AO TECHNIQUE

ment des coupes. En cas de symptôme alarmant, 1l suffit, en général, d'interrompre l’éclaircissement, et, après lavage, de raffermir la gélose dans l'alcool, ou de laisser sécher complètement les lames collées à la méthode de GAULE, ce qui assure définitivement l’adhérence. Puis on continue l’éclaircissement jusqu’à résultat complet.

$ II. — Coloration.

J'ai constamment employé, pour le montage des coupes, la gelée de glycérine et j'ai dû choisir en conséquence les colorants à employer.

Trois méthodes ont été particulièrement mises en pratique pour cette coloration : hématoxyline de ExrLicH ; 2° rouge Congo et violet de gentiane citrique ; 3° bleu de méthylène après mordançage au tannin.

1° De la première méthode je n'ai rien de particulier à dire. La gélose collante ne s’y colore que légèrement ;

2° Le rouge Congo employé seul, comme l'a fait M. L.-J. LÉGER (34), pour l'étude des éléments lbériens, résiste mal au montage dans la gelée de glycérine. Mais on peut, au contraire, le fixer très solidement sur les tissus si on combine son emploi avec celui du‘violet de gentiane en solution cilrique, ce qui donne en même temps une double coloration. |

J'emploie deux bains, l’un et l’autre trés fortement colorés.

1° Une solution de violet de gentiane dans de l’eau distillée fortement acidulée avec de l'acide citrique ;

2° Une solution de rouge Congo dans de l’eau distillée. La solution faite, je l’alcalinise très légèrement avec une solution de potasse, juste assez pour que le bam devienne franchement rouge.

La lame à colorer séjourne : 1° deux minutes dans le bain de gentiane ; 2° après passage rapide dans de l’eau ordinaire (pour éviter le mélange des deux bains) deux minutes dans le bain de Congo ; 3° deux minutes dans le même bain de gentiane, après passage rapide, ici encore, dans de l’eau ordinaire, pour éviter de transporter des gouttes de bain rouge dans le bain bleu.

En général, on n’a plus alors qu'à laver dans l’eau ordinaire, pour ensuite monter. Mais on peut également, si la coloration ne paraît

pas suffisante, ie un nouveau passage au bain rouge puis: au bain |

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“A tubes libériens sont si fortement colorés, méme dans les parties très jeunes, qu ‘ils deviennent presque opaques, alors même que les coupes sont très minces. Les trachées et les cuticules tranchent assez nette-

ment en violet sur les parenchymes, qui sont d’un rouge lie de vin

5 différent de la couleur normale du Congo.

La gélose collante ne se colore pas d’une façon notable. Les grains d'amidon qui peuvent avoir résisté quelquefois à l’eau de Javelle

restent également incolores. Il est bon de faire le dernier lavage sous

un filet d’eau courante pour enlever un précipité peut qui apparait assez souvent. /

3° Le bleu de méthylène, employé seu, est un colorant de la matière pectique (MANGIN). Mais la tinction ainsi obtenue s’efface en général sous l’action de la glycérine. En bain acide, le bleu de méthylène, comme le violet de gentiane, est un colorant assez électif des tissus incrustés, bois, cutine et suber.

Mais, sion emploie pour dissoudre le bleu de méthylène une solution de tannin dans de l’eau distillée, le bain ainsi obtenu colore très énergiquement tous les tissus, principalement les parenchymes, et la tinction ainsi obtenue est stable dans la glycérine. Elle résiste même momentanément à l'alcool absolu. Il arrive d’ailleurs souvent que des tissus végétaux conservés dans l'alcool fixent naturellement le bleu de méthvlène. Le mordancage s’est alors produit spontanément dans l’alcool, aux dépens du tannin renfermé dans Jes cellules. Mais le tannin peut n'être pas seul en cause dans ces conditions

D'ordinaire, j'opère en deux temps :

1° La lame séjourne quelques minutes dans une solution de tannin dans l’eau distillée.

2° La lame, simplement égouttée, est portée dans une solution de bleu de méthylène dans de l’eau distillée. (On peut ajouter à ce bain un peu de tannin, mais alors il faut faire dissoudre d’abord ce tannin, puis, après dissolution bien complète, ajouter le bleu). Un lavage à l’eau ordinaire termine l'opération.

Cette méthode ne s'applique pas aux coupes collées par la méthode de GRavis, parce que la gélose prend le bleu. J'ai eu, d'autre part,