II. —— SOLUTIONS D'HÉMOGLOBINE DE CHIEN

En principe la méthode que nous avons employée fut identique à celle que nous avons mentionnée pour l’hémoglobine de cheval. Les particularités suivantes sont cependant à signaler.

1° Récolte du sang. — Le sang de chien coagulant très vite, il n’est pas facile de le défibriner par agitation en présence de perles de verre comme on peut le faire pour le sang de cheval, et d'autant moins que l’on obtient la quanté de sang désirable bien moins aisément qu'avec ce dernier animal. Aussi avons-nous recueilli le sang de chien en présence de citrate de soude.

La technique que nous avons utilisée fut la suivante :

Le matériel nécessaire est constitué de ballons d’un litre contenant du citrate de soude à 5 P. 100 à raison de 10 cc. pour 100 cc. de sang à recueillir. Ces ballons sont fermés par un bouchon de caoutchouc percé d’un tube de verre sur lequel on greffe un tube de caoutchouc aussi Court que possible et qui est en rapport à l’autre extrémité avec une

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aiguille à ponction veineuse. Sur le flanc du ballon se trouve une tubulure latérale par laquelle on peut faire une aspiration pour faciliter l'écoulement sanguin dans le récipient.

La veine fémorale étant dénudée, avec toutes les précautions d’asepsie nécessaire, il suffit alors de la ponctionner avec l'aiguille de l’appareillage qui vient d’être indiqué et de réaliser une dépression dans l’intérieur du ballon pendant toute la saignée. Il est bon de remuer le récipient sans arrêt pour assurer le mélange du sang avec le citrate de soude.

2° Lavage et transformation des hématies en solution d'hémoglobine. — Le sang ainsi recueilli est traité de la même façon que le sang de cheval. Toutefois, la séparation de la fibrine doit être opérée par filtration sur un tamis encore plus serré, du fait de la présence, malgré le citrate, de caiïllots sanguins.

3° Remarques sur les solutions d'oxyhémoglobine de chien de titre supérieur à 12 p. 100. — Nous avons utilisé dans nos expériences chez le chien des solutions d’hémoglobine de cheval à 14 p. 100, 6,5 p. 100 et 3,5 p. 100. Voulant comparer l'effet de ces solutions d’hétérohémoglobine avec dés solutions d’homohémoglobine, nous avons cherché à obtenir des préparations d’hémoglobine de chien de titre identique. | |

La chose fut très aisée pour les solutions à 3,5 p. 100, 6 ou 7 p. 100, qui sont organolytiquement identiques à celles de cheval. Il en fut tout autrement pour les solutions de titre supérieur à 12 p. 100.

De telles solutions d’hémoglobine de chien conservées à la glacière s’altèrent dans les douze heures, même sans aucune souillure bactérienne. Au bout de ce temps, on constate en effet que la solution a précipité, et cela d’autant plus qu’elle était plus concentrée. Pour une concentration de 14 p. 100, le volume total est entièrement pris en masse.

De telles solutions centrifugées présentent deux couches :

Une couche supérieure liquide ayant tous les caractères extérieurs de la solution d’oxyhémoglobine primitive, mais qui a perdu de son titre primitif. Si le taux initial est de 14 p. 100, par exemple, celui du liquide surnageant n’est plus que de 10 environ.

Une couche inférieure de consistance gélatineuse amorphe, visqueuse, de coloration cerise.

Un examen très sommaire de ce précipité nous a montré qu’il était constitué par une substance soluble dans l’eau, mais relativement peu soluble. La solution aqueuse saturée possède un titre en hémoglobine de 2,4 p. 100. Une telle solution précipite par des électrolytes, par les réactifs généraux des albuminoïdes.

Examinée au microscope, elle se montre de nature cristalline. Les cristaux sont longs, grêles, prismatiques, tronqués à chaque extrémité. En présence d’eau, les angles s’arrondissent et les cristaux se dissolvent.

Ils ont le même aspect organoleptique que ceux que l’on trouve dans le culot de centrifugation des solutions concentrées d’hémoglobine de cheval.

Une étude plus approfondie de cette substance sortant du cadre de ce travail, nous n’en avons pas poussé plus loin l’expérimentation.

Disons simplement que nous n’avons pas utilisé dans nos expériences de comparaison de solution ainsi précipitée: et que par suite nous nous sommes contentés d'opérer avec des préparations d’hémoglobine de chien à 7 et à 3,5 p. 100.

CONCLUSIONS

Les techniques précédemment exposées nous ont permis d'obtenir des solutions d’hétéro ou d’homohémoglobine pure dans l’eau distillée. Mais comme nous nous proposions d’injiecter ces solutions dans la circulation chez le chien, nous devions chercher à étudier leurs propriétés physico-chimi-

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ques, à les comparer avec celles du plasma sanguin de cet animal, et à les rapprocher de ces dernières, dans la mesure du possible, en modifiant leur composition.

Amberson, Flexner, Steggerda, Mulder, Marton, Tendler, Zankratz et Lang dans leur travail auquel nous avons déjà fait allusion ont utilisé une formule de liquide de Ringer. Locke hémoglobiné, dont la composition avait été fixée en 1898 par Abderhalden après des recherches sur les constantes chimiques du plasma de divers animaux. Cette formule est la suivante :

-Hémoglobine .... 130 à 140 gr. p. 1.000 On SNA ER Fu. 3 gr. 70 p. 1.000 ECO S TEST LEE ASE se 0 gr. 36 p. 1.000 OR EN NR RRRENARR 0 gr. 10 p. 1.000 LORS IRERUSS MROIURSS 4 gr. 95 p. 1.000 LODMANOSTENR sim 0 gr. 50 p. 1.000 LES TORCOAQ EN 2 ROME 1 à 1 gr. 40 p. 1.000

Les auteurs précédents ont opéré avec de l’hémoglobine de bœuf chez le chat, le chien et le lapin. Comme nous avons expérimenté nous-même uniquement chez le chien avec de l’hémoglobine de cheval, nous avons pensé qu’il était préférable de reprendre toute cette étude à la base, dans le cadre que nous nous étions tracé; et d’autant plus que les déterminations précédentes sont déjà anciennes et de plus incomplètes puisqu’elles n’ont pas trait aux constantes physico-chimiques.

Ceci nous a amené à faire un certain nombre de recherches sur l’abaissement cryoscopique, la densité, la tension superficielle, la viscosité, la pression osmatique colloïdale, le pH et la teneur en sels minéraux du plasma de chien et de nos solutions d’hémoglobine de titres divers, et à ajuster celles-ci, autant que faire se peut, aux conditions physiques et chimiques du milieu circulant de cet animal.

Ce sont ces recherches que nous allons exposer dans les chapitres suivants.