DISCUSSION DES RESULTATS

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Nous avons exposé précédemment pourquoi les résultats de l'analyse granulométrique devaient selon nous être considérés comme plus sûrs que ceux obtenus en fractionnant les structures: suppression des nombreux lavages provoquant l'altération des structures, Examinons les conclusions qui ressortent de l'examen du tableau 22 où sont rassemblés les résultats de quatre expériences sur le foie de rat.

A) RATE Tos des fractions

19) Noyaux.

&) La proportion des protéines par rapport à l'acide désoxyribonucléique est plus élevée que les valeurs obtenuos dans les expériences de fractionnement par MARSHAK (60), BARNUM (3), DOUNCE (30), SCHNEIDER (90). La différence s'explique par une diffusion des protéines et peut-être de l'acide ribonucléique au travers de la membrane au cours des lavages répétés des noyaux effectués par ces auteurs. Cette perte de substances nucléaires a été mise en évidence par POLLISTER (73,74).

b) Par SOU les valeurs du rapport

ac ide : ribonucléique

. acide HR ner de

obtenues (BeT divers autours (DOUNCE (30), HOGEBOOM (41), MARSHAK (60), SCHNEIDER . (88,92, 93) sont Érés variables mais toujours supériourcs à nos propres résultats. Dans ces expériences la contamination par 1es mitochondries ot los cellules résiduelles, malgré les lavages, CSLRSUS périeure à la perte éventuclle d'acide ribonucléique. La teneur réelle des noyaux en ce constituant est faible ot explique ANR des crreurs RENIARE commises.

c) Bien que 16 rapport nucléoplasmique exprimé biochimique | ment nous semble d'une signification plus précise et plus

: e intéressante quo le rapport volume nucléair

volume cellulaire des cyto-

logistes, nous croyons intéressant de signaler qu'en calculant à partir de nos chiffres le rapport:

azote des nucléînes et protéines nucléaires

azote des nucléines, et: protéines cellulaires

on trouve une valeur comprise entre 0.12 et 0,20. Les déterminations cytologiques de volumes d' S (8 des et comprises entre 0,10 et 0,18 (SCHNEIDER (87), JOHNSTON (47), MIRSKY et RIS (14). Le calcul effectué à partir des diverses expériences de fractionnement donnerait un rapport manifestement trop faible, compris entre 0,05 et 0,10.

29) Mitochondries,

La part de l'azote protéique contenue dans les mitochondries est remarquable men firouos égale à 25 p.cent,. La netteté de ces résultats montre tout l'intérêt de notre technique, La richesse. en mitochondries est en effet caractéristique de l'espèce pour un tissu donné à l'état normal (79,100) et les variations sont concomitantes de conditions exceptionnelles ou pathologiques. Les résultats obtenus par DALTON (26), PRICE et coll. (77,78,94), sont plus élevés: 30 à 35 p.cent. Cette différence est facilement explicable, nous’ avons .en of — fet montré dans le chapitre précédent que les mitochondries, après deux lavages, contiennent encore une heu importante de gros microsomes,

Si, dans cette fraction, on calcule le rapport

acide ribonucléique

protéines

on le trouve plus HUE que pour l'ensemble de la cellule alors que l'on verra qu'il est beaucoup plus. élevé pour les microsomes. Ces phénomènes ont été également observés par HOGEBOOM et SCHNEIDER (91), cependant nos résultats nous semblent ns significatifs pour deux raisons :

. = le maintien de 1! intégrité de cette structure, - le calcul effectué par rapport à l'azote protéique et non 1l' RUES total, be aucoup plus FE à variations.

30) Microsomes.

Ici le rorxparaison de nos rfanliote avec les résul-

tats antérieurs ne peut être hs tass car, dans les expgCrienes

faîtes par fractionnement, chaque auteur définit arbitrairement la fraction microsome en fonction de la vitesse limite du cen-

trifugeur qu'il utilise, ce qui le conduit à isoler une proportion variable des microsomes (3,15,31,40,41,45,89,91,92,93).

Notre travail nous a permis de définir et la présence de ceux fractions distinctes parmi les microsomes de taille supérieure à 60 my environ et les conditions désormais reproductibles de leur isolement. La première fraction, correspondant à des particules dont le diamètre moyen est 200 xu, ne contient que 8,9 p.cent de l'azote protéique et 21 p.cent de l'acide ribonucléique de la cellule. La deuxième fraction, dont les particules ont des diamètres voisins de 80 mu, cst quantitativemnt plus importante et renferme 10 p.cent de l'azote protéique et 51 p.cent de l'acide ribonucléique de la cellule.

Le rapport ass Rae est toujours très élevé dans le cas des microsome" SE°ERSñonte darlasfractlioncisablai fraction IT:

B) Signification morphologique des fractions.

L'identification des granules isolées par la centrifugation d'un homogénéisat aux formations structurelles de la cellule ne soulève de difficultés qu'en ce qui concerne les petites structures, Les noyaux sont en effet facilement reconnaissables., |

Les courbes des figures 20 à 24 montrent que les mitochondries constituent une fraction unique au point de vus constante de sédimentation, Le problème de l'origine de ces particules nc se pose pas, elles correspondent bien aux structures identifiées comme mitochondries par le cytologiste dans la cellule: même taille, mêmes caractères de coloration. Ce sont des organites cellulaîres possédant une membrane (CLAU- DE ot FULLAM (23), DALTON (26), ZOLLINGER (65) et des propriétés osmotiques mises en évidence par de DUVE (11), HOGEBOON (41) et OPIE (70,71). Leurs rôles physiologiques ont fait, depuis les travaux de MAYER ct SCHAEFFER (62) en 1913, l'objet de très nombreuses recherches résumées dans la rovue récente. de HOGEBOOM, SCHNEIDER ct STRIEBICH tés)

Il n'en va pas de même des microsomes ct la mise cn évidence dans nos expériences de deux frartions distinctes mérite un examen approfondi. Do plus, si nos appareils nous

ont limité à l'étude des particules de diamètre supérieur a 60 mu + Îl est très vraisemblable qu'en poursuivant la sédimentation on trouve de nouvelles fractions correspondant aux particules de diamètres inférieurs et ayant peut-être une constitution différente.

Ces très petites particules sont en effet nettement. visibles sur la figure 5. Les observations de SLAUTTERPACK (95) vont aussi dans ce sens, Nous rapprocherons nos résultats der céuxrobtenus par fractionnement, puis nous discuterons la signification même du terme microsome. af

Le premier, CHANTRENNE (15), en 1947, a montré vi hétérogénéité de la fraction "microsomes!"', mais ayant suivi l'évolution de la constitution chimique en fonction de la vi- “tesse de centrifugation et non de la taille des particules, i1 n'a pu analyser que des mélanges en proportions variables de ces parvicules,. Le milieu de dispersion qu'il utilisait était le C1K qui a été abandonné depuis parce qu'il provoquait l'aggrégation des différentes structures, D'autres auteurs: BARNUNM (3), NOVIKOFF (67), ont également apporté des arguments en faveur de l'hétérogénéité de ces structures mais sans pouvoir définir des fractions homogênes, Pour toutes ces raisons nous ne nous étendrons pas sur los résultats de ces auteurs.

j,! état initial des microsomcs dans la cellule est encoro hypothtieuc,. En céfot, si cos. particules sorrospondaient dans l'osprit do CLAUDE, qui les a ÉRTS PE Iè..promior,-aux, granulos sphôria: ucg do naturo basophilo * que l'oxamon au microscops électreique lui révélait dans a cellules en culture,:ilconvient do remarquer que cette forme n'est qu ‘'oxceptionnelloment observée "in situ! par les cytologistes dans da cellule hépatique et que les microsomes isolés par centrifugation (Figrre 5) ne présentent pas non plus de forme réguliôre. Par aîl leurs, l'examen au microsope électronique dé la, cellule hépat iquo après fixation par l'acide osmique ne révèle pas de structures morphologiquement superposables aux microsoms isolés par nous. Mais, étudiant au moyen de coupes ultrafines la morphologie de ce type de cellules au microscopo électronique, OER- LONG, BERNHARD, GAUTIER, HAGUENEAU (8,9,10, 142 6GeDAIMONs (272: NA onË aécélé, par contre, des structures spéciales, filamenss bouscs, fixant l'acide osmiquo. ,Les variations quantitatives

de ces filaments au cours du jeûne et de la. réalimntation ù

Les cytologistes appallent basophiles les structures ou régions de la cellule qui, en raison de lour caractère

acide, ont une grande affinité pour les colorants basiques;

cette propriété correspond à la présence d'acide nucléiaucs

sont paralléles aux variations de basophilice révélécs par l'examen au microscope optique de ces mêmes cellules, co qui a conduit OBERLING et ses collaborateurs à identifier ces filaments aux structures basophiles cytoplasmiques et à les désigner du nom d''ergastoplasme",

Selon toute vraisemblance, les microsomes, particules riches en acide ribonucléique, proviennent de la fragmentation de l'ergastoplasme au cours du broyage du tissu. Mais comment peut-on expliquer que cette fragmentation donne naissance à plusieurs types de granules définis au point de vue taille ot constitution chimique”?

k Nos essais systématiques d'homogénéisation pratiqués dans le but d'isoler et d'observer de tels filaments ont toujours échoué, or, on ne peut penser, étant donné leur dimension, à une dilacération mécanique par l'homogénéiseur.

Nous sommes ainsi amenés à nous représenter l'ergastoplasme comme formé non de véribables filaments, mais d'alignements de particules préexistantes, de types définis, correspondant aux microsomes, orientés dans la cellule vivante d'une façon telle que la fixation par l'acide osmique conduit à dos images filamenteuses, La simple dispersion du contenu cellulaire dans un milieu aqueux suffirait à libéror ces particules et à détruire la faible cohésion qui les maîintenait en position réciproque.

à L'intérêt qui s'attache aux microsomes tient au role que BRACHET * et plusieurs biochimistes leur attribuent dans la synthèse des protéines collulairess dans tous les cas où cette synthôse est importante, les réactions cytochimiques révèlont une forte réaction basophile cet les observations au microscope électronique une augmentation de l'ergastoplasme.