LE MILIEU
À. — Sérum humain normal.
Le sérum est nécessaire à La phagocytose, sans lui, elle ne se fait pas. Une proportion de moitié qui est celle que nous avons utilisée est excellente.
Il est de toute nécessité de se servir de sérum frais pris : aussi aseptiquement que possible. Ce sérum est pris à un individu de bonne santé apparente, une hémiplégique par exemple, ou l’opérateur lui-même :
Un sérum vieux, à moins qu'il n’ait été conservé au
froid, à une température de 0° à 5° n’a plus le même
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pouvoir leuco-activant, il peut empècher ou contrarier la phagoeytose.
Un sérum infecté fausse les résultats d’une autre
façon. Les leucocytes digèrent les éléments infectieux au détriment des levures, et de l’exactitude des résultats.
Il faut donc prendre du sérum, parce qu’il est nécessaire à la réaction, et le prendre frais etaseptique pour avoir de bons résultats. |
Le sérum humain n’est pas tout à fait indispensable. Le sérum de cheval peut leremplacer, mais la réaction se fait plus lentement, le sérum de cheval est moins leuco-activant que le sérum humain.
La difficulté de se procurer du sérum humain au moment voulu et en quantité suffisante nous à conduit
à utiliser le liquide d’ascite pris et conservé d’une facon
aseptique.
Le laboratoire de M. Carrion a bien voulu nous en conserver en ampoules de cinq et dix centimètres cubes, c’est de celui-là dont nous nous sommes servi. Le milieu ascite est excellent, il n’a qu’un petit défaut qu'avec attention on évite. Le sang et les levures s’y maintiennent un peu moins bien en suspension homogène. Aussi il faut mêler avec soin, sang, levures et milieu, ne pas laisser plus de vingt-cinq à trente minutes à l’étuve, el la réaction se fait parfaitement bien. Avec celte réserve, le liquide d’ascite garde tous ses droits,et bénéficie de ses avantages d’origine.Ilse conserve très bien.
B. — Solution saline citratée.
Elle a pour formule:
| Chlorure de sodium . . . 7 ge. 50 Citrate de soude + . . : 6 gr.
au distillée#61,508 M LE 000 rer:
En somme, le sérum de Hayem complété par du citrate de soude qui empèche la coagulation du sang pendant la réaction. :
Cette solution est filtrée et stérilisée.
Filtrée, pour que des corps étrangers, fils de coton par exemple, n’attirent pas et ne retiennent pas levures et leucocytes dans le tube à réactif.
j Stérilisée,nous avons dit pourquoi à propos du sérum. |
Cette solution saline citratée est employée telle pour nos recherches in vivo. Nous y avons ajouté pour nos recherches in vitro une quantité variable de l’agent à étudier, morphine par exemple de façon à garder dans tous les tubes et dans le tube témoin, le rapport d’égalité entre la quantité de sérum ou d’ascite employée, et
la quantité de solution saline citratée.
2° RÉAGTIFS CO. — Levures de muguet.
(4 Ces levures obtenues par culture sur gélose sont émul- :
sionnées dans la solution säline citratée, filtrée et stérilisée.
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Il faut avoir soin de prendre des levures adultes et nous nous sommes servi de levures bien poussées sur gélose à l'étuve et laissées quelque temps hors de l’étuve à la température du laboratoire, toutes les levures sont sensiblement égales. On en prend aseptiquement un petit ose de platine que l’on brasse dans 2 à 3 centimètres cubes de solution saline citratée filtrée et stéririlisée. k ù
Une teinte pâle, à peine lactescente, presque transparente de l’émulsion, teinte que l’œil retient vite,est celle que nous avons adoptée el qui ne peut guère s'indiquer que par uu échantillon.
Cette émulsion ne doit être ni trop riche,ni trop pauvre. Trop pauvre,les leucocytes n’entrent pas en contact suffisant avec les levures, trop riche ils phagocytent trop et la numération devient malaisée sinon impossible. |
Le laux optimum est d'environ 60.000 levures par millimètre cube à cetaux 100 leucocytes digèrent environ 100 à 120 levures. La numération est facile et les résultats sont très bons.
Nous employons cette émulsion à la dose de 1/20 soit une goutte pour 20 du milieu.
Nous avons pensé au début qu'il serait bon d'avoir des échantillons absolument comparables car les leyures ont peut-être, elles aussi, leur activité ou leur contre-activité. Pour cela, nous les avons formolées, en les laissanien eontacl durant vingt minutes avec une s0lution de formol du commerce à 4°/,.Ainsi elles étaient juste tuées.Nous nous débarrassions avec beaucoup de
Le soin du formol, par centifugations et lavages successifs dans la solution saline citratée.
Cette préparation, qui a quelque valeur pour des examens pratiqués à plusieurs jours d'intervalle pour être
sûr d'opérer avec deséchantillons identiques n’en a plus
lorsque les examens sont faits au même moment en
présence d’un tube témoin Normal.
Nous avonsreconnu que cette préparation n’était pas
indispensable.
D. — Les leucocytes
Les leucocytes sont contenus dans la goutte de sang prise après piqûre à la pulpe digitale de la personne
observée.
/ Tous les leucocytes n’ont pas une égale activité pour
les levures. Les mononucléaires ne phagocytent pour ainsi dire jamais, les polynucléaires éosinophiles rarement. Nous avons pris les polynucléaires sans granulations comme terme de comparaison, nous avons éli-
miné les autres.
