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de le porter à six minutes au lieu de trois minutes et demie. 4° On plonge le moule collodioné dans l’eau durant quinze minutes afin d’éliminer l’acool qui a pu rester.

d) Démoulage. — Le démoulage est très aisé. On plonge le moule collodioné dans de l’eau à 52° ; on remplit son intérieur également avec cette eau; la gélatine, qui sépare le sac de collodion du verre, fond, et il suffit alors de souffler par l’ouverture du tube, très lentement : le sac de collodion glisse et tombe.

e) Elimination de la gélatine. — Une partie de la gélatine reste cependant collée contre le filtre et il faut l’éliminer. Il est impossible de le faire par simples lavages dans l’eau froide. Une méthode très pratique consiste à remplir les moules d’eau tiède presque complètement, puis à les retourner très rapidement, l’ouverture en bas, dans un grand récipient haut de bord. Il reste toujours dans le sac une bulle d’air très petite qui assure son flottement convenable. Le tout est mis à l’étuve à 37°. Per dessensum la gélatine est rapidement éliminée. On change l’eau trois ou quatre fois. On obtient ainsi des sacs apparemment satisfaisants, mais qu’il faut pourtant soumettre avant l’usage aux essais suivants.

2° Essai des cellules

Avant de pratiquer les essais, on se rend d’abord compte organoleptiquement si le sac est homogène, sans bulles et d'épaisseur constante. Pour cela il y a avantage à ajouter à la gélatine quelques gouttes de solution de bleu de méthylène ainsi que nous l’avons indiqué plus haut. Dans notre idée primitive, l'addition de colorant à la gélatine avait uniquement pour but de permettre d’être sûr que toute cette substance est éliminée après lavage; mais nous avons bientôt constaté que le bleu de méthylène est entièrement

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absorbé d’une façon définitive par le collodion et, grâce à la coloration des sacs, on se rend compte plus aisément de leur homogénéité macroscopique. Ceci cependant ne suffit pas et il faut pratiquer les deux essais suivants

a) Essai de perméabilité aux protéines. — Les cellules de collodion sont montées sur un support convenable que nous décrirons plus loin. Ils sont remplis d’une solution albumineuse (une solution d’hémoglobine convient parfaitement du fait de sa coloration rouge), puis plongés dans environ 20 cc. d’eau distillée, contenue dans un gros tube à essai. Le tout est abandonné vingt-quatre heures dans la pièce la plus fraîche. Au bout de ce temps, on recherche dans l’eau, avec le réactif de Tanret, la présence des albumines. Si l’eau est colorée en rose ou si la réaction au Tanret est positive, le filtre est à rejeter.

b) Degré de perméabilité de l’eau. — Les auteurs déjà cités ont montré que pour qu’un filtre soit utilisable il faut que, sous une pression de une atmosphère, 100 ec. d’eau distillée puissent traverser 100 cm? de filtre en un espace de temps compris entre quatre-vingts et deux cents minutes. Ils appellent indice de perméabilité du filtre le nombre de minutes ainsi exprimées.

La technique de la mesure de cet indice est la suivante :

Le sac de collodion est solidement fixé sur un bouchon de caoutchouc percé d’un trou dans lequel est insérée l’olive terminale d’un tube de verre. Ce tube traverse ensuite le bouchon d’un Kitasato et le sac est, par l’intermédiaire de ce dernier bouchon, suspendu dans l’intérieur de ce récipient. A l’extrémité supérieure du tube de verre, qui se termine peu au-dessus du Kitasato, on adapte alors par le truchement d’un tube de caoutchouc à vide une simple burette de Mobhr (fig. 5). Filtre et burette étant remplis d’eau distillée, on attelle le Kitasato sur une trompe à vide électrique, réalisant ainsi une différence de pression

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de une atmosphère. Au bout de cinq minutes, on note sur la burette la graduation de départ et on laisse le tout fonctionner trente minutes sous le vide. On note alors la graduation sur la burette. Soit n cc. le volume qui a traversé la paroi de la cellule de collodion. On détermine les dimen-

F1G. 5. — Schéma du montage des sacs de collodion pour la mesure de l’indice de perméabilité à l’eau.

sions de la partie filtrante du filtre et on calcule trés aisément sa surface S (un cylindre plus une demi-calotte sphérique). S

Nora. — Nous recommandons de mettre dans le fond du Kitasato un certain volume d’eau. Sans cette précaution, le sac de collodion se recouvre d’une couche de glace qui entrave la filtration.

En fonction de ces trois données : temps de filtration, surface filtrante, volume filtré, il est aisé de calculer l'indice. Voici à titre d'exemple les indices de cinq filtres répondant à tous les essais précédents et qui ont été retenus après une série comportant vingt-sept sacs.

iso se

Filtre Surface Indice Temps de filtration

1 10cm 105 30 minutes 2 20 120 30 minutes 3 6,3 cm’ 113 30 minutes 4 7,6 cm’ 191 30 minutes 5 9,3 cm 135 30 minutes

Les filtres reconnus utilisables sont immergés dans du sérum physiologique stérile en présence de thymol. Ils peuvent ainsi se conserver trois mois environ. Ils ne doivent

jamais sécher.

3° Montage des sacs

La question du montage des filtres en vue de mesures ultérieures est excessivement délicate. Après de nombreux essais infructueux, nous avons opéré personnellement de la façon suivante :

On ligature avec du fil de lin le sac de collodion sur un bouchon de caoutchouc percé de deux trous, et cela aussi près que possible de la partie inférieure de ce bouchon. La cellule étant remplie du liquide à étudier au moyen d’une pipette Pasteur, en ayant soin de ne point laisser de bulles d’air, on introduit par un des trous du bouchon, et aussi profondément que possible, un tube de verre épais à tige capillaire, d’un mètre de longueur et d’un diamètre extérieur en rapport avec l’orifice du bouchon. Le liquide de trop plein s’écoule par l’autre trou. On introduit alors dans le deuxième orifice un tube de verre plein afin d’assurer l'étanchéité de la cellule. Le liquide, sous l'influence de cette pression, tend à monter dans le tube manométrique passant par l’autre orifice. Afin d’éviter cette ascension de la colonne liquidienne, on relève le tube manométrique en même temps qu’on enfonce le tube de verre plein. Le volume intérieur de la cellule reste ainsi invariable (fig. 6). On s'arrange pour que le niveau du liquide contenu dans le tube capillaire affleure la surface du bou-

CRC ASS chon. On lave rapidement et abondamment la partie exté-

rieure de la cellule. Elle est prête pour la mesure.

4° Mesure de la pression osmotique colloïdale

Après de nombreux tâtonnements, nous avons opéré finalement de la façon suivante :

La cellule ainsi montée est immergée dans 10 cc. d’eau

F1G. 6. — Schéma du montage des sacs de collodion en vue d’une détermination de pression osmotique colloïdale.

distillée contenue dans un gros tube à essai en verre jusqu’à affleurement de l’eau au niveau de la ligature, et maintenu dans cette position par un dispositif convenable. Le tout est abandonné dans une pièce fraîche à température constante. L'expérience nous a montré que l’équilibre est atteint au bout de dix-huit à vingt-quatre heures.

On effectue alors la mesure de la dénivellation entre le niveau de la ligature et le niveau d’arrêt de la colonne liquidienne dans le tube manométrique. On retranche de cette valeur la hauteur d’ascension capillaire spontanée, mesurée avant avec le même liquide. C’est cette valeur définitive que nous donnons dans nos tableaux.

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En réalité, la mesure devrait théoriquement s'effectuer d’une façon différente. En opérant comme il est dit cidessus, du fait de la diffusion, on dilue en effet légèrement les solutions avec l’eau distillée qui a passé à travers le filtre et en modifie par conséquent un peu leur puissance d'absorption. On peut remédier en partie à cet inconvénient en utilisant des cellules de collodion à gros volume. C’est ce que nous avons fait finalement en employant des sacs de 12 à 15 cc. et c’est la raison pour laquelle, après avoir utilisé des moules de 6 mm. de diamètre qui ne donnent que des cellules de 2 cc., nous avons employé ultérieurement des moules de 12 mm. Dans de telles conditions, l'ascension correspond à une dilution de 1/30°, le volume mesuré du tube capillaire étant d'environ 0,5 cc. par O m. 75. Plusieurs mesures effectuées sur une même solution, et toutes choses étant égales par ailleurs, ne nous ont donné des différences d’un échantillon à l’autre que de l’ordre de quelques millimètres.

Nous avons malgré cela cherché dans certains cas à éviter la dilution, en opérant en volume constant. On procède à cet effet de la façon suivante :

La cellule étant montée comme nous l’avons indiqué, le tube capillaire est fermé par un robinet en relation avec un manomètre à eau. Après vingt-quatre heures, on effectue la lecture. Pour cela on ouvre le robinet, on attend quelques instants que l’équilibre s’établisse, puis on lit d’une part la dénivellation manométrique, d'autre part l’ascension dans le tube capillaire, on additionne ces deux valeurs et on effectue la correction de capillarité. Cette méthode est un peu plus compliquée et les différences constatées étant assez faibles, nous avons préféré opérer selon la première technique mentionnée, beaucoup plus simple.

Nora. — Nous n’avons pu effectuer les mesures à 37°, car on ne peut opérer en milieu stérile et l’altération de nos solutions à cette température, durant le temps nécessaire

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à cette détermination, eût été trop importante. Les mesures ont été faites à une température voisine de 15°.

Toutes corrections effectuées, voici quelques résultats trouvés.

TESRESUETATS

1° Solutions d'hémoglobine

Les chiffres obtenus, tant pour les solutions d’hémoglobine de cheval que pour celles d’hémoglobine de chien, sont consignés dans le tableau ci-dessous (tableau VI) et illustrés par les courbes de la figure 7.