TO ES

sieurs passages en bouillon glycériné jusqu’à ce que le bacille récupère sa mobilité et les propriétés décrites par S. Arloing. La culture est alors laissée à l’étuve pendant 30 ou 4o jours. Puis elleest diluée (1) cinquante à soixante fois dans l’eau salée physiologique à 8 pour 1 000 stérilisée ; cette dilution varie avec la richesse de la culture ; on arrive facilement, avec l'habitude, à obtenir cette dilution légèrement opalescente qui montre, si on l’agite, des ondes soyeuses, mais elle ne peut être déterminée exactement que par l'emploi d’un sérumétalon. C’est un sérum dont le pouvoir agglutinant pour une culture normale en un temps donné est connu, et qui agglutine dans les limites ordinaires du sérum des tuberculeux (de 1 pour 10 à r pour 20). Ce sérum-étalon, conservé à l'obscurité et à la glacière, ou aseptiquement à une température modérée, peut garder pendant plusieurs mois le même pouvoir agglutinant.

Le sérum-étalon servira. à contrèler le degré d’agglutinabilité des cultures diluées; celles-ci ne seront employées que lorsqu'elles donneront avec le sérumétalon le degré d’agglutinabilité en un temps donné (en 3 à 5 heures).

On peut conserver pendant plusieurs semaines une provision de culture diluée agglutinable au même titre par un même sérum, en la mettant à une température

inférieure à 10° ou en l’additionnant de 3 à 4 pour 1 000

(1) ArLoinG et Gourmonr recommandèrent primitivement d'employer des cultures âgées de 8 à 10 jours. Ils conseillèrent ensuite de se servir de cultures restées à l’étuve pendant r mois environ et de les diluer avant d’en faire usage.

SRE

de formol du commerce tout en la laissant à une température peu élevée.

Il faut avoir soin d’agiter l’'émulsion de bacilles avant de s’en servir, pour répartir uniformément le dépôt qui se forme à la longue dans les émulsions conservées. |

Pour obtenir le sérum du malade à éprouver, on recueille dans un petit tube eflilé un centimètre cube et demi de sang par piqüre du bout du doigt. Le sérum doit être employé pur et limpide tel qu’on l’obtient en laissant simplement coaguler le sang au repos; on peut, si l’on est pressé, séparer le sérum du caillot par centrifugation. En cas de tuberculose locale, on emploie, au lieu du sérum sanguin, l’épanchement séreux.

La réaction d’agglutination doit être observée à l’œil nu et non au microscope. Elle se fait dans de petits tubes de verre stérilisés, larges de 7 millimètres de diamètre environ, hauts de 4 centimètres et demi, et defondarrondi. Pourchaquesérum, onen place cinq verticalement dans un porte-tubes: dans les trois premiers, on met dix gouttes de la culture, dans le quatrième quinze gouttes, et dans le cinquième vingt gouttes.

La pipetle eflilée avec laquelle on a mesuré les gouttes de culture est lavée au bouillon stérilisé et séchée à la flamme, puis elle sert de nouveau à doser les gouttes de sérum. Le premier tube qui doit servir de témoin ne reçoit pas de sérum. On met deux gouttes de sérum dans le deuxième tube (à 1 pour 5) et une seule goutte de sérum dans les troisième, quatrième

et cinquième tubes : le séro-diagnostic est ainsi essayé

au cinquième, au dixième, au quinzième etau vingtième (S. Arloing et P. Courmont conseillent de préparer en outre une agglutination limite avec le sérum-étalon, à x pour V\1-pour'10,.1!pour.-15, etc).

Lorsque cette répartition est faite, on agite fortement chaque tube pour bien mélanger le sérum etla culture, puis on abandonne au repos à la température du laboratoire. L'examen de la réaction se fera à l’œil nu en observant les tubes à jour frisant.

Le temps au bout duquel la réaction doit être notée est de 4 à 6 heures. Pour être absolument exact, le résultat sera noté au bout du temps nécessaire à l’agglutination limite par le sérum-étalon à la dilution maxima (1). Au delà des premières heures, les modifications dans l’agglutination sont négligeables.

« On ne doit considérer comme positives que les ag-

glutinations complètes à l'œil nu, caractérisées par la formation de flocons bien visibles et la clarification du liquide.

« Les réactions négatives laissent le liquide trouble comme dans le tube témoin, sans flocon ni dépôt abondant.

«Les réactions incomplètes, avec dépôt dans le fond, mais persistance d’un trouble plus ou moins accusé audessus du dépôt, ne peuvent servir que d'indication ». (Arloing et Courmont).

Le caractère d'agglutinabilité que possède le bacille isolé par

(1) S. ArLoinG et Paul Courmonr. Prov. Méd., 17 mai 1902.

| SSSR ATEN

S. Arloing n'appartient pas à toutes les cultures homogènes du bacille de Koch (1).

Par contre, le phénomène d'agglutination peut s'obtenir aussi à l’aide de bacilles tuberculeux cultivés sur milieux lécithinés ou contenant une faible proportion de bile de bœuf (2) comme l'ont montré MM. Calmette et Guérin. La méthode de culture d'Arloing n'est donc pas la seule qui puisse donner au bacille le développement homogène et l'agglutinabilité. Cette dernière propriété varie d’une façon considérable suivant la provenance humaine, bovine ou aviaire des bacilles, suivant le milieu de culture et la concentration de l’émulsion bacillaire employée. Aussi ne doit-on pas comparer les résultats obtenus par le bacille d'Arloing à ceux qu'on obtient par tout autre bacille.

Une goutte de culture homogène d'Arloing examinée au microscope entre fame et lamelle montre, à côté de petits amas formés de bacilles enchevêtrés, des bacilles isolés ; ces bacilles sont plus ou moins résistants à la décoloration par les acides ; en vieillissant, ils reprennent les caractères tinctoriaux du bacille de Koch.

La virulence du bacille homogène d’Arloing est moindre que celle du bacille de Koch : l’inoculation intrapéritonéale ne tuberculise le cobaye que dans 10 pour 100 des cas, et l’on n'obtient une tuberculose généralisée que dans 20 pour 100 des inoculations intra-mammaires (3).

Interprétation de la séro-réaction. — l'après les auteurs mêmes de la séro-agglutination, celle-ci n’a de

valeur que si elle n’est pas séparée des conditions cli-

(x) S. ArLomc et P. Courmonr. Revue de la Tub., n°s 3 et 4, 1904. — BerrueLon. Thèse, Lyon, 1904.

(2) Cazmerrset Guérin. C. R. Acad. des Sciences, 28 déc. 1908 et 2 nov.

(3) L. Nartan-Larrier. Diagnostic de la tuberculose par les nouveaux procédés de laboratoire. L'œuvre médico-chirurg., n° 43, 12 oct. 1905.