D. — ÉTUDE CHIMIQUE

L'étude chimique de la substance interstitielle du tissu conjonctif des oviductes de la Raïe a été conduite comme dans les cas précédents. On s’est d’abord proposé d’extraire la substance mucoïde. A cet effet, les oviductes ont été très soigneusement lavés afin d'éliminer autant que possible, tout le mucus épithélial; après un lavage extérieur, ils étaient retournés et la muqueuse interne était frottée dans l’eau de chaux avec un tampon de gaze. Ensuite, les oviductes, coupés finement, étaient prêts pour les manipulations.

19 Extraction du mucoide.

Dans une première série d’essais on a tenté de recueillir directement le liquide interstitiel par pression; ce liquide séparé, filtré sur une gaze fine donnait un précipité blanchâtre, floconneux, après addition de quelques gouttes d’acide acétique. Insoluble

dans un excès d’acide, ce précipité semblait correspondre à une mucoprotéine.

Toutefois cette technique était insuffisante; on a donc procédé à une extraction beaucoup plus complète en employant, comme pour tous les autres tissus muqueux, l’eau de chaux diluée au demi.

Partant d’un poids déterminé d’oviductes bien lavés, coupés et broyés le plus finement possible, la pulpe obtenue est recouverte d’eau de chaux diluée au demi.

Pour une paire d’oviductes pesant 233 grammes on ajoute environ 400 centimètres cubes d’eau de chaux. Le mélange est mis à la glacière et assez fréquemment agité; après cinq ou six heures le liquide est décanté et le résidu repris avec une même quantité d’eau de chaux.

Les premiers liquides d’extraction sont filants et visqueux, l’extraction est prolongée jusqu’à épuisement apparent de la pulpe. Après rinçage du résidu à l’eau distillée, tous les liquides réunis sont centrifugés; on obtient alors un liquide coloré, mais clair. Ce liquide est additionné d’une petite quantité d'acide acétique, jusqu’à ce que l’on obtienne une réaction nettement acide au tournesol; il se forme un précipité blanc, floconneux, abondant qui se rassemble peu à peu!. Le précipité de mucoprotéine est bien lavé, à l’eau distillée, dans un grand vase au fond duquel on le laisse à nouveau déposer? et l’opération est répétée jusqu’à ce que l’eau de lavage ne soit plus acide; on centrifuge alors et le précipité recueilli est redissout dans une très petite quantité d’eau de chaux au demi pour éliminer les résidus insolubles entraînés lors de la première séparation.

Après centrifugation et acidification du liquide clair, on obtient un précipité blanc qui tombe en fins flocons. Celui-ci lavé à l’eau, déshydraté par des lavages à l’alcool, puis à l’alcool-éther et recueilli par filtration est séché. On obtient une poudre blanche dont le poids correspond à 1,5 p. 100 environ du poids frais des oviductes. Cette poudre se colore nettement par le muci-carmin.

1. Le liquide surnageant, jaune clair, contient sans doute encore des protéines, car il précipite à chaud et donne un trouble en présence d’acide trichloroacétique.

2. Pour toutes ces manipulations qui durent assez longtemps il est bon de conserver les liquides à la glacière.

Thèse Garrault. 6

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20 Séparation du groupe hydrocarboné.

Étant donné le caractère particulier de cette substance, on a tout d’abord essayé de déceler, après hydrolyse, la présence d’un corps réduisant la liqueur de Fehling. L'attaque par l’acide chlorhydrique à 2 ou 5 p. 100 à 1200 pendant trois quarts d'heure donne une hydrolyse incomplète, et les résultats sont négatifs. L’hydrolyse sulfurique, faite dans les conditions précédemment décrites, a donné au contraire un résultat positif. Le titrage de l’hexose réducteur supposé a donné, calculé en glucose, 1,7 à 2 p. 100 du poids de la poudre sèche du mucoïde.

Ce premier résultat étant acquis, on a effectué la séparation de l’acide mucoïtine ou chondroïtine-sulfurique. Après attaque par la potasse à 2 p. 100, à froid, on précipite par l’alcool le sel potassique de l'acide, qui est redissout et reprécipité après élimination des impuretés insolubles.

Le dernier précipité, convenablement lavé, redissout dans la plus petite quantité possible d’eau distillée, donne une solution extrêmement visqueuse, claire, mais légèrement teintée; celle-ci est traitée par un grand excès d’acide acétique, suivant la méthode de Levene et le précipité séparé est lavé par l’alcool, l’alcool-éther et séché. Le produit obtenu correspondant à l’un des deux acides chondroïtine ou mucoïtine sulfurique, représente près de 8 p. 100 du poids de mucoïde brut. Ce produit dissous dans l’eau distillée, après épuisement à l’éther pour enlever toute trace d’acide acétique, donne une solution qui présente une réaction nettement acide au tournesol.

L'hydrolyse chlorhydrique, faite en présence d’acétate de baryum, donne un précipité lourd de SO,Ba qui est séparé, lavé et calciné. Le liquide coloré restant est préparé pour le dosage de l’hexose réducteur qui est titré par la méthode de Bertrand. Dans ces conditions 1 gr. 21 de l’acide supposé a donné 0,04 de SO,Ba, soit environ 11,3 p. 100 calculé en SO,H,. Le titrage de l’hexose réducteur calculé en glucose a donné 18 p. 100 du poids de l’acide.

Comme dans les cas précédents, ces chiffres sont très inférieurs aux chiffres théoriques calculés pour l’acide chondroïtine ou mucoï-

tine sulfurique pur, d’après la formule de Levene ; cependant, les proportions relatives de ces chiffres sont assez intéressantes.

L'ensemble de ces résultats montre que la substance interstitielle du tissu conjonctif lâche de l’oviducte de la Raie, malgré ses propriétés un peu particulières, contient bien une mucoprotéinel.

VII. - TISSU MUCO-ÉLASTIQUE DE LA CRÊTE DU COQ A. — STRUCTURE HISTOLOGIQUE.

La structure histologique de la crête du Coq a été étudiée par différents auteurs et Smith (1911) décrit, de part et d’autre de l’axe médian occupé par du tissu graisseux, une zone de tissu conjonctif fibreux; cependant, longtemps auparavant, Virchow (1852) avait signalé l’existence dans cet organe d’un tissu muqueux proprement dit. Celui-ci a été retrouvé par Champy et Kritch qui, en 1925-1926, en ont fait l'étude histologique et histo-chimique. Leurs résultats montrent qu'il s’agit d’un tissu assez particulier auquel ils donnent le nom de tissu muco-élastique. « L’axe de la crête, écrivent ces auteurs, est constitué de tissu adipeux ordinaire, entouré de deux lames de tissu conjonctif dense. Chez le Coq Leghorn, que nous avons surtout étudié, ce tissu affecte, d'avant en arrière, une forme particulière, en raquette allongée, effilée vers l'arrière. Il renferme des vaisseaux de grande taille et des nerfs abondants. De chaque côté de ce tissu, deux minces lames conjonctives denses le séparent du tissu muco-élastique. Ce dernier occupe le plus de place; chez le Coq adulte, il constitue deux lames qui se rejoignent en avant, s’épaississent au niveau de la partie renflée de la raquette et s’effi-

1. La structure fine de la paroi de l’utérus a été étudiée par Blaizot (1909) chez un Sélacien vivipare Acanthias. Cet auteur montre aux différents âges du développement et même à l’état embryonnaire (embryon de 195 mm.) l'existence d’une substance qui entoure les cellules et il la considère comme une substance précollagène. Celle-ci est particulièrement développée dans les papilles; il apparaît ultérieurement, au contact des cellules, des fibres collagènes proprement dites et Blaizot compare ces faits à ceux observés par Laguesse dans l'étude du développement de différents tissus conjonctifs. S

Blaizot ayant employé seulement les colorants du collagène (en particulier la méthode de Curtis au noir-napthol) on peut se demander si cette substance interstitielle ne serait pas, en partie tout au moins, une substance mucoïde.

84 H. GARRAULT. — ÉTUDE HISTOCHIMIQUE

lent vers l'arrière. Il est constitué de cellules grandes, anastomosées, dont le cytoplasme forme un assez fin réticulum. Les mailles de ce réticulum sont remplies d’un mucus clair, peu colorable par les méthodes ordinaires, colorable très électivement mais sans intensité par les réactifs du mucus. Le muci-carmin notamment et la muchématéine marquent électivement le tissu muco-élastique de la crête. La méthode de Prenant colore en vert le mucus et en rose grisé les travées cytoplasmiques. »

Champy et Kritch ont étudié le développement de ce tissu chez le Poulet; ils montrent que : «au cours du développement il prend naissance par dissociation des éléments conjonctifs par une substance muqueuse qui se gonfle considérablement »; et ils insistent sur le fait que, avant l’apparition de cette substance, le tissu conjonctif qui se transformera en tissu muco-élastique ne diffère aucunement des tissus conjonctifs voisins.

Ces auteurs se sont attachés particulièrement à l’étude de ce tissu parce qu'il joue un rôle dans la croissance de la crête et qu’il apparaît, disent-ils, comme « le réactif par excellence de l’hormone sexuelle, ou, au moins, d’une hormone sexuelle ».

C’est encore à propos du problème de la corrélation entre le développement des caractères sexuels secondaires et le fonctionnement des glandes à sécrétion interne, que Elkner et Slonimski (1927) ont repris l’étude de ce tissu. Pour ces auteurs, le système des fibres élastiques ne présenterait pas, dans le tissu lâche muqueux de la crête du Coq, l’importance que lui accordent Champy et Kritch, d’où le terme de fibro-mucoïde qu'ils emploient pour définir ce tissu. Ils n’observent pas non plus le réseau syncitial des cellules fibroblastiques.

Champy, Kritch et Lombard (1928) ont précisé les données histologiques et histochimiques qu'ils avaient précédemment apportées, et, après une discussion avec Elkner et Slonimski (1930), ils ont pu affirmer la réalité de la nature syncitiale du réseau fibroblastique et la structure muco-élastique de ce tissu spécial. ,

La notion la plus intéressante, d’ailleurs, réside dans le fait que la substance interstitielle, d'apparence mucoïde, qui imprègne et gonfle ce tissu particulier comme un liquide d’œdème, dépend de

l'état sexuel et que, chez le castrat par exemple, lorsque la crête régresse, la substance interstitielle disparaît et le tissu conjonctif reprend la structure d’un tissu simplement fibreux.

La structure de la crête du Coq a encore donné lieu aux travaux tout récents de Letterer (1932) et de Rommeney.

Letterer examine les différents stades de la formation de ce tissu; il montre que, comparé au tissu embryonnaire ou au tissu myxômateux, le tissu de la crête du Coq présente une structure

FiG. 37. — Crête de Coq. Aspect d’une coupe transversale de crête montrant, au-dessous de l’épiderme E, la région conjonctive muqueuse TCM, et au centre l’axe graisseux AG. Bouin, muceicarmin.

spécifique. Cet auteur montre que chez un jeune Coq il n’y a pas de mucus dans le tissu de la crête, mais qu’aux endroits, où plus tard le tissu muqueux typique sera situé, on trouve une couche relativement très riche en cellules et contenant de fines fibrilles collagènes auxquelles se mêlent de fines fibrilles élastiques. Cette région s’éclaircit à mesure que la crête croît, les fibrilles s’écartent, séparées par une masse claire et les cellules qui, au début montraient un noyau ovale et dont le protoplasme était invisible, deviennent allongées avec des prolongements en syncitium et sont placés dans les lacunes formées par les fibrilles écartées.

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Fi&. 38. —- Crête de Coq. Mucus M, coagulé, sous l’action du fixateur; C, trame collagène; FC, gros faisceaux conjonctifs; V, coupe d’un vaisseau; C, cellules. Bouin. musicarmin.

Fi1G. 39. — Crête de Coq. Aspect de la trame collagène et des cellules dans le tissu conjonctif muqueux. Bouin, Mallory.

À ce stade Letterer a remarqué que les colorations spécifiques montrent du mucus dans les zones claires. Il pense que les grandes masses muqueuses qui se formeront plus tard, naissent par néoformation; le mucus serait formé à partir du protoplasme périnucléaire.

Nos observations sur la structure histologique de la crête du Coq (H. Garrault, 1933) n’apportent aucun fait nouveau après les descriptions si complètes des auteurs que l’on vient de citer.

Comme Champy et Kritch, comme Letterer, nous avons observé les grandes cellules ramifiées et anastomosées en un réseau scyncytial plus ou moins lâche; signalons cependant que, ici comme pour d’autres tissus muqueux précédemment étudiés, la trame collagène peut être mise en évidence non seulement par les colorants spécifiques de Mallory ou de van Gieson, mais encore par l’imprégnation à l’argent suivant la méthode de Foot. Avec cette technique les fibrilles apparaissent en noir mais ne montrent ni anastomose, ni structure réticulaire (fig. 37, 38 et 39).