CHAPITRE IV

LÉSIONS ASPERGILLAIRES EXPÉRIMENTALES.

Ces lésions, produites par les inoculations de spores d'aspergillus fumigatus aux animaux, sont très multiples et dépendent en grande partie du mode de contamination employé.

La yoie sanguine, artérielle ou "veineuse dissémine les spores dans presque tous les organes, reins, poumons, foie, péritoine, plèvres, muscles, intestins, moelle des os; mais tous les organes ne sont pas égaux devant l'infection mycosique. Tandis que chez les oiseaux, surtout chez le pigeon, c'est uniquement le foie qui est atteint, chez le cobaye et le lapin, ce sont les reins que l'on trouve toujours altérés. Nous aurons soin d'ailleurs, dans la description des lésions de chaque organe, d'indiquer la fréquence de l'altération par les diverses voies.

Quels que soient les organes atteints, toutes les lésions de l'aspergillose expérimentale revêtent une forme unique, la forme de lésions tuberculeuses ; aussi, dans bien des cas, le diagnostic avec la tuberculose bacillaire de Koch eût-il été impossible sans l'emploi

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rigoureux de la méthode de différenciation sur laquelle nous avons insisté plus haut.

A. — Méthodes de recherches du champignon dans les organes. — Technique des colorations.

On peut constater dans les organes la présence du mycélium de l'aspergillus fumigatussans recourir aux colorations. Il suffit pour cela d écraser un fragment d'organe entre deux lames et de placer la pulpe écrasée ainsi obtenue dans une solution de potasse à 20 p. 100 pendant quelques minutes : en recouvrant ensuite avec une lamelle et en examinant au microscope, on peut voir les rameaux de mycélium et les spores, s'il en existe encore.

Pour avoir de belles préparations, c'est une autre technique qu'il convient de suivre. On recueille un fragment d'organe aussi près que possible du moment de la mort, on le débite en petites tranches de deux, trois ou quatre centimètres de longueur, d'une épaisseur d'un à un demi-centimètre. On peut, dans les cas très urgents, placer ces morceaux sur le microtome à congélation par l'éther ou le chlorure de méthyle ; en procédant ainsi, il est possible d'obtenir des coupes suffisantes pour l'examen bactériologique du champignon, mais souvent moins bonnes pour l'étude des réactions histologiques des tissus, en raison de leur fréquente altération.

Pour avoir d'excellentes préparations, il vaut mieux recourir à d'autres procédés, et fixer les élé-

MÉTHODES DE RECHERCHES DU CtlAMPIGNOiX. 97

ments, soit en plaçant les fragments dans de l'alcool à 95 degrés ou plutôt dans de l'alcool absolu, soit, ce qui est de beaucoup préférable, en les plongeant pendant vingt ou vingt-quatre heures dans une solution de sublimé acétique. On peut employer pour cet usage du sublimé à saturation dans l'eau distillée, dans laquelle on ajoute 5 p. 100 d'acide acétique cristallisable. On lave les morceaux dans l'eau distillée, puis on les place, soit dans la série des alcools à 36 degrés, 60 degrés, 90 degrés, et alcool absolu, soit dans l'acétone dilué, dans trois quarts, dans moitié d'eau, puis dans l'acétone pur, mais en ayant grand soin de ne pas les laisser trop longtemps dans ce dernier liquide, pour que le durcissement ne soit pas exagéré. On inclut dans la celloïdine, ou, ce qui est plus commode, dans la paraffine, et on pratique sur ces fragments, par les procédés usuels, des coupes suffisamment minces, qu'il reste à colorer.

Au début de nos études sur l'aspergillose, nous avions employé, comme l'indiquent MM. Dieulafoy, Chantemesse et Widal, après coloration au picrocarmin de Orth, soit la méthode de Weigert avec décoloration à l'huile d'aniline, soit la méthode de Gram avec décoloration rapide par l'alcool absolu, achevée ensuite avec l'essence de girofle. Nous devons dire qu'à cette période de début de nos recherches, la coloration avec le violet de genliane nous a paru difficile, parce qu'à tout coup nous décolorions les champignons. Une méthode qui nous a bien réussi par la suite a été, soit de laisser la

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préparation au moins vingt minutes dans le violet, soit de chauffer légèrement sur la platine jusqu'à ce qu'il se dégage de légères vapeurs du porte-objet; de cette façon nous sommes arrivé à une coloration assez intense du mycélium. MM. Gaucher et Sergent ont observé également cette difficulté de coloration du mycélium : ils ont essayé, mais sans plus de résultat, la coloration du fond du parenchyme à l'éosine alcoolique, et celle de l'aspergillus au bleu du Kiihne avec décoloration par l'alcool et l'essence de girofle, après fixation préalable par une solution de tannin au dixième. Une autre méthode leur a mieux réussi : laisser les coupes vingt-quatre heures dans le violet de gentiane aniliné et quatre à cinq minutes dans la solution de Lugol, puis décolorer par l'alcool absolu et l'huile d'aniline. Lucet, en usant du même procédé, a obtenu de fort bons résultats.

Depuis le mois de janvier 1895, nous avons substitué à l'emploi de la méthode de Gram et de Weigert, l'usage de la thionine phéniquée d'après la formule que nous avons donnée plus haut (voir page 51). On laisse les coupes une minute à peine dans le bain colorant, on lave rapidement à l'eau distillée, puis on décolore avec quelques gouttes d'alcool absolu ou d'acétone pur. Il suffit de passer au xylol et de monter dans le baume pour avoir de fort belles préparations, dans lesquelles le mycélium est coloré fortement en rouge violet et les éléments en tons bleus de nuance variable du plus joli aspect.

Le seul reproche que l'on puisse faire à ce procédé, d'une pratique courante et facile, c'est que parfois, avec une thionine qui n'est pas d'excellente qualité, la préparation peut se décolorer à la longue. Avec de la thionine allemande, nous avons très rarement noté cet inconvénient.

B. — Lésions macroscopiques et microscopiques observées

dans les organes.

1°. Appareil rénal. — Ainsi que Grohe, Block et Grawïtz l'avaient remarqué les premiers, les reins sont profondément et constamment atteints chez le lapin : il en est de même chez le cobaye, et il n'y a presque rien à ajouter à la description de ces auteurs. Ces organes sont doublés ou quadruplés de volume : leur surface est rouge, congestionnée et criblée de petits points jaunâtres, un peu saillants, de forme tuberculeuse, et du volume d'une tête d'épingle. La capsule est épaissie et infiltrée, mais se laisse assez facilement détacher sans qu'il y adhère de parcelles du parenchyme. Quand on coupe le rein dans sa longueur, on voit que les points blancs de la surface se prolongent dans la profondeur sous forme de stries dirigées vers le hile : toute la substance corticale est criblée de nodules blanc jaunâtre, un peu saillants sur la coupe, du même volume que ceux observés sous la capsule. Les uns sont arrondis, les autres sont allongés, formant de véritables stries dirigées dans le sens de celles de la surface médullaire,

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et s'étendant plus ou moins loin d'un côté a ers la capsule et de l'autre vers cette substance, dans laquelle ils pénètrent rarement jusqu'à la papille. Ces nodules blanchâtres, limités, sont entourés d'une zone congestive ou même hémorrhagique, qui peut rester isolée ou se fusionner plus ou moins avec les voisines. Quand les lésions sont très avancées, il n'est pas rare d'observer, en enlevant la capsule, un peu de pus crémeux très épais s'échappant des nodules, et qui résulte de la fonte purulente de ces foyers.

Histologiquement, on voit que les nodules sont essentiellement formés d'un feutrage de filaments mycéliens. Ceux-ci prennent en général naissance dans un glomérule pour s'étendre dans tous les sens, traverser la paroi des capillaires, la capsule de Bowmann, la paroi des tubes urinifères, pénétrer indistinctement tout le tissu, et prendre une disposition radiée à la périphérie des ilôts mycosiques. Quand il a pénétré dans un tube urinifère, le mycélium se propage très rapidement dans la lumière de ce tube qu'il oblitère presque complètement. Dans toute la zone envahie par le parasite, les éléments du tissu rénal sont nécrosés; les cellules sont gonflées, troubles; leurs noyaux ont perdu la faculté de prendre les matières colorantes. Toutes ces parties sont infiltrées par une quantité considérable de leucocytes mono et polynucléaires, tassés contre les fragments du mycélium, et prenant même par endroits un aspectcaséeux, surtout si la mort a été tardive : dans certains cas même, c'est à une matière d'apparence

franchement purulente que l'on a affaire. Les fragments de mycélium deviennent d'autant moins appréciables que ces lésions sont plus avancées, et ils

Fkr. 2. — Foyer aspergillaire dans un rein de lapin. — a, glomérule. — b, tubuli contorti. — c, foyer caséeux en voie de développement (Leitz, obj. 7, oc. 3).

peuvent disparaître complètement des foyers morbides, détruits par une véritable phagocytose. Quand la terminaison fatale est précoce, la leucocytose est beaucoup moins abondante ; c'est là un point que nous avons bien souvent vérifié et dont nous donnerons plus loin l'explication en parlant des premiers stades de l'infection. Mais ce qui est très remarquable,