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* BRACHET J. Embryologic chimique (Masson).
COMICS UURIS SÉRONNTS
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Dans ce travail, avant d'exposer nos recherchos personnelles, nous avons, dans une brêve introduction, &onné les raisons qui nous ont conduit à nous attacher au problème de la séparation des diverses structures cellulaires en vue d'étudier le rôle dévolu à chacune d'elles dans le chimisme de la cellule. La compréhension des phénomènes caractéristiques de "l'état vivant! sera Fe plus en plus profonde au fur et à mesure que + méthodes d'investigation permettront de descendre dans l'échelle des organites intracellulaires et de dégager les mécanismes physico-chimiques assurant et la coordination et la régulation du fonctionnement de ces structures en vue de maintenir la fixité du type cellulaire étudié.
Après avoir fait porter nos premiers efforts sur l'amélioration et l'institution de techniques basées sur le principe de celle de CLAUDE - centrifugations différentielles - nous avons 6t6 amené à nous adresser à a granulométrique comme méthode d'étude du contenu cellulaire. L'utilisation de la granulométrie en Biologie posait un cer tain nombre de problèmes théoriques dont la résolution constitue la partie principale de cette thèse.
TI — Dans la première partie de cette thèse, nous avons décrit les deux méthodes, basées sur le principe des centrifugations fractionnées, que nous avons mises au point en prenant comme objectif, d'une part l'isolement de fractions pures de la façon 14 plus quantitative possible et d'autre part la réduction au minimum des altérations inévitables subies par les structures dans ce type de fractionnement:
19) Une technique de fractionnement permettant de séparer à partir d'un tissu cinq fractions correspondant aux noyaux, mitochondries, microsomes, phase homogène et inclusions lipidiques . Son originalité est de séparer, immédiatement après l'obtention du broyat cellulaire obtenu dans des conditions rigoureusement définies, l'ensemble des structures de la phase homogène en écartant les lipides, non liés aux protéines et nucléoprotéines et originairement rassemblés dans les vacuoles., Outre la possibilité d'un meilleur fractionnement des structures, cette technique perme & l'étude correcte de la répartition des lipides et de l'établissement de leurs caractéristiques au niveau de
chaque structure,
20) Une technique d'isolement à l'état de grande pureté de tous les noyaux demeurés intacts au cours du broyage du tissu. Utilisant la différence de densité entre cette structure et les autres particules intracellulaires, nous avons adopté comme milieu de dispersion concentré permettant uno sédimentation rapide, sélective, des noyaux, une solution de saccharose 2,2 M qui ne provoque aucune altération morphologique, ainsi que le démontre un examen cytologique fait après un mois de conservation à 07.
IT - Ayant exposé les raisons qui empêchent la généralisation et la reproductibilité des techniques de fractionnement, nous avons conclu à la nécessité de définir les fractions par leurs constantes de sédimentation, Pour définir cette grandeur nous avons fait appel à l'analyse granulométrique
TL nous a fallu, dans un premier temps, reprendre l'étude théorique de 1! analyse granulométrique afin d'établir les solutions mathématiques applicables aux centrifugations à grande vitesse se faisant le plus souvent en tubes inclinés, pour l'étude des structures cellulaires,
Depuis les premiers travaux de SVEDBERG en 1913, plusieurs solutions ont été apportées à ce problème, La plus récente, donnée par ROBISON et MARTIN, permet de déterminer dans une suspension hétérodispersée 1a répartition des particules en fonction de leur diamètre. Cette solution cependant est limitée à l'utilisation de tubes horizontaux en forme de secteur ou cylindriques et conduit à des calculs compliqués.
10) Noùüs avons montré que dans l'étude d'une suspension de particules intracellulaires, constituant un système hétérodispersé complexe, le seul paramètre valable, définissant une particule, est sa constante de sédimentation.
20) Nous avons établi les équations qui donnent la proportion des particules sédimentées en fonction du temps et en avons déduit les solutions suivantes:
a) dans le cas des tubes horizontaux en forme de secteur,
nf 1 à LR 2b+1 dis RO QU DUR CRE SRE NS Te
solution dans laque lle Q représente la proportion des particules de constantes de sédimentation inférieures
à une constante donnée S et p Rs proportion des particules effectivement sédimentées dans le temps nécesaire à la sédimentation totale des particules de constanté S; b est un coefficient égal au rapport de la distance maxima à la distance minima des particules à l'axe de rotation du centrifugeur;
b) l'étude du cas des tubes horizontaux cylindriques nous ” a conduit à la solution
eine Ep ob rap Éoes.e DM
Ces deux. équations sont d'une précision supérieure à l'équation établie par ROBISON et MARTIN, bien que d'une forme beaucoup plus simple;
c) la solution que nous proposons dans le cas des tubes horizontaux à fond hémisphérique ou semi-ellipsoîdal
est:
2b dns. mb laid BTS art “47 S ECS
Nous avons A Lx qu'elle * St applicable dans le cas de tubes hémisphériques inclinés à. 450 entre certaînes limites du 56200 De
30) La “Edo te de ces solutions a 6t6 établie expérimentalement sur une suspens L'on de cellules de: levure de tailles connues,
L' SH 1SSe SE de courbes de répartition mt en évidence: l'existence de populations de particules ayant des constantes de sédimentatiôn définies, |
III - Dans la troisième partie de nos recherches, nous avons donné comme exemple de l'application de la granulométrie en physiologie ‘cellulaire, nos recherches sur la cellule hépatique du Rat normal. Nous avons choisi ce tissu en raison de ses nombreuses fonctions physiologiques auxquelles doit correspondre une différenciation morphologique se traduisant par l'existence de structures multiples, dont les proportions et les constitutions varieront en fonction des conditions physiologiques auxquelles l'animal est
soumis.
