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ù .. Dans cette introduction avant d'indiquer les grandes lisnes de notre travail, nous voudrions exroser brièvement l'intéret des recherches biochimiques faites au niveau des structures celluliires et les raisons qui nous ont conduit pour de telles recherches à l'étude de l'analyse granulométrique,

L'emploi du microscope électronique en biolosie a permis de mettre en évidence l'extrême complexité de la cellule qui reste dans l'état actuel de nos connaissances la véritable unité de mutière vivante, Le perfectionnement de cet appareil, la mise au point de nouveaux procédés cytologiques d'observation ont per= mis des progrès considérables au cours de ces toutes dernières années, au point de révéler l'état structuré d'orgunites cytoplasmiques dont l'existence même était insouncçconnée auparavant,

Il est banal de rappeler qu'à toute différentiation morphologique correspond une différentiation fonctionnelle, physiologique, Ceci est vrai à toutes les échelles depuis l'animal supérieur jusqu'à la cellule, À la complexité que révèle le mi croscope électronique correspond sans aucun doute une spécialisation du rôle de chaque type de structure et au sein de Ces structures cette affirmation restera encore valable,

La localisation en tel lieu, sur telle structure définie de certains constituants et systèmes enzymatiques complexes et la réalisation en ce lieu des conditions physico-chimiques permettant l'orientation d'une réaction dans un sens préférentiel. doivent, selon nous, conditionner le rôle de cette structure dans le fonctionnement cellulaire. Par oprosition à cette différentiation des diverses structures, le cytoplasme dans lequel elles baïignent est homogène, possède ses activités enzymatiques propres et nous apparaît comme un milieu intérieur devant assurer la coordination, la régulation des diverses fonctions, permettant par là même le maintien de l'organisation caractéristique de l'état vivant,

L'étude de la constitution et des propriétés de chaque type de structure décelable, aïinsi que de la phase cytoplasmique, doit donc permettre de mieux pénétrer les mécanismes intimes - pré sidant à certains des phénomènes caractéristiques de la vie - qui échappaient aux investigations faites à l'échelle du tissu, Une telle étude a été rendu possible depuis les travaux de CLAUDE (19) qui en 1941 a montré que Lion pouvait par centrifugations fractionnées séparer les noyaux, les mitochondries et les microsomes, du cytoplasme. Ces belles recherches de CLAUDE ont ouvert un vaste champ d'investigation aux biologistes. Si de nombreux faits concernant la localisation dans la cellule de tel constituant ou

de telle activité enzymatique ont été rassemblés depuis cette date

seul un petit nombre de conclusions fermes s'en déprage,

En effet pour être significatives, des recherches faites sur les structures isolées supposent réalisées les trois conditions suivantes

- intégrité des structures, - pureté des fractions, - isolement quantitatif de ces fractions,

Les conclusions théoriques concernant la localisation élective de certains enzymes et par suite le rôle des structures, sont fonction de 1: valeur de la méthode et dans son état primitif celle de CLAUDE est loin de répondre aux conditions énumérées cidessus,

Nous avions abordé des recherches pour préciser le rôle des acides nucléiques dans le fonctionnement cellulaire, mais nous nous sommes rapidement aperçus qu'en dépit des différentes modifi cations introduites par HOGEBOO!M et coll., la méthode de CLAUDE n'était pas adaptée au but que nous poursuivions., Nous nous sommes donc attaché à tons iorer afin de satisfaire au maximum aux trois conditions fondamentales, Dans la première partie de ce travail sont décrites les deux techniques bas es sur le principe des centrifugations fractionnées auxquelles nous avons «bouti : l'une permettant une meilleure séparation des différentes structures, dans un état de plus grande pureté et aussi quantitativement que possible, l'autre conduisant à l'obtention de noyaux pirfaitement purs.

Mais au cours de ces recherches il nous est apparu que le principe même sur lequel repose ces méthodes rend impossible de concilier pour l'ensemble des fractions cellulaires les trois conditions précédemment définies et nous avons été amené à nous adresser à un principe différent : celui de l'analyse granulométrique. L'analyse granulométrique ne conduit plus à l'isolement de fractions pures, mais permet par l'étude des varistions de composition des culots en fonction des temps de centrifugation de calculer la répartition des constituants suivant la taille des particules.

Part rapport: nude sranulométrie classique, nous avons eu résoudre des difficultés de deux ordres :

: les problèmes posés par la nature du matériel biologique, les particules possédant des propriétés osmotiques, et une constitution Et variable avec leur taille,

- . problèmes théoriques, les solutions mathématiques existantes n'étant pas applicables au cas des tubes inclinés utilisés dans les centrifugeurs à srande vitesse,

La 2e Partie de cette thèse est consacrée à l'exposé des solutions que nous avons de et à leur vérification expérimentale,

La 3e Partie comporte l'application de la méthode granulométrique à l'étude de la répartition de l'acide ribonucléique et des protéines dans la cellule hépatique du rat normal. Nous avons discuté la signification SAR tU des fractions que nous avons mises en évidence,

Ce travail a été poursuivi à l'Institut de recherches sur le Cancer du C.N.R,S. et de l'Université de Paris, dans le département de Physiologie et Chimie cellulaires que dirige Mademoiselle E, LE BRETON, Maître de conférences à la Faculté

des Sciences,

Il m'est agréable rire ici mon affectueuse gratitude à Mademoiselle LE BRETON qui m'a accueilli et a orienté mes recherches vers le problème des structures cellulaires, Elle ne m'a jamais ménagé ses conseils ni son temps et j'ai toujours retiré le plus grand bénéfice des entretiens que j'ai eus avec elle, |

Travaillant depuis 1949 dans un Institut qui relève du C.N.R.S., je ne saurais oublier tout ce que je dois à cet organisme,

L'atmcsphère de cordialité qui règne dans le laboratoire m'a été précieuse, j'en remercie tous mes camarades, Mes remerciements ER plus spécialement à Y. MOULE et J. SCHNEEBELI qui m'ont fait profiter de leur expérience de la chimie des acides nucléiques et à W. BERNHARD, À. GAUTIER et C, ROUILLER pour leurs examens de contrôle au microscope électronique,

Je voudrais dire à Mademoiselle QUINTIN, iaître de Recherches du C.N.R,S. ma gratitude pour l'intérêt bienveillant qu'elle a bien voulu porter à la lecture de ma thèse et pour les conseils éclairés dont elle m'a fait profiter en ce qui concerne

la partie théorique de mon travail,

Que le Professeur OBERLING, Directeur de l'Institut du Cancer trouve ici le témoignage de ma reconnaissance : il m'a toujours témoigné beaucoup de bienveillance et a mis à ma disposition les ressources de ses services,

| Le Professeur WURMSER a bien voulu me conseiller puis mé faire l'honneur d'accepter la présidence de cette thèse, je lui exprime ici ma profonde gratitude,

Mademoiselle le Professeur CAUCHOIS a accepté de faire partie de mon jury, je voudrais ee de ma respectueuse reconnaissance et la remercier de m'avoir indiqué le sujet de ma deuxième thèse,

RSR RER, L

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