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pur. Par un broyage mécanique de bacilles secs dont il séparait ensuite, par l’eau légèrement, alcalinisée, les produits solubles et insolubles, Koch obtint les tuberculines TO et TR (nouvelles tuberculines de Koch). Klebs, Buchner et Hahn, Behring, Landman et Béraneck obtiennent au moyen de divers traitements chimiques, des substances (tuberculo-plasmine, tuberculosines) dont les propriétés semblent assez différentes de celles de la tuberculine de Koch. Denys filtre simplement les cultures sans les concentrer, et Maragliano fait un extrait aqueux de bacilles.

Tuberculines précipitées. — Afin d obtenir un produit pur, de composition fixe, Robert Koch avait essayé de purifier la tuberculine brute par précipitation fractionnée au moyen d'alcool à 60°; il obtenait ainsi une poudre brune qu’on pouvait redissoudre dans l’eau glycérinée à 5o pour 100 et dont 10 milligrammes produisaient les mêmes effets que 500 milligrammes de tuberculine initiale.

M. A. Calmette a obtenu une fuberculine précipitée CL encore dix fois plus active que la tuberculine précipitée de Koch. Elle est préparée en concentrant dans le vide, à basse température, les cultures de bacilles tuberculeux en bouillon glycériné et en soumettant le liquide évaporé à trois précipitations et redissolutions successives par un mélange à parties égales d’alcool à 95° et d’éther.

Actuellement, l'Institut Pasteur de Paris prépare sous le nom de solution mère pour l'usage médical, une tuberculine précipitée par l'alcool, redissoute dans l’eau

glycérinée à 30 pour 100 et qui est délivrée en ampoules de 1 centimètre cube correspondant à 1 centigramme de tuberculine précipitée (solution au centième).

Pour obtenir une dilution de 1 dixième de milligramme, sous le volume de : centimètre cube (dilution utilisée pour produire la réaction générale) il faut faire une solution au centième, de la facon suivante: on verse le contenu d’une ampoule de 1 centigramme de tuberculine dans une éprouvette où un ballon gradué stérilisé de 100 centimètres cubes; on ajoute la quantité nécessaire de sérum physiologique à 7 pour 1000 pour faire 100 centimètres cubes. Un centimètre cube de cette solution contient un dixième de milligramme de tuberculine.

Si l’on veut injecter la dose de 2 dixièmes de milligramme sous le volume de 1 centimètre cube, il suffit de faire une solution au cinquantième. On opère comme précédemment, en portant le volume total à 5o centimètres cubes seulement. 1 centimètre cube de cette solution contient 2 dixièmes de milligramme de tuberculine.

Lorsque tout le contenu du tube n’a pas été employé, il suffit d’en fermer l'extrémité à la flamme et de

le stériliser à nouveau par ébullition au bain-marie.

Action des tuberculines. — La tuberculine brute et la tuberculine précipitée par l'alcool agissent à peu près de la même manière. Injectées à titre et à dose convenables, elles produisent une réaction locale au point

d’inoculation, une réaction générale, et une réaction au

niveau des foyers tuberculeux, chez les individus infectés par le bacille de Koch. Elles ne donnent lieu à aucune manifestation chez les individus qui sont exempts de toute infection tuberculeuse. Ce résultat est d’autant plus sûrement obtenu qu’on se sert d’un produit pur et de titre connu. Comme nous l’avons vu, la tuberculine brute est d’un emploi moins précis que la tuberculine précipitée à cause des variations de concentration qu’elle présente ; ces variations peuvent occasionner des erreurs en clinique humaine.

D’autre part les tuberculines sont des substances toxiques qui peuvent produire des réactions d’intoxication chez l’homme exempt de tuberculose quand elles sont employées à dose relativement très élevée. Les nourrissons, qui sont presque toujours absolument indemnes de toute infection bacillaire, supportent sans aucun dommage des doses de tuberculine qui seraient toxiques pour l’adulte. Ce fait s’explique par la présence, chez l'adulte le mieux portant, de toutes petites infections bacillaires latentes qui lui donnent un certain degré d’hypersensibilité à la tuberculine.

Chez le tuberculeux, au contraire, une dose minime de tuberculine suffit pour provoquer une réaction et celle-ci est, en général, d'autant plus intense que le sujet est moins infecté. Souvent les tuberculeux au début réagissent à une dose de tuberculine beaucoup plus faible que les tuberculeux résistants porteurs de vieilles lésions fibreuses; ainsi o,00001 centièmede milligramme. de tuberculine donne parfois une réaction très vive tout: à fait au début de l'infection.