D) CONCLUSION
La méthode de centrifuration fractionnée que nous avons
établie se caractérise Dar à
oi
Une libération complète de toutes les structures par une étude soisneuse des conditions du broyage et de l'homog rénéisation initiale. C'est là. urnetCondition mécessaire. s1 l'on veut établir des bilans valables de répartition des constituants cellulaires, et la composition spécifique de chaque type de structure ; L'obtention de noyaux ours, Ce résultat est acquis du fait qu'il ne subsiste plus de cellule dans l'honogénat initial et cu'un tamisase aporoprié écarte tout tissu conjonctif,
L'introduction de certaines modifications dont le but est de permettre une récolte quantitative de toutes les structures libérées |: les liquides delavage des différents culots sont toujours réunis au surnageant vrincipul en cours de fractionnement, et toutes les décantations sont effectuées à l'aide d'un dispositif qui les rend duantitatives,
Cependant nous ne sommes arrivés uux buts proposés - pureté et totalité des différentes Structures - que grâce à l'introduction d'un temps supplémentaire dont l'importance pratique nous semble canitale: : dès l'obtention de l'homogé néisat, nous lui faisons subir une-centrifuñation initiale à l: plus grande vitesse possible, Cette: centrifugation permet de séparer dès L'Écoro :
a) L'ensemble des li-ides libres non liés aux protéines ou nu- ‘cléoprotéines cytoplasmi. ues ; ces graisses rassemblées à la surface peuvent être recueillies et ne sont plus susceptibles par la suite de souiller les structures ; c'est un point important qui,.à notre connaisse nce, “ toujours été négligé : les lipides libres représentent, en èffet, chez le Rat normal par exemple, L5.à 20 p..100es lipidesttotauX dusfois (17)
b) La presque totalité de la phase dispersée du.cytopläsme ;
c) La totalité des structures : noyaux, mitochondries et ceux des microsomes que nos centrifuseurs permettent de sédimenter,
En dépit des améliorations qu'elle comporte notre techue comme toutes les techniques de centrifugations fractionées, livre des noyaux ayant subi une ältération morpholosicue révélée par l'examen microscopique à un fort srossissement et correspondant à la perte d'une partie de leurs constituants.
ÉrnVLsageant pous L'avenir une série derrechesrches sur les 2cides nucléïiques des noyzux au niveau du nucléole et suc celluliire dans divers états physiolo-iques ou psthologiques nous nous sommes attachés à la mise au point d'une technique permet tant l'isolement de noyiux intacts et purs en s2 icrifiont les eu- Grp lracciOons du, broyat cellulaire,
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