PROPOSEES
VERIFICATION ZXPERI: “NTALE
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Cette 2e Partie consacrée à la vérification expérir.entale des équations établies dans la Ire Partie, est donnee étulenent comme un exemple de l'application pratique de notre méthode, C'est pourquoi nous montrerons les différents modes possibles d'utilisation des équations proposées.
Nous avons sounis la même suspension à 3 séries de centrifugations effectuées dans des tubes de forme différente :
a) tubes hénisphériques en position horizontale, b) tubes hénispheriques inclinés à 45°, | | c) tubes cylindri.ues à fond plit en position horizontule,
afin de verifier si l'al répartition des tailles des particules calculée dans chaque série de centrifugation conduisait bien aux mêmes résultats et si d'autre part Les résultats obtenus par centrifusation concordaient uvec l: répartition déterminée pur un examen microsconique,
A) Obtention de la suspension Nous avons vréparé une susrension de cellules de levure de bière en homogénéisant à l'appareil de POSTER (76) 2 gr. de levure sèche dans 100 cm? de solution de saccharose 0,88 M (30 p. 100) et en centrifugeant 2 minutes à 1500 t/m, aïin d'éliminer la majeure partie des asglomérats de cellules,
Au microscope cette suspension ne présente plus que de rares agglomérats, la majorité des cellules étant isolées ; les cellules sont de forme ovoîde et leurs dimensions varient de Hour ypour les plus petites à Sh-sur Gu pour les plus grandes, Si on assimile ces cellules à des Sd nes allongés, l'augmentation AS. de leur constante de sédimentation par rapport à
S) = Late) Lai celle de sphères de mêne volume peut être calculée au moyen de l: formule de HERZOG (39)
AS CESR, LE mnt CHU loss use Pere S see
Us Cette augmentation est négligeable
Obs T1001pour Les petites cellules 0,2 p. 100 pour les plus grosses cellules
et nous permet d'utiliser la formule \ÿ ee DES 0e À b
au calcul de leurs diamètres sphériques équivalents, Ceux-ci séront Compris entre 3,3/6br5,3u,
B) Détermination des facteurs de centrifugation
1°) Caractéristiques des tubes
— 0 on me us cn ee 0 mu es A + 0 es un nt ns on ue et eu mn Cu eu out
Les mesures sont faites à 1 mm près pour la détermination de À distance du.fond du tube à l'axe de rotation, et à O,1 mm près pour .la détermination du diamètre et de la hauteur (A - B) de la suspension ; il est inutile de dépasser cette précision car la courbure de la surface libre sous l'effet de la force centrifuge produit un allongement (€) de la distance B de cet ordre d'après l'expression
OÙ D est le diamètre du tube,
Dans ces conditions Ln A/B est calculé avec. une précision de 1 p. 100 environ,
a) Tubes hémisphériques horizontaux
DOS ee CH An e0 mm BJ=,:1900,8,.
on calcule les valeurs utiles suivantes volume de la suspension = 6,0 cm?
A/B Lnb
HI HW fl
# . # . . . “ le] hémisphériques inclinéss PA
b}) tubes Ds uu26s Leon A Era onilt B = 164,6 mm
COUR | à 5 | volume de la suspension = 6,4 cm Duel 026 a = 0,083
c) tubes cylindriques à fond pl t horizontaux D = 30 ra £ 204 mm PB: #=, 0163;2L
robe?
volume de la suspension = 14,6 cm” Le ME Dane nes 1e a = 0,108
2°) Mesure de la vitesse anguläire
Le centrifugeur Internätionsl PR 1 que nous =vons utilisé comporte un co“pte-tour donnint l: vitesse de rotacion en tours par minute = N, La vitesse ansulaïire en radians par seconde est dOnCu) 2mN.
Les indications du compte-tour ont été vérifiées :vec un Stroboscope (Stroboret)* de 500. en 500 tours/minute entre 500 et 4500 tours/minute,
3°) Déterminition de la durée de centrifugetion
me nn me mn ne NN Mn Cut One Lun mn 04e PA mm mue Lu OS mue ns Les lé mu ue mn ou us on né nie me ne = me me mn eue ee © on ©
Cette déterminuition doit tenir compte des périodes d'accélération et de ralentissement du centrifugeur, Nous avons opéré de la façon suivante : pour chaque centrifugation, nous établissons
SAR OsAne--mpt-hneunenr ms (émene dommites 0 + on , ce. memes) 24. mu don sub: raser ca affiner nl «de eu
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# Constructeur : Société de Recherches Mécaniques et Physiques -— 2, Rue Danton - Levallois-Perret (Seine)
une courbe des vitesses de rotation en fonction du temps (exemple, fig, 15).
TA
PRPUTE NUE
Dé o à t} la vitesse croît, nous notons les valeurs Wade 10 en 10.secondes,.De t7..à.t la vitesse reste constante = uw. Nous notons l'instänt t où nous coupons le courant, De E- à to la vitesse décroît, nous notons les valeurs de w' de 5 en 5 secondes,
9 que nous appelons N extension le facteur temps - aura donc pour valeur :
, ©] to Hit C ef (AR 0 1h
le terme entre : parenthèses constitue la correction de temps ;
ce terme toujours négatif en pratique est assez faible pour:
que l'on puisse le négliger dans les centrifugations de longue
durée ,..c test-à-dire de plus. de 20 minutes environ. tn € Nous déterminons les valeurs des intégrales p re dt
et f 2 u1* dt par la je de STHPEON,
Nous avons utilisé le centrifugeur à la température de + L°c, la constance de la température est assurée à SH os Les tubes en position horizontale sont placés dans la tête n° 284 munie de réducteurs de diamètre ; les tubes inclinés sont placés dans la veto nt Gels La suspension de levure est maintenue durant toute l'expérience à la température de 4° est agitée avant chaque prise. Chaque centrifugation est effectuée
Où (@»)
avec 2 tubes, équilibrés rigoureusement pour éviter toute vibration durant la centrifugation, Les décantations sont effectuées le plus rapidement possible après l'arrêt du centrifugeur et avec les précautions indiquées pour éviter toute remise en suspension du culot, Chaque culot est remis ensuite en suspension dans 15 cm d'eau distillée: et centrifugé 20 minutes à 4000 t/m de façon à éliminer le saccharose et à récuperer la totalité des particules, Les culots sont ensuite portés à l'étude à 105° pendant 4 heures et nous déterminons le poids sec moyen des 2 tubes de chaque centrifugation.
Les fractions sédimentées (p) sont calculées par comparaison avec Le poids sec d'un culot obtenu par une centrifugation à grande vitesse (20 minutes à 4000 t/m) d'une partie aliquote de la suspension et lavé pour éliminer le saccharose dans les mêmes conditions que les culots précédents,
20) Résultats
Les résultats sont consignés dans les 3 tableaux suivants, où nous avons fait figurer les valeurs de S, constante de sédimentation critique, calculées d'après la formule
S A" ne
Dci: Le (A) 2 4 fuga- :secon-:rad/sect ut : Correc- : a : S sp. 0: Pionanciroes =: : 2 2rclor : : AUD : : : : LCR, Sa :
1 :1260 : 84,8 :9,08x100:-0,16x100:8,92x100:0,807x10 8: : CNT O re 7h, 3,06 eneOSOË, END OL cine OMe 0002: RR 7 0: 053,5 12,05 mr 00) Ud e OT kb : 720: 39,841,14 - :-0,005 - 11,195 - :6,3hù = ND,500:
tableau 9 à - Tubes hémisphériques horizontaux
M AU dorées TREND EU TT BARRONNAILEETANEE dE re Dar: CON 1: (a) : o RNQUS 5
à 14 vd . ,
Q qe Li e.
5 :1260:83,8:8,85x100:-0,21x100:8,62x100:0,960x10 7: 1 : 6 720: 81. ÉRSTEONLE ED MAIN CR 08:11 66 2320, 960: F4 0 MON ESS DOME A0) PR 10 di re: 2.02 sh 0 7/0: 8 660: 1 0: ue 0 OEM SN EE À 6,58 = SOS:
tablea b - Tubes hémisphréiques inclinés à 45°
(a * ="0,083) :Centrifu-: : EN =, : Correc- : PR - :
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tableau 9 c - Tubes à fond plat horizontaux fé = 0,108) D) Calcul de la répartition
