EXAMEN MICROSCOPIQUE. — COLORATIONS

28, 30, 35 degrés, le développement peut être un peu plus rapide : souvent l'évolution est la même qu'à 24 degrés. Parfois, à cette dernière température, la germination est moins rapide et demande vingt-quatre et vingt-six heures pour être complète. Si l'on fait usage de températures plus basses, plusieurs jours peuvent être nécessaires pour l'évolution totale de la spore. Dans certains cas même, Lucet a vu les organes fructifères ne pas se développer, soit que les têtes sporifères manquent complètement, ou qu'elles ne se couvrent pas de stérigmates ; mais, la vitalité n'en persiste pas moins, et il suffit de transplanter ce mycélium pour le voir parcourir son cycle complet.

B. — Examen microscopique. — Colorations.

Pour examiner l'aspergillus fumigatus, on peut faire des préparations et les monter à l'eau simplement, ou bien employer la méthode de Crookshank qui donne d'excellents résultats pour l'étude des moisissures : il suffit de placer une goutte de glycérine sur une lame, une goutte d'alcool sur une lamelle, d'apporter un fragment de champignon sur l'alcool, de renverser la lamelle sur la lame et de maintenir le tout sur une flamme (lampe à alcool ou bec de Bunsen) jusqu'à formation de bulles d'air : après deux ou trois chauffages semblables, mais légers, on presse la lame contre la lamelle, on laisse refroidir et on lute.

Rénon. — Aspergillûse. 4

50 l'aspergillus fumigatus.

On peut aussi examiner le champignon en versant sur lui une goutte de solution aqueuse de potasse (potasse caustique, 40grammes; eau distillée, 60 grammes). On recouvre d'une lamelle de verre, puis on chauffe doucement à la flamme (lampe à alcool ou bec de Bunsen), pendant trois à quatre secondes, sans aller jusqu'à l'ébullition.

On peut faire l'examen du parasite après son développement en gouttes pendantes, en le traitant par l'acide acétique cristallisable , d'après le procédé employé par notre ami Bodin (1) pour les trichophytons et le microsporon Audouini : il suffit de verser une goutte de ce liquide sur la lamelle contenant le champignon. L'acide acétique en fixe les spores et tous les éléments. En général, la préparation ne se conserve pas, par suite de l'évaporation rapide de l'acide acétique, et il faut la dessiner immédiatement à la chambre claire : d'après Delacroix, il serait cependant possible de garder ces préparations en les montant dans la glycérine, après évaporation de l'acide acétique, et en colorant par l'éosine ou par une solution dans l'acide lactique de bleu coton G. L. B.

Enfin, on peut employer des matières colorantes, en utilisant la fuchsine de Ziehl très étendue d'eau, une solution hydro-alcoolique très diluée de bleu de méthylène ou de violet de gentiane. La saf ranine, en solution aqueuse peu concentrée, nous a donné d'excellents résultats : en laissant cinq à dix minutes

(1) E. Bodipi, Les teignes tondantes du cheval et leurs inoculations humaines. Thèse de Paris, 1890, p. 121.

CULTURES. bl

dans cette solution, nous avons obtenu une belle coloration du mycélium et des spores qui prennent une couleur rouge orangé clair.

La coloration par l'éosine aqueuse en solution à 1 p. 100, donne aussi de belles préparations : il suffit de laisser la lame ou la lamelle pendant trois minutes dans le bain colorant. La thionine colore également bien toutes les parties constituantes de l'aspergillus fumigatus : nous l'utilisons pour cet usage depuis deux ans, en employant la formule de Nicolle :

Thionine 50 centigrammes.

Acide phénique 1 gramme.

Alcool absolu 10 cent, cubes.

Eau distillée 90 —

Il suffit de laisser une minute à peine dans cette solution, puis laisser sécher et monter au baume.

On peut, pour l'examen de toutes ces préparations, se servir de grossissements variés (objectifs 4, 6 ou 7) ; mais, pour l'examen en gouttes pendantes, l'emploi des objectifs à immersion nous paraît indispensable, pour permettre de juger utilement de la structure et du mode de développement du parasite.

G. — Cultures.

Au début de nos études sur l'aspergillose, nous avons été assez embarrassé, pour obtenir de belles cultures d'aspergillus fumigatus, et nous avons employé tout d'abord les milieux communs ordinaires de la bactériologie : nous allons indiquer d'une

52 L'ASPERGILLUS FUMIGATUS.

manière successive les résultats obtenus. Sur bouillon peptonisé légèrement alcalin, le développement est très lent: au bout de trois à six jours apparaît une trace de mycélium, et il est très rare que le champignon vienne jusqu'à fructification.

Sur gélatine mise à l'étuve à 22 degrés, le développement est encore plus lent; pendant une quinzaine de jours le mycélium seul apparaît, et ce n'est souvent qu'au bout de trois à quatre semaines que se développent les spores, qui prennent une couleur noirâtre et sont en petit nombre : la culture est maigre. L'aspergillus fumigatus liquéfie la gélatine à la longue, et cette liquéfaction ne nous a guère paru être complète qu'au bout de quatre semaines.

La gélose ordinaire convient mal au développement du champignon, qui forme au bout de trente heures sur la strie d'ensemencement une raie blanche de mycélium ; les spores n'apparaissent que le troisième jour ; d'abord verdâtres, elles prennent une couleur noire caractéristique au bout de cinq jours de séjour à l'étuve.

Enfin, sur sérum sanguin peptonisé, nous n'avons jamais obtenu que des cultures de mycélium avec quelques rares spores vert foncé.

Mais, dans ces milieux habituels, l'aspergillus pousse mal, et ne présente jamais que des cultures chétives, avec un nombre de spores peu considérable. La cause de cette maigre végétation tient tout entière à l'emploi des liquides alcalins, peu favorables au développement des moisissures ; si on leur donne au