I. — CHOIX DE LA SOLUTION-TAMPON
Préparation.
Nous avons employé deux sortes de -solutions-tampon dont voici les formules :
A) Tampon n° 1 aux phosphales de pl = 7,15 et de force iomquéen 10 18 UE LE
Phosphate disodique ? OH, 0,023 M soit : 4,095 g./litre Phosphate monopotassique JON MLS Ole Chlorure de potassium 0,05 M D NEA NET »
B) Tampon n° 2 au véronal el acétale de pH = 8,6 et de m'= 00, 144)":
VÉTONAES OUEST rare 29,428 g.
Aiéblate dé SOdIUnNeTist he te 19,428 g.
Solution décinormale de CIH ..... 180 ml.
PAR S INSEE NE q.S.p. 3 litres
DAS Nue
Vérification du pH (1).
Nous avons mesuré les différences de pit se produisant au sein du tampon véronal-acétale après une électropiorese
de 14 heures.
Compartiment central Chambre à électrodes
COTÉPANOTENMME CRE DHN=YS;0 pH = 8,3 CotéerCathodene ee DH $ DÉ=A00
Si l’on mélange alors les solulions-Lampon contenues dans chacun des compartiments, le pit trouvé est de nouveau de 8,6.
On constale ainsi l'efficacité de la eloison séparant la chambre à électrodes dû compartiment où trempent les extrémités des bandes. Pour compenser les modifications de pH se produisant près des électrodes, on inverse les pôles de la cuve à chaque électrophorèse.
Conservation des solutions-tampon.
Les solulions-tampon ainsi préparées el vérifiées se conservent difficilement à la tempéralure ordinaire. Elles présentent au bout de quelques jours un trouble important qui cède cependant à la filtration. £
Nous avons essavé la conservalion au frigidaire en flacons stérilisés pendant 3 heures à 120° (chaleur sèche), bouchés émeri et paraffinés. Le pH vérifié au moment de la préparation élail rigoureusement de 7,15 pour le Llampon aux phosphales el de 8,6 pour le lampon véronal-acétate. Après deux mois de conservation, le’ tampon phosphalé n'élait pas alléré el avait Loujours un pH égal à 7,15. Par contre, le tampon véronal-acélale présentait un dépôt Important el accusait un pH de 9. Ki la conservation d’un tampon phosphalé est relativement aisée, par contre celle d'un lampon au véronal est fort délicate.
Pour éviter loute altération, les cuves d'électrophorèse sont vidées entre chaque opération et le tampon est, pendant ce lemps, conservé à la glacière. Quelle que soit sa fréquence d'ulilisalion, il est renouvelé tous les 8 jours.
(1) Toutes nos vérifications de pH ont été faites à l’aide du potentio-pH-mètre système CARPENI-CONSTANT, Ets Jouan, constructeurs. S |
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Choix d'une solution-tampon.
L'électrophorèse d'un sérum doit être faile en lampon véronal-acélate de pH = 8,6 (5) si l'on veut effectuer commodément la séparation de 5 fractions : albumines, globulines a, &, 8 el y. Le tampon aux phosphates de pe, 15ene. permet: pas toujours de distinguer 3, et Slobulines. Nous verrons cependant l'avantage qu'il v a à l'utiliser pour Pextraction et l’électrophorese des pro- (éines Hissulaires (voir 2° partie).
Nous avons par ailleurs constaté que, selon que l’éleclrophorèse est conduile avec l’une ou l’autre de ces solulions-lampon, l'intensité du courant d'électrolyse, prise aux électrodes, est différente :
DIFFÉRENCE DE POTENTIEL — 1{1( v.
INTENSITÉ nn — om "
Tampon phosphales Tampon vér.-acél.
1 seule bande dans la cuve 2,2 mA 1,5 mA 2 bandes dans la cuve 4,2 mA 2,59 mA
La solution-lampon servant à lélectrophorese doit done êlre appropriée à la nature des protéines à étudier. De plus, la conservation difficile du lampon au véronal nécessite son renouvellement tous les 8 Jours.
