FILTRATION DE DIVERSES BACTÉRIES
Parmi les germes pathogènes que nous nous proposons d'étudier à morphologie définie, capables de fournir des formes filtrantes, certains nous ont d’abord été connus par leur Caractère d’invisibilité et les modifications qu’ils pouvaient provoquer, d’autres au contraire suffisamment gros pour être retenus par les bougies et ne pas être retrouvés à l’examen direct des lamés de filtrats, n’ont manifésté leur ultra-filtration que secondairement. En d’autres termes, tandis que les premiers appartenaient primitivement au domaine des virus filtrants, et qu'ils sont entrés secondairement dans celui des infra virus, les seconds classés parmi les bactéries non filtrantes et visibles ont montré qu'ils pouvaient, dans certaines conditions, traverser les filtres et par bien des points communs se ranger à côté des infra virus. Partant de cette donnée, nous avons classé dans un même chapitre les agents pathogènes de la péripneumonie des bovidés, les pneumosintes et les spirochètes
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de la fièvre récurrente ainsi que le typhus exanthématique. Un autre chapitre comprendra le streplocoque, le bacilletyphiqe, le bacille dysentérique, le bagille diphtérique.
Un troisième chapitre enfermera à lui seul le bacille tuberculeux. :
Enfin, dans ce sujet encore trop nouveau, nos conclusionñs qui ne peuvent être des conclusions définitives au point de vue scientifique, seront adjointes à des considérations générales sur les formes .filtrantes microbiennes et montreront leur portée dans le domaine biologique, le domaine clinique et enfin le domaine philosophique.
|. — PÉRIPNEUMONIE DES BOVIDÉS
Pendant longtemps la recherche du microbe de la péripneumonie des bovidés est restée sans résultats. C’est en 1898 que Nocard et Roux le découvrirent en empruntant des techniques spéciales. En 1910 Bordet puis Borrel et Dujardin-Bau metz contribuèrent à montrer que le microbe de la péripneumonie était visible, cultivable et susceptible de traverser les filtres.
‘ La technique employée par Nocard et Roux pour montrer qu’il s'agissait d’un virus filtrant.est celle indiquée par Melchnikoff, Roux et Salimbeni. Elle consiste à préparer de petits sacs de collodion à parois tres minces, à les remplir de bouillon stérile et à les ensemencer à l’aide du liquide virulent.
Ces petits sacs sont introduits dans la cavité périto-
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néale d’un jeune lapin. Ils sont laissés en place pendant une quinzaine de jours, puis retirés. On constate alors que le liquide initialement clâir est devenu opalescent,
qu’à l'examen direct au microscope on ne trouve aucune forme microbienne;que l’ensemencement sur les milieux usuels reste négatif, mais que l’ensemencement sur sacs témoins stériles placés en même temps dans la cavité,
péritonéale d’un autre lapin reproduisait un trouble
dans le bouillon ensemencé ; que le liquide cultural par
inoculation à la vache produisait au point d'injection
une large tuméfaction sans entrainer la mort ; que ce liquide était vaccinant.
L'examen au microscope du trouble du bouillon montrait de petits points très réfringeants et très mobiles. Nocard et Roux pensèrent que .le développement des germes à l’intérieur du sac était dû à certaines substances venués de la cavité péritonéale du lapin. Ils ajoutèrent du bouillon de bœuf au bouillon Martin et dans ce milieu, après ensemencement et séjour à l’étuve à 31° pendant deux ou trois jours, ils observèrent un trouble. Les milieux solides à la gélose ordinaire imbibés de sérum de bœuî stérile donnèrent, selon Dujardin- Beaumetz : «des colonies microbiennes tellement fines qu'on ne peut Les distinguer qu'à la loupe et à jour frisant». Après quelques jours on obtient une forme caractéristique : «au centre on a une zone bien délimitée,
“ronde, mesurant ! mm. 2 de diamètre, granuleuse, de couleur brunâtre se présentant Sous la forme d’un mamelon opaque au milieu de la colonie ».
On possédait des lors la culture du virus de la péri-
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pneumonie mais il n'était pas possible d’en donner une morphologie.
Ces cultures était filtrantes sur bougie Chamberland F et le filtrat capable de reproduire une culture. Ce n’est qu'à la suite des travaux de Bordet, Borrel, Dujardin- Beaumelz et Jouan, qu'on arriva à savoir que le microbe de la péripneumonie des bovidés, germe invisible mais cultivable et filtrant était essentiellement polymorphe et qu'il présentait non seulement des formes pseudovibrioniennes comme l'avait montré Bordet, mais qu’il pouvait être encore diplocoque, tétragène, morula, ou filaments chainettes noyés dans une gangue visqueuse.
Ce microbe individualisé fut appelé l’Asterococcus mycoïdes.
PNEUMOSINTES
Les observations faites au cours-de l'épidémie de grippe de 1919-1920 ont achevé de démontrer que le bacille de Pfeiffer n’est pas le microbe spécifique de la grippe. Les recherches de Nicolle et de Lebailly, bientôt confirmées par un grand nombre de bactériologistes (Dujaric de la Rivière, Kruse, Selter, Leschke) ont montré que le virus grippal est capable de traverser les filtres. | ont
Les filtrats des malades atteints d’influenza ont permis, entre les mains de Nicolle et Lebailly, d’une part, de reproduire la grippe chez l’homme, entre les mains de Cunha, Magalhacs, Fonseca, d'autre part, de la reproduire chez le singe. Avec ces auteurs le caractère de
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virus filtrant du germe pathogène de l'influenza était mis en évidence. Ce n’est qu’à l’occasion des récurrences américaines de 1922 et 1923 que les savants américains Olitsky et Gates, après des recherches intéressantes poursuivies au Rockfeller Institut établirent la visibilité du micro-organisme qu’ils nommèrent « Pneumosintes ».
Ce nouveau germe, visible, cultivable el filtrable entrait dans ce groupe qu'Hauduroy nomme les C infra virus ». Dès le début de leurs recherches Oltsky et Gates essayèrent de reproduire une grippe expérimentale. Leurs premières expériences furent-réalisées avec des sécrétions nasales non filtrées de malades atteints de grippe non compliquée. Le singe fut choisi pour ces inoculations mais la coexistence de lésions pulmonaires spontanées tuberculeuses, leur fit abandonner cet animal. Ils s’adressèrent au lapin qui leur fournit des résultats plus démonstratifs. L'inoculation intra-pulmonaire par voie trachéale de produits d'un lavage naso-pharyngé. détermina des symptômes caractéristiques, comparables à ceux décrits chez i’homme : leucopénie ; ædème intra-alvéolaire avec zone d’emphysème ; taches hémorragiques : lésions vasculaires, sérosité abondante. Au surplus il élait possible de découvrir des germes à l'examen microscopique ou par cultures aérobie ou anaérobie des extraits de poumon atteint. Ces extraits de tissu pulmonaire, peuvent, par voie intra-trachéale, contaminer des animaux sains. La persistance de l’action pathogène, malgré la dilution répétée du matériel
- infectieux original amenèrent les Américains aux con-
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clusions de Nicolle et de Lebailly : l’agent pathogène de la grippe est un virus filtrant. Les sécrétions pharyngiennes grippales furent filtrées sur Berkfeld et l’'inoculation intra-trachéale reproduisit les manifestations anatomo-cliniques typiques de la grippe expérimentale. Ce premier point acquis, Olitzky et Gates essayèrent la culture du virus.
Dans une première série d'expériences sur les milieux usuels leurs efforts furent vains. Ils s’adressèrent alors aux méthodes instituées par Noguchi pour la culture des Spirochètes et utilisèrent le milieu Smith Noguchi essentiellement constitué par de l’aciste ou du sérum dilué, additionné d’un fragment d’organe frais, stérile, habituellement rein de lapin. La surface de ce milieu est recouverte d’une couche d'huile de vaseline constituant : un milieu anaérobie. Le prélèvement fait suivant l’exécution d’une technique bien définie et que Boez rapporte dans les Annales de l’Institut Pasteur de 1925, est filtré: à travers une bougie Berkfeld, sous une pression. de trente centimètres et ensemencé au contact du fragment de rein. Dans ces conditions les auteurs américains observèrent la présence de très petits bacilles, presque granulaires, ayant 0415 à 6,3 de long, se colorant difficilement par les couleurs basiques d’aniline et ne présentant pas d’affinité pour le gram. Les cultures initiales d’abord peu abondantes, le devinrent par repiquages successifs. Ces cultures, inoculées à l’animal, déterminent une maladie grippale expérimentale et une immunité vis-à-vis d’une inoculation de virus non filtré.
Ces cultures, comme celles des autres germes qui font
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l’objet de notre thèse, sont filtrables. Les filtrats inoculés au lapin reproduisent les mêmes caractères anatomo-cliniques que les sécrétions pharyngées.
Autres bactéries des voies respiratoires
Au cours de leurs recherches Olitsky et Gates ontpu isoler d’autres organismes visibles et filtrants, anaérobies des voies respiratoires de sujets atteints d’influenza ou d’affections respiratoires légères. Ces différents germes ont été groupés par les Américains en quatre groupes dont nous leur empruntons la description.
Groupe 1. — Petit vibrion très mobile de 0 » 5 à 0,2 de long sur 0415 à 0,2 de large, très incurvé, présentant souvent une coloration polaire. Sur plaque de gélose au sang, dans des conditions d’anaérobiose, colonies microsco-. piques convexes avec une collerette. Le milieu n’est pas décoloré.Ces microbes forment desémulsions auto-agglutinables dans l’eau physiologique. Le sérum préparé avec les cultures n’agglutine pas le Pneumosintes. Ce germe a été trouvé dans de nombreux cas d’influenza et chez des sujets normaux.
Groupe Ia — Aspect morphologique de Bacillus pneumosintes mais un peu plus allongé ; immobile cultivé dans un milieu liquide et forme sur. milieu solide des colonies un peu plus acuminées que le B. Pneumosintes, Il réduit l’'hémoglobine de la gélose au sang.
.Groüpe IE. = Petit bacille ayant l'aspect du B. Pneumosintes mais s’en différenciant par le pléomorphisme
SHAQUES
des formes culturales. Ne cultive pas dans les milieux liquides, mais donne sur plaques de gélose au sang de très pelites colonies. Non spontanément agglutinable et non agglutiné par le sérum anti-pneumosintes.
Isolé des amygdales.
Groupe II. — Petit vibrion de longueur variable. Ne cultivant pas en milieu liquide. Donne sur gélose au sang des colonies brunâtres caractéristiques, formées d’un cône reposant sur un plateau entouré d’un bord irrégulier. Les émulsions floculent dans le sérum normal de lapin.
IE. - TYPHUS EXANTHEMATIQUE
La nature spécifique du typhus exantématique est aujourd'hui reconnue par ous, mais l'unanimité n’est plus réalisée quand il s’agit de se prononcer sur la nature exacte du virus. |
Plusieurs groupes de travaux ont assigné ces dernières années des agents différents dans la pathogénie du typhus.
. En Amérique Da Rocha Lima, reprenant les travaux de Rickett et Wilder publiés en 1910, veut lui reconnaître comme agent causal un germe parfaitement visible et déterminé : la Rickettsia Prowazeki. ;
La Rickettsia Prowazeki se présente sous la forme de bâtonnets en forme d’haltères ou de biscuits, se colorant à leurs deux extrémités avec une zone claire intermédiaire. Leurdimention varie entre 0 #7 et 1v5 ou 3% de
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long et0 : 4 de largeur,se groupant souventenchainettes. Elles se colorent aisément par la fuschine phéniquée de Ziehl, le Giemsa. Ces micro-organismes sont incultivables sur les milieux usuels. Leur caractéristique est de se rencontrer dans les cellules endothéliales ou épithéliales, d’où nécessité de les rechercher sur coupes et non sur lames.
Les savants qui admettent le rôle de Rickettsia Pr. (Wolbach, Todd, Palfrey, etc...) étayent leurs arguments
sur les faits suivants :
Un pou ne contracte une infection pour la Rickettsia que si on le fait parasiter un malade atteint de typhus exanthématique.
— La Rickettsia se rencontre dans les tissus de l’homme et du cobaye infectés.
— Seuls les poux contenant des Rickettsiæ sont capables de transmettre le typhus exanthématique. Un poumon infecté ne le transmet pas.
Ces faits vérifiés par maints auteurs ne permettent pas de refuser à Rickettsia Pro. un rôle indéniable dans la pathogénie du typhus exanthématique. :
Mais à côté de ce germe qui semble spécifique pour certains, Weil et Félix ont isolé de l’urine de typhiques une souche de Bacillus Proteus qu'ils ont baptisé Proteus X 19. Ce bacille à été par la suite retrouvé par Diems, Wolff, Collignon, Fejgin, elc., sous sa forme initiale Proteus X 19 ou sous une forme très voisine : Proteus 0. X. 19 ou ProteusH. X. 19. Ils l’isolèrent du sang des typhiqués ou de leurs selles.
Une des propriétés caractéristiques de ce Proteus X
19, est d’être agglutiné par le sérum des typhiques même à des dilutions très élevées.
En dehors de la réalité de cette agglutination qui ne pouvait être mise en doute, contre la conception de Weil, Félix, Friedberger, qui voulaient faire de ce microbe l'agent spécifique du typhus exanthématique, nombre de savants s’élevèrent et montrèrentque le rôle de Proteus ne pouvait pas être admis dans cette pathogénie Car : 4
— La présence de Proteus X 19 est inconstante dans le sang ou les urines des typhiques.
— Les inoculations de ce microbe ne sont pas vaccinantes contre le typhus expérimental, et inversement le cobaye guéri d’un typhus expérimental et vacciné par ce fait conter une nouvelle atteinte peut succomber à une infection par Proteus X 19. ;
— Le Proteus X 19 n’est pas le seul microbe agglutinable par le sang des tvphiques.
La question restait donc en suspens jusqu’à ces dernières années et se résumait ainsi : le typhus exanthématique est une maladie à virus filtrant (Nicolle) transmise par le pou et ayant pour point de départ Rickettsiæ de l'intestin de l’insecte et semblant avoir pour point d'arrivée dans le sang le Proteus X 19.
La question a rebondi avec l’ensemble des faits expérimentaux apportés par Mile Fejgin depuis 1925 el qui tendent à confirmer, comme le dit le Professeur.
Ce
Coutière, qu’à l'instar du conte tragique de Kipling, « les trois ne font qu'un », opinion qui, du reste, avait déjà été soutenue par Bein!l en 1924 en ces termes : « Certains éléments microbiens du typhus exanthématique passent de leur forme submicroscopique ou microscopique, mal colorables et doués d’un pouvoir pathogène spécifique, à la forme d’une bactérie de dimensions plus grandes facilement colorable résistante et dépourvue de virulence spécifique »..
Dans une première communicalion faite à la Société de Biologie polonaise en décembre 1923, Mlle Fejgin relate qu’elle a réussi à isoler des organes des cobaïes infectés par du virus exanthématique 7 souches microbiennes dont une est «). X. 19, 2 sont H: X. 19 et les autres appartenant par leurs propriétés sérologiques au Proteus X. 19 el se rapprochant par leur caractère végétatif surtout du H. X. 19 semblent être des formes modifiées du H. X. 19. |
Des cobayes infectés auparavant avec du virus de passage du typhus exanthématique élant réfractaires aux inoculations de ces microbes retirés uniquement d'animaux atteints de typhus exanthématique. Mademoiselle Fejgin se crut autorisée à voir une parenté étroite entre ces espèces microbiennes qu’elle avait isolées et l'agent infectieux du typhus exanthématique.
Pour vérifier celte hypothèse cette expérimentatrice partit de données différentes.
Ayant obtenu un principe lytique de bactériophage anti H. X. 19 elle étudia les modifications qu'il provoquait sur une culture de H. X. 19. Le filtrat transpa-
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rent el stérile se troubla après 2 ou 3 jours. L'ensemencement de ce filtrat sur gélose ordinaire inclinée € donna plusieurs sortes de souches ne présentant que des différencrs minimes ». |
L'auteur obtint donc in vitro dans cette seconde série d'expériences de nouvelles souches issues de variations de Proteus X 19 sous l'influence du bactériophage anti H. X. 19. Il convenait dès lors d'établir les liens qui unissaient d’une part les souches isolées in vitro par l’action de Proteus anti H. X. 19 et celles isolées d'autre part àn vivo du Proteus H. X. 19.
Dans ce but Mlle Fejgin « fit agglutiner les formes modifiées in vitro du Proteus H. X. 19 par les sérums de lapins immunisés avec des souches modifiées du Proteus H. X. 19 obtenues àn vitro et celles modifiées in vitro par les sérums de lapins immunisés avec les souches isolées in vivo. Dans les deux cas la réaction positive et l'épreuve de Castellani permirent de constater une identité presque complète des souches obtenues in vitro et in vivo ».
Ces formes modifiées étaient-élles virulentes? Pour ce faire, des cobayes furent inoculés par voie intra-péritonéale à l’aide de bactériophage anti H. X. 19 On vit alors entre 6 et 10 jours l’animal présenter de la fièvre pendant un temps variant entre 4 el 7 jours et une défervescence en lysis pendant les jours suivants. Le cobaye contractait donc une maladie qui ressemblait à celle décrite par Nicolle et obtenue par injections de virus {yphique à l'animal.
Ces inoculations élaient-elles immunisantes ? En
ZNSS =
d’autres termes «les animaux inoculés avec le bactériophage anti Proteus sont ils encore sensibles à l’inoculation de virus typhique et inversement ? Ÿ a-t-il immunité croisée ? » Les expériences faites sur une grande échelle montrent qu'il semble en être ainsi.
L’inoculation du virus typhique rend insensibles les cobayes à l’inoculation du bactériophage anti Proteus X 19, celle du bactériophage anti X 19 les rend insensibles le plus souvent à l’inoculation du virus typhique. Pour cette vérification Mile Fejgin partit de l'intestin des poux infectés par voie rectale avec la forme filtrante de H. X. 19, inocula ces intestins aux cobayes neufs et parvint à leur conférer un typhus expérimental. Il lui fut possible d'isoler en outre des organes de ces animaux infectés une bactérie appartenant au groupe du Proteus X.19 et de conférer aux cobayes une certaine immunité contre le virus de passage du typhus exanthématique.
De ces différents travaux il apparaît donc que l’on pourra créer un typhus expérimental soit en partant d'un bactériophage anti Proteus X. 19, soit en employant un Proteus X 19 ou ses modifications, issu d’un typhus spontané.
Mais comment concilier ces faits avec ceux qui mettent en évidence le rôle de Rickettsia Prowazeki comme agent du typhus ? Existe-t-il des relations de parenté entre Rickettsia et Proteus X. 19 et ses formes moditiées ?
Kuczinski d’une part, Mile Fejgin d'autre part, ont réussi à cultiver Rickettsia Pro, restée incultivable jusqu’à ce jour, et à obtenir un Proteus X 19 de cette culture des poux contenant les Rickettesiæ.
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Dans-ce but les intestins sont prélevés stérilement et ensemencés sur milieu liquide. Repris sur milieux s0lides en gelose inclinée, on obtient après quelques jours des cultures qui par leurs propriétés biochimiques et sérologiques, sont identiques à celles obtenues de Proteus X. 19et en particulier de la forme H. X. 19,
Le passage de Rickettsia à Proteus X 19 était réalisé. Kuczinski parvint au même résultat en isolant du cerveau de cobayes infectés par le virus exanthématique de passage des souches microbiennes qui au point dé vue sérologique, agglutination ou pouvoir antigène sont très proches de Proteus de X. 19 et qui par leurs caractères végétatifs et morphologiques, ressemblent à Ricket- tsia, d’où le nom de Proteus Rickettsia que Kuczinski donna à ces souches.
Tout récemment L. Anigstem et Amzel partant pour leurs recherches de cultures obtenues de trois sources : sang de malades atteints de typhus exanthématique, poux infectés artificiellement par Rickettsia, cobayes contaminés par le virus de passage, montreront aussi que ces souches avaient des liens étroits avec Rickettsia Provazeki.
— Les formes filtrantes du Proteus X 19 se rencontrent-elles dans le typhus exanthématique ?
Pour répondre à cette question Mile Fejgin a essayé d'obtenir des bactéries visibles en partant de formes bactériennes filtrantes et invisibles au microscope.
Dans ce but, les cerveaux de cobayes infectés avec le virus de passage, sont prélevés stérilement, broyés, émulsionnés dans du bouillon ordinaire et filtrés, L’en-
semencement donne des souches bactériennes du groupe du Proteus X. 19et dont Mile Fejgin a obtenu des mi-
crophotographies ?
il est done permis d'admettre que dans le typhus exanthématique humain, Proteus X. 19 existe aussi sous
la forme invisible et filtrante.
ConNcLusIONs. — Les conclusions générales qui se dé-
gagent de tous ces travaux récents sur la bactériologie
du typhus exanthématique sont :
1) Qu'il est possible de passer de Rickettsia Prowazeki au Proteus X, 19 ;
2) Qu'il est possible de reproduire un tvphus expérimental en partant de Proteus X. 19 Iysé par le bactériophage sans le secours du virus typhiie d’origine humaine ou des Rickettsiæ ;
3) Qu'il est possible d'établir que Proteus et Rickettsia sont deux germes d'aspect His mais n’en formant qu’un;
4) Qu'il est possible avec Hauduroy de poser l'hypothèse suivante: on peut,semble-t-il,considérer Rickettsia comme une forme filtrante de Proteus X' 19 ; ;
5) Qu'il est possible d'envisager un cycle évo- Iutif du germe du typhus exanthématique ayant pour point de départ la Rickettsia, forme filtrante à la limite de visibilité ; une forme intermédiaire invisible et filtrante répondant à la théorie de Nicolle ; un aboutissant: le Proteus X, 19 | cultivable et visible,
Ar à Dares
6) Qu'il est possible de comparer ce cycle à ceux déjà établis pour d’autres germes tels les spirochètes et le bacille de Koch,
