B. — GELÉE CARDIAQUE

Chez l'embryon de Poulet, aux environs de la quarante-huitième heure d’incubation, le cœur, d’abord courbé en U, est déjà recourbé sur lui-même. Il est formé par un tube endothélial entouré d’une gaine myocardique qui s’épaissit et dont la structure se complique peu à peut. Ces deux tubes sont séparés par un espace assez impor-

1. Voir Schokaert, Archives de Biologie, 1909, t. 24, p. 277.

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tant, mais restent solidaires l’un de l’autre; cet espace semble rempli par une substance homogène, transparente, que l’on peut suivre jusqu'à soixante-douze heures et qui est progressivement envahie par les cellules du mésenchyme qui s'organisent en réseau.

Davis (1924) sectionne un cœur dans le liquide de Locke et tente d’insinuer une sonde fine entre le myocarde et le tube endothélial,

Fra. 1. — Gelée cardiaque chez un embryon de Poulet de 53 heures.

Myoc., myocarde; Endothel., endothélium; entre les deux, coagulation de la subs-

tance mucoïde qui ne renferme pas encore de cellules (Liq. de Bouin; mucicarmin hématéine).

la sonde rencontre une résistance qui rend très difficile la séparation des deux feuillets cellulaires. Il existe donc une substance homogène et transparente formant une liaison tenace entre l’endothélium et le myocarde; c’est la gelée cardiaque.

Cette gelée, examinée à l’ultra-microscope, ne montre ni opalescence ni granulations, elle reste optiquement vide et rien ne permet de la déceler in vivo en dehors des moyens mécaniques. Davis n’a pas réussi à la déceler après fixation.

Baïitsell (1925) pense, comme von Szily l'avait déjà supposé, que la gelée cardiaque est probablement une structure mésostro-

male; il reprend les observations de Davis et les confirme, mais observe une structure fibrillaire déjà figurée par von Szily. Chez l'embryon de vingt-sept heures on trouve une substance fondamentale totalement dépourvue de cellules, hyaline, interposée entre le myocarde et l'endocarde. La structure fibrillaire apparaît progres-

F1G. 2. — Gelé cardiaque chez un embryon de Poulet de 72 heures.

Myoc., myocarde; Endo., endothélium; Mes., mésenchyme; la substance mucoïde est infiltrée par de nombreuses cellules qui se multiplient activement.

sivement et est déjà nettement marquée à quarante-deux heures. C’est bien cette gelée acellulaire qui oppose une résistance aux essais de microdissection du tube cardiaque embryonnaire. Baitsell pense que cette gelée est sécrétée par les feuillets et qu’elle subit des transformations progressives avant d’être envahie par les cellules mésenchymateuses.

Il était intéressant de savoir si quelques réactions histologiques permettraient, contrairement à l’opinion de Davis, de mettre en

évidence la gelée cardiaque.

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Des cœurs d’embryons de Poulet de quarante-huit à soixantedouze heures ont été fixés au liquide de Bouin, celui-ci, grâce à l’acide acétique qu’il contient, conserve très bien les mucoïdes; les coupes ont été colorées par le muci-carmin de Mayer combiné, suivant les indications de Masson, avec l’hématéine et le jaune

métanil. Les préparations obtenues montrent l’espace séparant le

- F1G. 3. — Coupe transversale dans le cœur d’un embryon de Poulet de 72 heures.

My., myocarde; End., endocarde; entre les deux, substance mucoïde coagulée et cellules nombreuses.

myocarde et l’endothélium, occupé par un réseau à mailles irrégulières correspondant à la coagulation de la substance amorphe beaucoup plus qu'à une structure préexistante, mais pouvant donner l'illusion d’une structure fibrillaire. La fixation du muci-sarmin par cette substance précipitée est élective et le coagulum mucoïde apparaît plus ou moins dense selon les régions; il est souvent particulièrement condensé au niveau du myocarde. Dans un cœur de cinquante-trois heures, la gelée cardiaque muqueuse est presque absolument dépourvue de cellules (fig. 1). Dans un cœur de soixantedouze heures, le réticulum muqueux est encore net, mais presque

totalement envahi par des cellules mésenchymateuses, ramifiées, en voie de division active (fig. 2 et 3).

On peut donc conclure de l'étude histochimique et quoiqu'il soit impossible d'envisager la séparation et l’étude chimique de cette substance, que la gelée cardiaque est formée par, ou tout au moins Contient, une substance mucoïde. Mais la nature et l’origine de ce tissu embryonnaire reste incertaine; le fait de l'apparition de la substance muqueuse avant son envahissement par les cellules ne permet pas de considérer cette gelée comme un tissu conjonctif muqueux et l'hypothèse d’une sécrétion due à l’activité propre des cellules mésodermiques du myocarde ou de l’endocarde peut seule être envisagée.

Chez l'embryon de Truite, la question de l’origine de la substance muqueuse mise en évidence par À. Back se pose de la même manière puisque, comme Laguesse l’a montré, les cellules du mésenchyme envahissent progressivement un espace intertissulaire et que la substance précipitable par l’acide acétique et colorable par le mucicarmin semble occuper préalablement cet espace comme les structures mésostromales de von Szily.

CRDERME ETAT

Le derme des fœtus de Mammifères, étudié par Renaut, paraît être, à l'inverse de la gelée cardiaque, un exemple typique d'état muqueux du tissu conjonctif embryonnaire; il est dans une certaine mesure comparable à la gélatine de Wharton qui, elle, est un tissu conjonctif embryonnaire spécialisé.

Renaut (1907) a trouvé un matériel typique dans le tissu conjonctif lâche formant le derme gélatineux, très développé, entre la peau et les testicules d’embryons de Moutons de 15 à 22 centimètres et d’embryons de Taureaux de 20 à 40 centimètres. Ces fœtus étant recueillis après le sacrifice de la mère, Renaut étudie le tissu gélatineux, non sur des coupes, mais beaucoup mieux, par des étalements sur lame d’un petit fragment prélevé aux ciseaux; une coloration postvitale au rouge neutre montre une multitude de petites cellules rondes renfermant des vacuoles colorées en rouge, ainsi qu’un grand nombre de cellules rameuses anastomosées. En dehors

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de ces éléments cellulaires, il existe déjà une fine tramule connective et des faisceaux connectifs entrecroisés réalisant une charpente collagène très lâche. Les cellules et la trame collagène sont baignées par une substance fondamentale abondante, précipitable par les fixateurs acétiques et donnant les réactions de la mucine. L'examen de ce même tissu chez des fœtus de Moutons a montré sur coupes, après fixation au Zenker, cette même substance intersti-

F1G. 4. — Derme fœtal de Mouton. Aspect de la trame collagène et des cellules.

tielle muqueuse électivement colorable par le muci-carmin de Mayer et qui prend une teinte métachromatique rose avec la thionine. Cette substance se comporte donc, comme l’a vu Renaut, à la manière d’une substance très riche en mucoïdes.

La trame collagène, lâche, est formée de gros faisceaux conjonctifs colorables par le jaune métanil avec la coloration de Masson au muci-carmin, par le bleu d’aniline du mélange de Mallory; et de fines fibrilles plus ou moins parallèles paraissant parfois bifurquées mais ne présentant pas cependant l’apparence d’un véritable réseau. L’imprégnation à l’argent par la méthode de Bielchowsky modifiée par Foot met tout ce système fibrillaire en évidence; la matière collagène de ce tissu conjonctif semble représenter un état intermédiaire entre la réticuline et le collagène proprement dit. C’est

entre les fibres ou le long de celles-ci que sont situées les cellules fusiformes ou rameuses, nombreuses, de ce tissu conjonctif (fig. 4 et 5).

On s’est proposé d’extraire la substance interstitielle muqueuse afin de vérifier, in vitro, sa nature. Plusieurs essais ont été réalisés de la manière suivante :

Des testicules de fœtus de Moutons, fraîchement prélevés à

FiG. 5. —— Derme fœtal de Mouton. Gros faisceaux conjonctifs et fine trame collagène.

l’abattoir, sont d’abord lavés à l’eau salée; après l'extraction facile de la glande il reste la peau et la masse adhérente du derme gélatineux. Ces fragments d'organes sont alors finement broyés, puis le hâchis très aqueux obtenu est agité avec de l'eau de chaux diluée au demi!.

L’agitation est répétée fréquemment et après huit à dix heures de macération à la glacière, le premier liquide d'extraction est séparé par filtration sur gaze, ou mieux sur passoire fine. Le liquide obtenu est trouble et très filant; le résidu est repris par de l’eau de chaux et

1. 180 grammes de tissu provenant de 25 testicules sont additionnés de 300 à 500 centimètres cubes de liquide.

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la même opération est recommencée plusieurs fois jusqu’à ce que l’eau de chaux reste claire et ne soit plus ni visqueuse ni filante. Tous les liquides d’extractions, conservés de préférence à la glacière, sont ultérieurement réunis; on les débarrasse des impuretés demeurées en suspension par centrifugation. La neutralisation du liquide clair, puis son acidification par l'acide acétique donne aussitôt un précipité floconneux qui tombe facilement. Après décantation le précipité acétique est recueilli par centrifugation, mis en suspension dans l’eau distillée et lavé jusqu’à ce que les eaux du lavage ne soient plus acides. Redissout dans l’eau de chaux diluée afin de le purifier, ce précipité abandonne une partie insoluble; les mêmes opérations de précipitation acétique et de centrifugation étant répétées plusieurs fois, on obtient finalement un précipité blanchâtre qui, après un dernier lavage à l’eau distillée, est traité par l’alcool 95, l’alcool absolu, l’alcool-éther, et recueilli par filtration sur un entonnoir de Büchner. Selon les expériences le produit obtenu, pulvérisé, était plus ou moins blanc. Ce produit dont la solution alcaline est très visqueuse et filante se colore nettement en rose par le muci-carmin si l’on en fait une préparation histologique.

Dans le but d'obtenir une nouvelle purification, nous avons cherché à éliminer les nucléines qui sont certainement extraites et précipitées avec le mucoïde au cours des opérations décrites, et qui dans un tissu embryonnaire doivent être particulièrement abondantes.

Dans une première partie d’essais, en s'inspirant de la méthode utilisée par dJavillier et Allaire (1925), environ 3 grammes de poudre sèche de mucoïde sont mis en suspension dans 200 centimètres cubes d’une solution de NaCI 15 p. 100 à froid pendant trois jours. Après plusieurs agitations, le liquide surnageant est décanté et additionné d'HCI; on obtient un faible précipité de nucléines, mais en quantité trop minime pour permettre des recherches ultérieures.

Dans une autre expérience, en extrayant par l’eau salée le précipité humide et en précipitant ensuite par HCI, on a obtenu comme précédemment une très petite quantité de substance correspondant probablement aux nucléines. Mais malgré cette extraction, le mucoïde quoique purifié renferme encore du phosphore (on a trouvé par la méthode de Neuman-Gregersen 0,048 p. 100 de P.).

Les quantités de mucoïde obtenu à partir du derme fœtal de fœtus de Mouton étant très faibles, il était impossible de tenter la séparation du groupe hydrocarboné caractéristique des mucoprotéides. On a seulement mis en évidence le pouvoir réducteur, après hydrolyse. Pour cela, un poids déterminé du mucoïde en poudre, débarrassé des nucléines, est soumis à une hydrolyse sulfurique, selon la méthode décrite par Mme Randoin-Fandard, pour la recherche et le dosage du sucre combiné (1918).

Après défécation, le titrage du sucre réducteur, effectué selon la méthode de G. Bertrand et calculé en glucose, a donné en moyenne 1,87 p. 100.

L’ensemble des propriétés montrées par la substance interstitielle du derme fœtal de Mouton, si l’on envisage d’une part les caractères histologiques, d’autre part le mode d’extraction, et enfin la présence, après hydrolyse, d’un corps réduisant la liqueur de Felhing démontre que l’on a bien affaire à une substance contenant une proportion appréciable de mucoprotéides vraies.