrisson des, difficultés telles (prise de la tension artérielle, recherche de la leucopénie digestive) qu’elle ne peut être utilisée comme moyen pratique, sauf peut-être au moment des accidents aigus ; mais dans ce Cas, le simple examen clinique du nourrisson nous renseigne suffisamment sur son état.

L’injection sous-cutanée au lait de vache pourrait servir de critérium incontestable, mais les accidents généraux qu'elle entraîne presque toujours ont un

caractère tellement impressionnant que nous ne saurions prendre la responsabilité de la recommander dans la pratique journalière comme un moyen de diagnostic. Nous rappelerons à ce sujet, les observations de M. Genevrier qui chez une enfant intolérante pour le lait a vu une injection sous-cutanée de vingt gouttes de lait déterminer quelques heures après un état grave, avec collapsus ; de M. Weill-Halle qui, ayant pratiqué chez un nourrisson de 13 mois,. présentant de l’intolérance pour tous les laits, une injection sous-cutanée de 1 centimètre cube de lait, a déchaîné des accidents d’une violence extrême avec éternuements, toux spasmodique, vomissements, état lipothymique et cyanose persistant pendant deux jours: de M. Henri E.emaire qui a vu des accidents impressionnants survenir après l'injection de 1/3 de centimètre cube de lait. Nous-même, dans le service du Professeur. Marfan, avons pu assister à une crise très violente chez un enfant de six mois auquel on avait iniecté 1/4 de centimètre cube de lait de vache, comme traitement de son intolérance. Enfin, MM. Bouchut et Bonafe, à la Société Médicale des Hôpitaux de Lyon, viennent de rapporter un cas de mort chez un vieillard, il est vrai, survenu à la suite d’injections sous-cutanées de lait. Celà n’a “rien de surprenant pour qui connait les accidents si alarmants déclanchés parfois par la simple ingestion d’une cuillerée à café de lait chez un enfant sensibilisé. Il nous semble, quant à nous, tout naturel de penser que la voie sous-cutanée étant toujours plus active que la voie buccale lorsqu'il s’agit d'une substance étrangère quelconque, il serait vraiment extraordi-

najre qu'il n’en fût pas de même pour un lait hétérogène.

Nous éliminerons aussi de ces travaux la recherche des précipiitnes dans le sang du nourrisson ; ce procédé nous paraît encore trop peu Constant pour que nous puissions en tirer parti. Les auteurs nous semblent très sceptiques quant à ses résultats qui parfois sont négatifs chez des sujets nettement anaphylactisés, et positifs chez des sujets normaux. Bien plus, d’aprés M. Guy chef de laboratoire à l'Hospice des Enfants- Assistés, il se produit souvent des précipitations spontanées qu'il attribue à la nature du verre des tubes employés.

Nous nous en sommes donc tenus à faire l'étude la plus complète possible de la cuti-réaction, de l'intradermoréaction, et plus tard de la recherche de l'anaphylaxie passive. Nous décrirons plus loin la technique que nous avons employée et les résultats que nous en avons obtenus.

20 CHOIX DES SUBSTANCES A. — Culi-réaction

a) Lait pur slérilisé. — Tout d’abord nous avons utilisé le lait tel qu'il étail absorbé par le nourrisson, c’est-à-dire sférilisé ordinaire, Gallia ou Lepelletier, selon les cas.

C’est à dessein que nous nous sommes abstenus d'employer le lait cru, car nous ne connaissons pas de moyen pour l’obtenir stérile, si ce n’est en le filtrant à la bougie Berkefeld, procédé fort peu pratique, car il ne permet d’en obtenir que des quantités minimes, le filtre se colmatant très rapidement. Nous n’avons.

pas voulu non plus, employer des laits de vache soidisant stériles, car les plus pauvres en germes, malgré toutes les précautions d’aseptie prises, en contiennent encore 2.000 pour le moins par centimètre cube. Et, comme l'organisme humain est un milieu de choix, on conçoit quel peut en être le développement pendant que la résorption s'effectue, développement qui peut fausser singulièrement le chiffre des réactions positives obtenues.

b) Lait concentré stérilisé. —— Comme les résultats obtenus ne nous avaient guère satisfaits; nous avons pensé, d'accord avec Kleinschmidt, que les substances protéiques étaient diluées en excès dans le lait pour pouvoir pénétrer en quantité suflisante par une simple scarification, c’est pourquoi nous avons tenté des cutiréactions au lait concentré stérilisé, non sucré, Nestlé.

c) Composants du lait de vache. — Dans l'espoir d'obtenir une réaction vraiment spécifique nous avons essayé ensuite des cuti-réactions avec certains composants du lait de vache, protéiques ou non, qui étaient destinés aux intradermo-réactions : nous donnerons donc plus loin, au chapitre de l’intradermo réaction les procédés par lesquels ces substances étaient obtenues.

Nous avons ainsi employé successivement la lactalbumine, la lacto-globuline, la caséine. Pour les rendre plus absorbables, ces substances étaient en solution phosphosodiques ou en solution déci-normale de soude. Nous avons aussi fait des cuti-réactions au beurre.

B. — Intradermo réactions a) Lait de vache stérilisé (ordinaire, Gallia, Lepelletier). Même méthode que pour la cuti-réaction. Nous em-

ployons le lait qu'absorbe le nourrisson, stérilisé, pour les mêmés raisons. Nous nous sommes aperçu bien vite que nous obtenions autant de réactions franchement nettes, que d’intradermo-réactions pratiquées, chez tous les enfants, à part deux nouveaux-nés ictériques qui ne réagirent pas. Nous avons donc pensé que le lait de vache chauffé se comportait comme une substance non spécifique, irritante pour le derme.

b) Lait de chèvre stérilisé. — Pour nous assurer de la non spécificité de la réaction au lait de vache stérilisé, nous avons employé du lait de chèvre pur, stérilisé à l’autoclave, à 110° pendant 10 minutes, lait qui n’était entré dans l'alimentation d’aucun de nos nourrissons. c) Laïl de vache stérilisé dilué (dilution au 1/1.000 et au 1/10.000). — Pour exclure une cause d’erreur tenant à l’irritabilité possible du derme pour le lait pur, nous avons dilué le lait au 1/1.000 et au 1/10.000 avec, soit du sérum physiologique, soit de l’eau distillée stérilisée.

d) Composants du lait de vache. — La réaction non spécifique observée avec le lat de vache pur dilué pouvant masquer une réaction spécifique propre à l’un des éléments du lait, pris isolément, nous avons essayé successivement tous les éléments du lait extraits par les méthodes chimiques appropriées et les plus

rigoureuses.

Composants non proléiques

Lactose : solution à 4,5 %:

Acide lactique : solution à 1,80 0 00.

Nous avons pratiqué cette dernière épreuve

pour éliminer le facteur acidité du lait dans la réaction.

Beurre : extrait par la méthode d'Adam.

Nous avons employé des solutions pour le lactose et l'acide lactique se rapprochant des taux de ces substances dans un lait de vache normal.

Composants protéiques (1) :

Laclalbumine, lactoglobuline, caséine

Préparation de la caséine (technique de Hammarsten) (Zeitt. Phys. ch. t. VII, p. 227).

90 cm3 lait son étendus de 150 cm d’eau distillée.

Ce mélange est additionné d'acide acétique à 1 % jusqu'à une teneur d’environ 1 0/00 (soit 5 em au maximum), en agitant tant qu'il se fait un précipité et en évitant un excès.

Laisser reposer et filtrer.

Le précipité, détaché du filtre, est trituré avec quelques gouttes d’ammoniaque, et additionné de 20 em d'eau pour dissoudre.

Filtrer sur un filtre mouillé à plusieurs reprises, si c’est nécessaire, jusqu’à obtenir un liquide limpide ou opalescent.

On a ainsi de la caséine à peu près pure que

lon recueille sur un filtre; déshydrater

(1) M. Guy chef de laboratoire à l’hospice des Enfants Assistés nous a préparé la lactalbumine, la lactoglobuline et la caséine. Nous tenons à le remercier de l’aide qu'il a bien

voulu nous apporter.

par lavage à l'alcool et à l’éther, puis sécher, sous une cloche à froid, en présence de SO*H®.

Séparation de la lactalbumine et de la lactoglobuline (technique de Sebelien).

Saturer le lait par NaCI pulvérisée : séparer par filtration la coagulation de caséine.

Dans le filtrat ajouter du sulfate de magnésie pulvérisé à saturation : précipité de lactoglobuline à la température de 309.

Ce précipité égoutté sur un filtre, est lavé, avec une solution de sulfate de magnésie, puis essoré entre des doubles de papier filtre. La globuline redissoute dans le moins possible d'œæu tiède sera isolé par dialyse, sous eau courante jusqu'à ce qu’elle ne renferme plus de sulfate.

Le liquide filtré renferme de l’albumine.

L’additionner d’acide acétique à 1 % jusqu’à une teneur de 0,25 % environ; le précipité recueilli sur un filtre est égoutté, essoré et redissout dans le moins possible d’eau tiède. La solution agitée avec du sulfate d’ammoniaque pulvérisé en léger excès, donne un nouveau précipité d’albumine.

Le recueillir sur le filtre. et le laver avec solution saturée de sulfate d’ammoniaque.

Le porter dans dialyseur avec quelques gouttes de chloroforme et dialyser contre courant d’eau jusqu’à disparition des sulfates.

Nous avons injecté la caséine en solution phosphosodique, avec une concentration double de celle du lait ;

la lactoglobuline en solution phosphosodique ; la lactalbumine en solution aqueuse. La lactalbumine et la lactoglobuline qui avaient été extraits de 100 cc. de lait se trouvaient en définitive dans une solution de 10 ce. Particularité à signaler, il est impossible d'obtenir avec du lait chauffé une caséine pure, séparée de toute trace de lactalbumine et de lactoglobuline.