FIXATION

Il n’y aura d'intérêt à préparer des lames en vue d’une coloration que si l’on a un prélèvement très riche en Protozoaires.

Dans ce cas, on l’étend en couches très minces sur une lame au moyen d’une lamelle en opérant comme pour un irottis de sang, mais en prenant des précautions minutieuses afin de ne pas dilacérer dans l’étalement la cellule si fragile de l Amibe ou du Flagellé ; il faut procéder par

petites saccades ou par hachures et sans appuyer. Il y a là un tour de main spécial à acquérir.

Le frottis ainsi préparé doit être fixé humide, avant tout desséchement qui rétracterait la cellule de l’animalcule et la rendrait méconnaissable.

La fixation peut se faire soit par les vapeurs d’acide osmique, soit par le liquide de Bouin.

FIXATION AUX VAPEURS OSMIQUES.— L’acideosmique, ou mieux tétroxyde d’osmium, se présente sous l'aspect de cristaux jaunâtres d’une manipulation délicate, car ce corps est très volatil et ses vapeurs très irritantes peupent déterminer des conjonctivites graves. De plus, étant un oxydant énergique, toute trace de matière organique le réduit.

Il tue rapidement les cellules, fixe bien le cytoplasme, mais moins bien le noyau.

Pour obtenir la fixation de la préparation, on pose la

lame renversée sur un bocal à large ouverture dont le fond est garni de perles de verre pour augmenter la surface d'évaporation des quelques centimètres cubes de solution osmique qui y ont été placés : durée de l'exposition : 30 secondes à une minute.

FIXATION AU LIQUIDE DE Bouix. — Cette fixation, qui est recommandable pour la coloration ultérieure à l'hématoxyline ferrique, s'obtient en immergeant le frottis humide dans le liquide de Bouin, dans lequel on peut le laisser une heure et plus sans inconvénient,

Au sortir du fixateur, on le porte dans un alcool à 900 auquel on a ajouté quelques gouttes de solution aqueuse saturée de carbonate de lithium, ce qui trouble l'alcool. Les frottis ajoutés, le trouble disparaît et l'alcool jaunit ; on ajoute peu à peu du carbonate de lithium, jusqu’à ce que le précipité ne se dissolve plus. Le frottis est alors décoloré. Laver à l'alcool à 70° dans lequel, du reste, peuvent être conservés les frottis jusqu'au moment où l’on veut les colorer.