MÉTHODE ANALYTIQUE

Aussitôt après leur extraction, les organes sont débarrassés des tissus environnants et de la graisse qui les recouvre, ils

sont ensuite divisés et pulpés finement au moyen d’un hachoir mécanique.

On prend un poids déterminé du produit bien homogène que l’on dessèche à l’étuve à la température de 105° pour doser l'eau. Le résidu sec, finement pulvérisé, est mis dans une allonge ou un appareil extracteur pour être traité par l’éther anhydre et pur. On à ainsi, après évaporation de ce liquide, le poids des graisses ou, plus exactement, de l'extrait éthéré. La portion insoluble dans l’éther est pesée puis incinérée avec les précautions requises pour obtenir les cendres. D’autre part, une seconde portion de pulpe est épuisée par vingt fois son poids d’eau distillée froide; on évapore au bain-marie d'abord, ensuite à 105°, une partie du soluté filtré, pour obtenir un extrait sec que l’on reprend par l’alcool à 80°. Après avoir été chassé, ce dernier liquide donne un extrait alcoolique et la différence avec le premier constitue ce que l’on peut appeler, avec les auteurs de l'encyclopédie chimique, l’extrait aqueux proprement dit.

Les solutions de sels neutres ayant été indiquées comme jouissant, vis-à-vis des matières albuminoïdes, d’un pouvoir dissolvant supérieur à celui de l’eau pure ; j'ai déterminé aussi l'extrait obtenu, d’une part, au moyen de la solution physiologique de chlorure de sodium à 7 pour 1000 et, d’autre part, avec une liqueur beaucoup plus concentrée {10 p. 100) pour entraîner les globulines. On verra plus loin si cette prévision s’est trouvée réalisée.

Pour obtenir le poids de toutes les matières albuminoïdes contenues dans un organe, deux dosages d’azote ont été elfectués : l’un total, sur une partie de l’organe complet, l’autre sur la pulpe épuisée préalablement par l’eau froide. La deuxième opération permet d'évaluer l’azote des albumines qui, multiplié par le coefficient 6,41, donne le poids de celles-ci. Les eaux de lavages sont recueillies, exactement mesurées et on y dose, par simple coagulation en présence de l'acide trichloracétique, les matières albuminoïdes entrainées avec l’extractif, ce poids doit être ajouté au précédent pour avoir les albumines totales.

C’est la méthode de Kjeldahl, qui a été constamment suivie

pour la détermination de l'azote. On sait qu’elle consiste à détruire les matières organiques par l’acide sulfurique pur aidé de la chaleur jusqu’à ce qu’on ait une liqueur à peine teintée de jaune; arrivé à ce moment et après refroidissement complet, on peut y ajouter une pincée de permanganate de potasse, en chauffant encore quelques instants on obtient enfin un produit incolore, contenant tout l’azote à l’état de sulfate d’ammoniaque. Cette base a été mise en liberté dans l’appareil à distillation de Schlæsing, en la chassant par un excès de soude dans un volume connu d’acide sulfurique titré. On a ainsi, par un simple dosage acidimétrique, la quantité d'azote contenu dans la substance en expérience. Cette méhode est relativement commode et très constante dans les résultats

qu’elle fournit. En outre elle est beaucoup plus rigoureuse que

tous les procédés gazométriques expéditifs qui mettent l’azote en liberté au moyen de l’hypobromite.

Quant aux matières extractives comprenant la créatine, la sarcine, la xanthine, l'acide urique, la tyrosine, la leucine, etc., elles se trouvent en trop faible proportion dans les organes pour qu’il soit possible de les séparer et d’en faire un dosage direct ; il faudrait disposer pour cela de plusieurs kilogrammes de tissu, ce qui est une condition souvent difficile à remplir en une seule fois. Je les ai évaluées en diminuant de l’ensemble des matières organiques la somme des albumines, des graisses et de l’urée. Pour cette dernière, l’organe pulpé a été épuisé par l’eau; après filtration les liqueurs ont été additionnées de quatre volumes d’alcool à 90°, puis on a concentré et précipité par le sous-acétate de plomb. C’est alors que l’urée a été dosée en introduisant dans un uréomètre une partie du liquide filtré et un excès d'hypobromite de soude.

Quand il ÿ avait lieu de connaître la quantité de glycose, l'organe, préleve aussitôt la mort de l’animal, était épuisé par l’eau bouillante et, dans la solution éclaircie et évaporée en grande partie, on dosait le sucre avec la liqueur de Fehling.

Dans le cas du glycogène, la glande était d’abord plongée dans l’eau bouillante pour éviter la formation de glycose aux dépens du corps recherché, puis on broyait le tissu avec une

solution d'acide acétique et d’acide trichloracétique à 2 pour 100 de chaque. Le magma étant épuisé par l’eau on additionnait la liqueur de trois volumes d'alcool à 90°. Le précipité de glycogène, recueilli sur un filtre, puis égoutté et mis en suspension dans l’eau, était saccharifié à l’ébullition par l'acide chlorhydrique dilué; un titrage avec le réactif cupro-potassique donnait ainsi le glycose provenant du glycogène hydrolysé. On sait d’autre part que o gr. 90 de ce dernier donnent 1 gramme de glycose.

Certains éléments n’ont pas été recherchés et titrés dans toutes les glandes, tels sont le fer, que j'ai dosé seulement dans la rate et le foie, et l’iode, qui n’est pondérable que dans le corps thyroïde. Le fer a été évalué colorimétriquement en liqueur sulfurique et l’iode par la méthode volumétrique que j'exposerai en détail à propos de la glande thyroïde.

On peut, pour la clarté de cette étude, diviser les organes, d’après leur fonctionnement, en trois groupes : le premier renfermant les glandes closes sans conduit excréteur, c’est-àdire le corps thyroïde, la rate et les capsules surrénales ; dans le second figurent celles qui sont pourvues d’un canal excréteur, tels sont le pancréas et le foie; enfin, dans le troisième groupe, on étudiera le rein et les ovaires, qui ne constituent pas, à proprement parler, des glandes.

Glanäe thyroïde.

L'étude chimique de la glande thyroïde, appelée aussi glande du cornet, est déjà ancienne; la première analyse faite par Oidtmann date de 1858. Cet auteur s’est contenté de déterminer l’eau, les substances organiques et minérales. Plus tard, Frerichs, Stœdeler et Gorup-Besanez découvrirent, dans le même organe, la présence de la leucine, de la xanthine, de la sarcine, des acides gras volatils, de l'acide lactique, de l’acide succinique et de la cholestérine. Puis, cette question ne fut plus guère étudiée jusqu'au moment où Vemploi du corps thyroïde contre le crétinisme, le goitre, le

myxædème et l’obésité attira de nouveau l’attention des chercheurs sur son activité toute particulière,

Au commencement de l’année 1895, plusieurs recherches furent entreprises pour isoler les principes actifs auxquels cette glande doit ses propriétés.

D’après Notkin, elle contiendrait deux principes albuminoïdes différents : le thyréoprotéide et la thyréoïdine épurée. Le premier, qui, à l’état sec, se présente sous la forme de lamelles transparentes, est un composé très toxique. Il peut se dédoubler dans certaines conditions et donne, entre autres produits, un hydrate de carbone très difficile à transformer en un corps réducteur. Lorsqu'on ajoute du perchlorure de fer à une solution concentrée de ce thyréoprotéide, il se forme un dépôt gélatineux. Le tannin précipite aussi cette liqueur en donnant, suivant la concentration, un coagulum floconneux ou un précipité gélatineux transparent. L'alcool la précipite également, le coagulum obtenu ne tarde pas à devenir difficilement soluble dans l’eau.

Administré à la dose de deux grammes par kilogr. d'animal, le thyréoprotéide produit une intoxication aiguë et mortelle. L'action est d’abord excitante puis paralysante, elle porterait vraisemblablement sur le système nerveux central.

La thyréoïdine épurée est composée d’au moins deux corps albuminoïdes, dont l’un possède la propriété d’une globuline et l’autre, plus important au point de vue physiologique, est de la nature des enzymes. Cette thyréoïdine est constituée par une poudre hygroscopique, d’un jaune pâle, donnant une solution visqueuse; elle est encore plus toxique que le thyréoprotéide et provoque surtout des phénomènes d’excitation.

Notkin comprend alors le rôle du corps thyroïde comme suit : Le thyréoprotéide cst un produit des échanges organiques, l’autre est plutôt un principe spécifique élaboré par les cellules de la glande; elle agirait comme ferment sur le thyréoprotéide qui serait décomposé et perdrait sa toxicité. Lorsque la fonction du corps thyroïde est détruite par extirpation de cet organe, le thyréoprotéide s’accumule constamment dans l'organisme, d’où une intoxication aiguë. Quand la glande disparaît peu à peu par atrophie, on voit se produire

les symptômes du myxædème; si une partie seulement de l’épithélium à sécrétion spécifique est détruite, le thyréoprotéide s’accumule dans la glande et provoque le développement du goitre commun. La thyréoïdine n'étant pas attaquée par le suc gastrique, on s'explique que ce produit, administré à l’intérieur, soit efficace contre le myxæœdème et le goitre, puisqu'il peut passer dans l’organisme et décomposer le thyréoprotéide qui s’est accumulé.

À peu près à la même époque, Frænkel a soumis la glande thyroïde à un examen chimique et physiologique, la traitant par divers dissolvants et essayant sur l’homme et les animaux l’action des précipités et filtrats obtenus successivement.

De grandes quantités de glandes furent traitées par l’eau à froid, à chaud et à l'ébullition. Les liquides portés à l'ébullition furent additionnés goutte à goutte d'acide acétique afin de précipiter toutes les albumines et nucléo-albumines. Le coagulum était inactif, la solution filtrée au contraire possédait les propriétés de la glande. Il n’y eut donc plus à s'occuper que du liquide, celui-ci fut additionné d’acétate de plomb et filtré, puis après élimination du plomb par l'hydrogène sulfuré, la liqueur fut évaporée jusqu'à consistance sirupeuse et le résidu repris par l’alcool. En additionnant la liqueur obtenue d’éther ou d’acétone, il se précipita une substance qui fut recueillie et desséchée dans le vide.

Frænkel considère cette matière comme l’acétate du principe actif cherché; il la décrit comme cristallisée, mais il est plus probable qu'il s’agit d’un produit en lamelles et qui est amorphe comme la pepsine en paillettes par exemple.

Ce produit est désigné par l’auteur sous le nom de thyréoantitoxine. Elle précipite par la plupart des réactifs des alcaloïdes, serait un dérivé de la guanidine et aurait pour formule CfH''Az*O*.

Viennent ensuite les travaux de Baumann et Roos, paraissant établir que l’action de la glande est due surtout à un composé organique iodé qu’ils sont parvenus à extraire du corps thyroïde.

Ils soumettent la glande hachée à l’action prolongée de l'acide sulfurique dilué à 10 pour 100 et à la température

d'ébullition; par refroidissement il se fait un dépôt floconneux qu'on sépare en filtrant. Ce précipité est épuisé par l'alcool à 85° et l’extrait alcoolique est évaporé. Après avoir débarrassé le résidu par l’éther de pétrole des graisses et des acides gras qu'il contient, il reste une masse qu'on peut dissoudre dans une lessive de soude à 1 pour 100; par addition d'acide sulfurique dilué on en précipite la thyroïodine ou iodothyrine qui représente environ de 0,20 à 0,50 pour 100 de la glande fraîche. Le rendement est plus fort lorsqu'on a recours à la digestion des glandes par le suc gastrique artificiel; dans ce cas, la thyroïodine reste inattaquée et en suspension dans le liquide. On la sépare et on la purifie comme plus haut.

Une très petite quantité de cette iodothyrine serait libre dans le corps de la glande, la majeure partie serait combinée à des substances albuminoïdes; il y aurait ainsi une thyroïodoglobuline et une thyroïodalbumine. Ces différentes substances possèdent l’action physiologique du sue thyroïdien; elles arrêtent les secousses musculaires des animaux thyroïdectomisés, agissent comme lui sur la nutrition, possèdent sa toxicité et son action thérapeutique dans le cas de myxedème.

L'année suivante, c’est-à-dire en 1896, Drechsel retira d’un extrait aqueux thyroïdien, débarrassé des matières albuminoïdes, deux bases cristallisées dont l’une parait être la base de Fraenkel tandis que l’autre en diffère ainsi que de l’iodothyrine. e

En 1898, de nouvelles recherches furent entreprises par Tambach sur la chimie de l’iode dans la glande thyroïde. D’après Baumann et Roos, les combinaisons peu stables de thyroïodine avec une globuline et une albumine seraient détruites par les acides dilués ou les alcalis et par la digestion gastrique artificielle et dans tous les cas on doit obtenir de la thyroïodine. Si, par exemple, les glandes sont traitées par une solution de sel marin jusqu’à ce que le résidu soit dépourvu d’iode, l'acide acétique et la chaleur précipitent de la liqueur les corps albuminoïdes iodés; si on soumet ceux-ci à la digestion artificielle, les matières albuminoïdes combinées

à l’iodothyrine seraient solubilisées, tandis que cette dernière resterait comme résidu insoluble inattaquable.

Dans ses travaux sur la digestion artificielle des matières albuminoïdes iodées de la glande thyroïde, Tambach est arrivé à formuler des conclusions un peu différentes, en ce sens qu'il ne croit pas à l'existence des combinaisons de l’iodothyrine avec une globuline et une albumine.

En soumettant la glande à üne digestion gastrique active, il a réussi à faire passer 98 pour 100 de l’iode total dans les produits solubles de la digestion. De cette liqueur il a isolé de l’iodsyntonine, de l’iodalbumose et de l’iodpeptone; pendant que 2 pour 100 seulement de l’iode de la glande restent comme résidu floconneux insoluble. Mais à aucun moment de la digestion gastrique ou même pancréatique d’une matière albuminoïde iodée, il n’a séparé de thyroïodine. L'auteur n’accepte donc pas que ce dernier corps soit combiné à une albumine. L'iode serait plutôt substitué puisque, par une manipulation peu violente (digestion artificielle), il passe en solution sous forme de syntonine, d’albumose et de peptone; alors que sous l'influence d’un traitement énergique par les acides étendus ou les alcalis, c’est-à-dire par la destruction de la molécule albuminoïde, comme l’a fait Baumann, il est possible d'extraire de la thyroïodine.

De mon côté, j'ai toujours constaté que les extraits pepsiques et pancréatiques complètement solubles dans l’eau, contenaient la presque totalité de l’iode qui se trouvait primitivement dans la glande.

DosacE DE L'i10DE. — Bien que l’iode ne soit pas le seul principe actif, il est néanmoins important d'en exécuter le dosage rigoureusement, dans la glande ou les préparations pharmaceutiques dont elle est la base.

Baumann et Roos ont mis à profit la méthode colorimétrique déjà indiquée par Rabourdin. Ces auteurs recommandent d’introduire dans un creuset d'argent 1 gramme de fibrine sèche, 5 centimètres cubes d’une solution d’iodure de potassium à o gr. 10 par litre, puis 2 grammes de soude caustique, on ajoute o gr. 50 de nitrate de potasse et on chauffe le creuset avec précaution. On achève la combustion

en ajoutant peu à peu de petites quantités de nitrate. La matière fondue est dissoute dans 25 à 30 centimetres cubes d’eau; après filtration on laisse refroidir, on ajoute 10 centimètres cubes de chloroforme, de l’acide sulfurique à 20 pour 100 jusqu'à excès et on agite. Le liquide est versé dans un tube à essai de 24 millimètres de diamètre et on cherche combien il faut ajouter de solution d’iodure de potassium dans un deuxième tube contenant 10 centimètres cubes de chloroforme, 5o centimètres cubes d’eau, un peu d’acide sulfurique et quelques gouttes de nitrite de soude pour obtenir une coloration identique. Cet essai a pour but d'apprécier les pertes subies pendant les manipulations; elles ont été dans un cas de 16 centièmes d’iode et dans un autre 10 centièmes. On procède alors de mème avec la glande et on apprécie la quantité d’iode par comparaison avec la solution titrée d’iodure de potassium.

La capsule d'argent est une cause de pertes importantes et variables ; en outre, ce procédé colorimétrique m’a paru moins sensible et plus difficilement applicable que le titrage volumétrique au moyen de l’hyposulfite de soude. Voici la méthode que J'ai toujours suivie pour les dosages relatés plus loin.

5 grammes de glande sont triturés avec environ dix fois leur poids d’un mélange de 1 partie de carbonate de soude et 2 parties de nitrate de soude. On chauffe dans un creuset couvert en porcelaine ou en platine que l’on porte au rouge jusqu’à fusion; après refroidissement, la masse est reprise par l’eau, la solution, filtrée s’il y a lieu, est placée dans une boule à robinet, elle est additionnée d’un peu de chloroforme et goutte à goutte d’un léger excès d’acide sulfurique chargé de vapeurs nitreuses. On agite, après écoulement du chloroforme, la liqueur est épuisée à plusieurs reprises avec quelques centimètres cubes du même dissolvant que l’on sépare encore du liquide pour le réunir au premier. La solution, mise dans un flacon bien bouché, est lavée avec 3 ou 4 fois son volume d’eau distillée jusqu'à ce que les lavages n’entraînent plus d'acide. On procède enfin au dosage avec une solution très étendue d’'hyposulfite préalablement titrée de telle sorte qu’un centimètre cube corresponde à quelques milligrammes seule-

ment d'iode. Cette liqueur est ajoutée goutte à goutte à la solution chloroformique d'iode et on agite chaque fois vigoureusement avant de faire une nouvelle addition; on peut facilement obtenir la décoloration finale avec une seule goutte, ce qui peut représenter une approximation d'un dixième de milligramme environ.

D'après Tambach, la quantité absolue d’iode serait à peu près toujours la même dans la thyroïde du porc, quelle qu’en soit l’origine; au contraire, la teneur en combinaisons albuminoïdes iodées serait soumise à des variations importantes suivant l’époque de l’année et l’origine.

Chez le mouton la proportion de ce métalloïde a été trouvée assez variable avec l’âge, l’habitat et la saison. Voici les résultats donnés par Baumann ; ils ont été rapportés à 100 grammes de glande fraiche ou sèche, pour les rendre comparables à ceux qui ont été publiés par d’autres auteurs.

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