B. — ÉTUDE CHIMIQUE

1° Travaux de Berdnikoff et Champy.

Berdnikoîff et Champy (1931 et 1932) ont extrait la substance mucoïde et en ont étudié les propriétés chimiques. Les crêtes broyées sont traitées par l'alcool bouillant et par l’éther, puis le tissu délipoïdé est traité à chaud par NaCI à 15 p. 100. Le liquide filtré à chaud, visqueux, est dialysé contre HCI à 0,2 p. 100 et la substance muqueuse se précipite. Ce précipité, lavé à l'alcool, est redissous dans NaOH faiblé, puis précipité par l'acide acétique. L'opération étant répétée plusieurs fois, on obtient finalement une poudre grise, amorphe, donnant dans l’eau chaude des solutions colloïdales très visqueuses. Cette substance donne in vitro les mêmes réactions chromatiques que la substance muqueuse de la crête observée in situ après fixation et coupes à la paraffine.

La substance délipoïdée sèche, à partir de laquelle se fait l'extraction, représente 12 p. 100 du poids frais de la crête et la substance mucoïde sèche représente 1,5 p. 100 de la fraction délipoïdée. La

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crête fraîche donne donc environ 0,18 p. 100 de substance mucoïde sèche, soit 1,25 p. 100 de son poids sec. Ce produit extrait est soluble dans NaCI à 15 p. 100, dans les alcalis dilués : soude, baryte. C’est une substance phosphorée qui ne renfermerait pas de groupement hydrocarboné. Elle contient 14,5 p. 100 d’azote et 1,5 p. 100 de phosphore.

Les résultats négatifs obtenus dans la recherche d’un hexose réducteur, après hydrolyse de ce produit, font admettre à Berdnikoff et Champy qu'il est impossible de le considérer comme un mucoïde vrai, mais que d’après l’ensemble de ses propriétés et la présence d’une quantité assez importante de phosphore ce serait un pseudo-mucoïde appartenant au groupe des nucléoalbumines.

On remarquera que la technique de Berdnikoîff et Champy comporte dans l’un des temps de l'opération une extraction par une solution de NaCl suivie de précipitation chlorhydrique. C’est là le principe même de la technique employée par davillier pour l'extraction des nucléines. Ceci explique facilement la présence de ces composés dans la substance obtenue. Cette remarque peut d’ailleurs s’appliquer à toutes les méthodes qui conduisent à l’extraction des substances mucoïdes.

20 Extraction du mucoide.

Reprenant l’étude chimique de la substance mucoïde, nous avons cherché à l’extraire par les mêmes méthodes générales déjà utilisées dans les cas précédents.

Les différents essais ont porté sur des quantités de 1 et 2 kilos de crêtes fraîches, très soigneusement nettoyées. Ces crêtes, lavées à l’eau, essuyées, ont été broyées et la pulpe épuisée à l’eau de chaux au demi. Cette opération a été répétée jusqu’à 6 et 7 fois. Ensuite les liquides visqueux et filants sont réunis, centrifugés, puis précipités par l'acide acétique glacial. L'aspect du précipité varie un peu d’un essai à l’autre, il est soit filamenteux puis floconneux, soit sous forme de filaments épais, adhérents, s’enroulant autour de lagitateur, propriété caractéristique de beaucoup de mucoprotéides.

Ce précipité, après lavages, est redissout dans l’eau de chaux afin de le purifier, reprécipité par l’acide acétique, et, après des lavages répétés, traité par l’alcool, l’éther, puis recueilli par filtration sur un entonnoir de Büchner et séché. On obtient alors une poudre blanchâtre qui représente environ 1,5 p. 100 du poids frais des crêtes. Ce chiffre est supérieur à celui (0,18 p. 100) obtenu par Champy, ce qui tient peut-être à une extraction plus complète par la méthode classique à l’eau de chaux. Contrairement aux résultats obtenus par Berdnikoîff et Champy, l'hydrolyse sulfurique de ce corps a donné un produit réduisant la liqueur de Fehling. Ceci nous a conduit à essayer de purifier ou de fractionner le produit obtenu en utilisant la solubilité dans l’eau salée qui est à la base de la technique de Berdnikoff et Champy.

Après l’essai de solutions salines à différentes concentrations nous avons utilisé NaCI à 15 p. 100.

Le précipité acétique, décanté, centrifugé, est recueilli, lavé à l’eau distillée, centrifugé et recueilli à nouveau; il est alors broyé dans un mortier avec de l’eau distillée jusqu’à ce que l’on obtienne une pâte.

C'est à cet état que la substance mucoïde est mélangée à 2 litres de NaCI à 15 p. 100.

Après vingt-quatre heures de contact et de fréquentes agitations une première décantation sépare un liquide visqueux. On extrait ainsi plusieurs fois le précipité par l’eau salée 15 p. 100 et finalement l’on obtient deux fractions, l’une soluble dans l’eau salée 15 p. 100 et l’autre insoluble.

La partie soluble dans l’eau salée, qui devrait correspondre aux nucléines extraites, a donné, après acidification par HCI au demi, une poudre blanche correspondant à environ 23 p. 100 du poids de substance mucoïde brute. La fraction insoluble représentant le mucoïde proprement dit correspond à 47 p. 100 du poids brut de cette même substance.

On remarquera, d’après ces chiffres, qu’une partie importante est restée en solution au cours des opérations; d’autre part le traitement ultérieur de chacune des deux fractions a permis de séparer un mélange, ce qui indique bien que de telles opérations ne peuvent aboutir à une séparation correcte, ni au point de vue quantitatif

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ni même au point de vue qualitatif. Il apparaît d’ailleurs que les proportions relatives de ces fractionnements varient d’un essai à l’autre.

On a cherché à caractériser les différentes fractions en titrant le phosphore et en essayant de mettre en évidence une substance réduisant la liqueur de Fehling. A cet effet on a pratiqué l'hydrolyse sulfurique, l’hydrolyse chlorhydrique s'étant montrée dans plusieurs cas insuffisante. Le phosphore dosé par la méthode Neumann-Gregersen, après minéralisation d’un poids de 1 gramme environ de poudre mucoïde fractionnée, a donné :

Pour la partie soluble dans l’eau salée. . 0,106 p. 100 et — insoluble — er MOTOR

Il en résulte que les substances phosphorées se répartissent également dans la partie soluble et dans la partie insoluble.

Après hydrolyse, la substance hydrocarbonée se partage inégalement. Elle représente :

Pour la partie soluble RES) 442,8 —