ET DES PROTEINES DANS LA CELLULE HEPATIQUE DE RAT

Nous avons aprliiué notre méthode d'analyse granulométrique à l'étude de la répartition de l'acide ribonucléique dans la ceTTure es de rat,

qe) Détermination des ficteurs de centrifugation

Toutes les expériences ont été effectuées à la température de 4° (Ÿ 1°) avec le centrifugeur "International PR 1": la tête n° 291 utilisée: porte 4 tubes de “lusteroïd''* moulés, à fond hémisrhérique, inclinés à 45°,

À) Caractéristiques des tubes

diamètre = 24,2 mm À sun 75 mm B = 62,9 mm

valeurs à partir desquelles nous calculons :

voluñe de la suspension : 3,96 cm?

b Rd A a RE CE re

B) Mesure de la vitesse

La tête n° 291 est mûe par l'intermédiaire d'un système ‘“multispeed" dont le facteur de multiplication de vitesse est 4,56, La vitesse lue au compteur étant N tours par minute, la vitesse angulaire exprimée en radians par seconde est

Dre 11,50, 010 0,1775 "0.

C) Correction de temps

La correction de temps a été effectuée pour toute cen-

trifugation d'une durée supérieure à 20 minutes comme il a été indiqué dans la 2e Partie,

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*# acétate de cellulose

2°) Mode opératoire

A) Obtention de la suspension

Nous avons utilisé le foie entier de rat WISTAR, mîle, adulte, Après un jeûne de 24 heures, l'animal est tué par décapitation, Le foie, prélevé immédiitement, est finement coupé aux ciseaux, On introduit 5 gr de ce motériel dans un homogénéiseur de POTTER (76) en verre avec 50 cm? de saccharose 0,88 M, On homogénéise pendant 2 minutes à 1200 tours/minute environ, Dans ces conditions, quelques cellules échäaprent au broyage, par contre les dommages causés aux structures, et particulièrement aux noyaux, éléments les plus fragiles en raison de leur grande taille, sont réduits au minimum.

L'homogénéisat ainsi obtenu est filtré sur coton de verre et le filtre est lavé avec du sacchaurose 0,88 M jusqu'à obtention d'un volume total de 200 cm, Cette filtration a pour effet d'éliminer les débris de tissu conjonctif et les agglomérats de noyaux qui pourraient perturber la sédimentation des particules isolées,

Un examen au microscope à contraste de phase permet de vérifier l'absence d'asglutination des particules et d'évaluer grossièrenent là proportion de cellules intactes,. Lorsque cette proportion est notable, on effectue une numération des cellules et des noyaux afin de déterminer exactement le pourcentage de cellules non broyées et d'effectuer les corrections nécessaires HensTenceloul CÉPLÉ rÉPArTCICIiON

B) Centrifugations

Le nombre de centrifugations effectuées par expérience a varié de 6 à 10 ; les vitesses et les durées des centrifu-ations ont été choisies de facon à explorer successivement certains domaines de constantes dé sédimentation.

L'homopénéisat est agité avant chaque vrise : shasve centrifugation est effectuée avec 4 tubes contenant :4 cm? d'homogénéisat ; les tubes sont rigoureusement équilibrés 2 à 2 pour éviter toute vibration au cours de la centrifugation. Aussitôt après l'arrêt de centrifugeur, les tubes sont décintés avec soin à l'aide d'un dispositif spécial évitant toute remise en suspen— sion des culots, ,

C) Lavage

Il est nécessaire de faire subir un lavage aux cülots pour éliminer le liquide qui les imprègne, Celui-ci contient en effet les protéines et l'acide ribonucléique de la phase homogène qui viendraient fausser les dosages, |

Les 4 culots provénant d'une même centrifusgation sont remis en suspension au moyen d'un piston de verre épousant la forme des tubes et réunis dans un volume total de 4 em? de saccharo- : se 0,88 M.: Cette nouvelle suspension est centrifugée à la vitesse ! maxima du centrifugeur pendant un temps suffisant pour conserver : ‘dans. de culot La totalité des structures précédemment sédimentées.

D) Dosages

2 porte sur la série des culots ti Sur. 2 prises GE Te de l'homogénéisat,:

La- détermination des acides Danton dl die Fo et

. désoxyribonucléique est effectuée selon la méthode de séparation : de SCHMIDT et TANNHAUSER (85): par un dosage colorimétrique de phosphore d'après la technique de MACHEBOEUF et DELSAL (50), La teneur en azote protéique et nucléique est déterminée var la méthode de KJEIDAHL sur une partie aliquote de la disestion alcaline.

cs RG Ssultats

Pour chaque expérience ont été établies 2 courbes de répartition : azote protéique et acide ribonucléique, Le calcul de la répartition a été effectué comne ll 'ENECAaECritidinstianse Partie à l'aide de.l'é eos

2 6 dE EN pan L-Q = p+(l + ----):5S ---- + --- ST ---:- | 3 UN MAÉ as?

dans er NS on à pris comme valeurs des CORRE Une L'+ ---- = ci 8 l 3.

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