EXPOSÉ TECHNIQUE

Je crois bon, avant de terminer^ d'exposer rapidement les procédés que nous avons mis en usage dans nos recherches; nous avons^ en général^ suivi les méthodes indiquées par Waldeyer dans son article du Manuel de Stricker^ page 958.

Pour Texamen des parties à Vétat frais, nous nous sommes servi de Thumeur aqueuse, du sérum iodé^ d'une solution salée Oj5o — 0^75 7o o^ chromique V^ooo — Vio.ooo' La liqueur de MoLEscHOTT (alcool et eau salée) et surtout Talcool V$ de Ranvier nous ont rendu de bons services comme liquidés à macération. Les solutions faibles d'acide osmique Vio — V» Vo> ^oi^l on peut du reste faire varier la durée d'action', sont peut-être celles qui nous ont donné les meilleurs résultats. Nous avons également employé le procédé recommandé par Hensen, c'est-à-dire exposé les fragments à examiner aux vapeurs de l'acide osmique solide avec conservation ultérieure dans l'eau salée, ou la solution d'acétate de potasse recommandée par Schultze. Un procédé qui nous a particulièrement réussi pour la dissociation des diverses formes de Tépithélium indifférent, et dont nous avons déjà parlé, consiste à faire macérer dans l'alcool 7s des fragments de tissu préalablement traités par une solution osmique faible. Comme matières colorantes, nous nous sommes surtout servi du picrocarminate d'ammoniaque^ de la purpurine, de la fuchsine et du bleu d'aniline; ces deux dernières substances semblent avoir une affinité spéciale pour les membranes de recouvrement et les cils acoustiques. Le chlorure d'or employé en solution concentrée et sur les tissus frais ne nous a pas paru spécialement avantageux.

Pour ce qui est des préparations durcies et des coupes, nous ferons remarquer qu'après avoir rapidement dépouillé la tête de l'animal tué à l'instant, fendu le crâne sur la ligne médiane, nous iso-

lions grossièrement le labyrinthe osseux dont les cavités étaient ouvertes par Tablation de la columelle et de parcelles osseuses plus ou moins étendues. Ainsi préparé (ce qui^ avec un peu d'habitude^ ne prend que quelques instants)^ le labyrinthe était soit en entier^ pour les reptiles de petites dimensions^ soit en fragments^ plongé dans une solution d'acide osmique de o^5 à 1^20 Vo^oîi il restait pendant 24 heures^ dans un endroit irais. Soigneusement lavées dans de l'eau distillée j les préparations étaient ensuite portées dans de ralcool absolu, d'oti elles passaient dans le liquide à décalcifier. Ce dernier était ordinairement une solution de chlorure de palladium acidulée par quelques gouttes d'acide chlorhydrique, ou une solution d'acide chromique o,25 — o^5o Vo> ou enfin une solution d'acide picrique saturée. Après un temps variable, très-court dans quelques cas où la substance osseuse était réduite à une lamelle excessivement mince ^ les labyrinthes décalcifiés étaient sortis du liquide, dégorgés dans de l'eau distillée et conservés dans de l'alcool. Nous avons, comme on voit, suivi des procédés assez compliqués; mais aussi nous ont-ils donné des résultats bien supérieurs à ceux que nous avons obtenus avec des préparations simplement traitées par le liquide de Mliller, ou la solution de mono- ou bichropate ammonîque. Du reste, remarquons de suite que même avec la méthode indiquée plus haut, nous avons obtenu dans les résultats une différence que nous ne pouvons nous empêcher de rapporter ici : des coupes, en effet, les unes étaient excessivement foncées, noires, mais d'une netteté de détails ne laissant pour ainsi dire rien à désirer; les autres, à .épaisseur même relativement plus grande, présentaient une coloration beaucoup plus claire , plutôt jaune ou vert- jaunâtre, mais par contre une netteté moins considérable des éléments anatomiques. Cette différence, que nos fig. 5 et 3 1, 21 et 25, par exemple ont essayé de reproduire, nous ne pouvons l'attribuer qu'à la nature du liquide à décalcifier, et nous nous croyons autorisé à adniettre que c'est l'acide chromique qui empêche la coloration de l'acide osmique de devenir aussi intense. L'acide picrique a sur les deux autres solutions et notamment sur la solution palladique le désavantage de favoriser la désagrégation de la préparation et de rendre ainsi les coupes plus difiiciles.

Pour ces dernières, nous avons du reste été forcé de suivre un manuel opératoire assez compliqué, mais qui nous paraît indispensable. Le fragment de labyrinthe, sorti de l'alcool, retrempé un instant dans de l'eau, était plongé dans un mélange à parties égales de gela-

tioe et de gjtycéirat^ et mrinugm im ceruia t»qss du» ceme laisse

chauâiéeaa haiI^-Inane. Ccitte dernière précauiioa est Dccessure pcyar chasser autant que possible les bulles d air et pemp^ce sans tK^ grand désaTantage la machine pseumaiique fvt)posèe à câ eâ^ par MosELET*. Enân le fragment^ placé dans une caTitê creusée daus un morceau de foie durd^ rDcouTeit du mélan^ de ^ycérine et de gelatine^ étadt replos^ dans falcool, où en quelques jours le K)ut pt^mak une consistance très-&Torable à la coupe. Comme masse à inclusion le mélan^ de ^joéiine n de gélatine nous a paru de beaucoup supérieur au saTon transparent^ à la paraffine â surtout au mélange de cire et d^huile piéoonisé par Snticssa.

Les coupes, fûtes à main libre, étai^it toutes examinées tt au be* soin consenrées dans la ^voérine.

Tel est le procédé qui nous a le mieux servi et que nous avons de préférence mis en usage. Raq?pelons toutefiHs que, pour toute une séné de préparations, nous avons essayé le procédé de Gchulch : k labyrinthe durd dans une solution de monochromate ammonique était divisé en coupes très-fines; les coupes elles-mêmes étaient soumises pendant un ou plusieurs jours à lacdon dune solution diluée ^ imo ^c chlorure d'or et de sodium, puis examinées après exposi tion suffisante à la lumière; mais cette méthode n^a pas réalisé ce que nous en attendions, et pour les détails de la distribution nerveuse comme pour tout le reste le cède de beaucoup à la précédente.

Nous avons peut-être insisté trop longtemps sur des détails qui peuvent paraître futiles à qui n*a pas Texpérience des difficultés que présente l'étude histologique du labyrinthe membraneux; c'est queks obstacles déjà si nombreux que Ton rencontre dans Texamen micros- TDpique du limaçon des mammifères se multiplient peut-être encore ^luand il s'agit de répéta- cette étude chez les animaux inferieuis: la simplicité plus grande de structure est largement compensée par ^'etiguité même des parties, et Ton rencontre parfois de grandes acuités à faire, dans un sens déterminé, une coupe convenable ^ un organe qui souvent, comme le limaçon de la couleuvre ou de

'Orvet, rentre presque déjà dans le domaine des objets microscopi^

•îues.

' M08ELEY, On methods preparing the Organ of Coiiy, etc., in Mioroso. Quiit. Jo^.,XLVin,p. 374.

JV. — La coupe à travers la membrane basilaire et la papille spirale a porté un peu obliquement^ de sorte que les proportions en gont un peu trop grandes par rapport à celles des autres parties.

Fig. 8. Fragment d*une coupe de la membrana tectoria ou de Corti. H. 1II/8.

a) lacunes de cette membrane, dans lesquelles font sailli^ les touffes de cils acoustiques; b) substance fondamentale.

Fig. 9. Deux cellules acoustiques isolëes du limaçon de Torvet {Anguia fraciilis). H. II/9; les touffes de cils présentent la striation et la gradation ordinaires.

Fig. 10. Cils auditifs de la lagena du lézard, provenant d'une coupe durcie dans le chromate simple d'aiùmoniaque et imprégnée au chlorure d*or. H. 1/13. Immersion.

a) sorte do gaine brillante, hyaline, résultant probablement de Tagglomération des cils; h) filament central plus sombre faisant saillie à Vextérieur.

Fig. U. Faisceau auditif du serpent (Tropidonotus natrix), la surface en paraît comme cannelée. H. 1/13. Immersion.

Fig. 12. Faisceau auditif du lézard, isolé par Talcool 1/3. H. III/8.

Le faisceau auditif b est comme tordu en aile de moulin à vent et laisse échapper un filament terminal trës-fin a.

Fig. 13. Cils acoustiques de Tampoule du lézard (ac. osmique). H. 11/10. Immersion, a) cils excessivement déliés et trës-longs; b) sorte de faisceaux d*où sortent les cils.

Fig. 14. Cils et faisceaux acoustiques de Tampoule du serpent (Thropidonot. noir.) (ac. osmique). H. 1/13. Immersion.

a) faisceaux auditifs dont quelques-uns en a' montrent une torsion analogue à celle de la fig. 12; b) reticulum de la cuptda dans lequel vont se perdre les cils qui continuent les faisceaux; c) limite de la conclie épithéliale.

Fig. 15. Fragment de la couche granuleuse de la papille spirale du moineau {fringilla domesHca).

a) membrane basilaire; b) noyaux arrondis; c) autres noyaux plus ou moins anguleux se continuant avec des fibres.

Fig. 16. Coupe transversale de la partie supérieure du limaçon chez le serpent (Tropidonotus natrix). H. I1I/4.

a) paroi osseuse; b) tronc nerveux dont on voit un cordon assez gi'os se rendre à la partie basilaire; c) tissu périlymphatîque; d) saccule; e) limaçon (rampe moyenne); f) cartilage triangulaire; g) membrane basilaire; h) pars basildris (couche des noyaux, couche des cylindres, cils acoustiques, membrane de Corti); j) pars initialis avec ses otolithes; 1) crête qui les sépare, obliquement coupée; k) membrane de Reissner, expansion de la paroi du saccule au-dessus de la rampe moyenne; 1) rampe tympanique; m) rampe vestibulaire.

Fig. 17. Faisceaux auditifs du limaçon de l'oiseau d'aprës une préparation durcie dans Tacide osmique. Verick 11/10. Immersion.

Fig. 18. Fragment de la papille spirale du pigeon. Verick 11/10. Immersion

a) membrane basilaire; b) noyaux; c) fibrilles. nerveuses semblant partir d'un tronc commun et se rendant en d au plateau, en e k la base des cylindres acoustiques.

Fig. 19. Plusieurs cellules auditives de la papille spirale«du pigeon. Verick 11/10. Immersion.

a) membrane basilaire; b) coucbe des noyaux; c) cylindres acoustiques avec c' plateau terminal et touffe de cils; d) filaments nerveux allant jusqu^au plateau terminal; e) un antre filet nerveux plus gros se perdant dans Textrëmitë inférieure d^une cellule auditive.

Fig. 20. Trois cellules auditives de la papille spirale du moineau.

^ a) membrane basilaire; b) noyaux de la papille; c) cylindres acoustiques un peu obliquement atteints; d) fibrilles nerveuses allant jusqu^au plateau terminal.

Planche U.

Fig. 21. Coupe transversale de la mactUa aeuatica sacciUi et du revêtement ëpithëlial circonvoisin (Anguis fragUis). H. III/8. a) cartilage; b) membrane basale du cartilage; c) ëpithëlium de la paroi du saccule; d) cellules cylindriques étroites entourant de chaque côte la macula; e) ne vro- ëpithëlium avec la couche des noyaux, la couche des cylindres auditifs et le plenus intraëpithëlial; f) nerf dont on voit quelques filaments pënëtrer dans Tëpithëlium; g) cellules pretoplasmiques avec h) leur bouchon saillant; i) cellules ëpithëliales claires; j) cils auditifs; k) inembrana tectoria; 1) otolithcs.

Fig 22. Coupe transversale complète du limaçon de Torvet {Aviguis fragilis). H. I1I/8.

A) lagena; B) pars basUarîs; a) cartilage de la lagena; a') cartilage nerveux avec son tubercule; a'') cartilage triangulaire; b) ne vro -ëpithëlium lagënien avec c la couche des noyaux; d) la couche des cylindres; e) faisceaux auditifs de la lagena; f) membrane de recouvrement réticulée; g) otolithes; h) ëpithëlium cubique intermédiaire se prolongeant sur le cartilage nerveux; i) papille spirale avec couche de noyaux, couche des cylindres et touffes auditives très-nettes; j) ëpithëlium du cartilage triangulaire ; k) membrane de Reissner avec vaisseaux sanguins coupés en différents sens, allant en k') sUnsérer au cartilage lagënien; 1) ti&su fibrillaire spécial; m) filets nerveux se rendant à la papille acoustique; n) filets nerveux de la lagena transversalement coupés.

Fig. 23. Coupe longitudinale de la lagena du pigeon. H. II/4.

a) paroi osseuse; b) tissu périlymphatique; c) lamelle cartilagineuse recourbée de la lagena; d) ëpithëlium cubique séparant la lagena de la pars basilaris; e) nevro-ëpithélium de la lagena avec ses deux couches d^ëlëments; e') Tuemhrana tectoria; e") otolithes; f) ëpithëlium cubique du fond de la lagena sMlevant peu à peu en hauteur pour se confondre avec la membrane de Reissner; g) membrane de Reissner; h) vaisseau sanguin allant du tissu périlymphatique se perdre dans la membrane de Reissner; i) faisceaux nerveux obliquement coupés se rendant au névro-ëpithëlium de la lagena.

Fig. 24. Quelques-unes des grandes cellules adjacentes au cartilage triangulaire isolées par Talcool 1 3 {Lacerta agUis). H. III/8

a) leurs tiges se prolongeant jusque près du noyau et formant parfois comme en a' une sorte de crête.

^fg, 2d. Coupe, menée parallèlement à la membrane basilaire, traversant le cartilage triangulaire et le groupe voisin de grandes cellules (Lacerta agiUs). H. III/8.

a'O cartilage triangulaire; b) membrane basilaîre; d) les grandes celltileB de Tangle postérieur du limaçon; d') leurs prolongements formant au niveau du cartilage triangulaire une sorte de retioulom se terminant dans une couche granuleuse lymphoïde d'') au bord de la membrane basilaire ; e) Vaa ^rale extern., le mémo qui est représenté en e dans la fig. 6 de la planche I.

Flg. 26. Fragment épiihélial provenant de Tutricule de la couleuvre (2Voptdonotu8 natrtx). H. ni/8.

a) Cellules épithéliales foncées, granuleuses, dont la tête en forme de clou dépasse les cellules voisines b, plus claires et comme hyalines. Fig. 27. Fragment d*une coupe k travers le plûicher d'une ampoule de la couleuvre {Ik'opidonot, natr.). H. III/8. (Acide osmique). a) figures dendritiques d'un noir foncé formées par les cellules protoplasmiques; b) cellules épithéliales simples.

Planche UI.

Fig. 28. Coupe transversale du limaçon d'un jeune canard. H. n/8.

a') cartilage nerveux; a^') cartilage triangulaire; b) membrane basilaîre; G) papille spirale ; d) membrane de Corti; e) épithélium cylindrique du cartilage nerveux; e') épithélium cylindrique du cartilage triangulaire; f) nerf dont on voit les filets traverser le cartilage nerveux pour former dans la papille une sorte de plexus T qu'on peut poursuivre jusque dans la couche des cylindres auditifs g); h) éléments nucléaires de la papille; i) noyaux de la face inférieure ou tympanique de la membrane basilaire; j) vcu spirale intem.

N, — La couche finement indiquée qu'on voit au-dessus de la membrane de Corti n'est probablement pas autre chose qu'un peu du mélange de glycérine et de gélatine ayant servi à fixer la préparation.

Fig. 29. Fragment d'une coupe du limaçon du pigeon, menée parallèlement à la î membrane basilaire. H. III/7. !

a') cartilage nerveux et filets nerveux le traversant en s' entrecroisant en divers sens; a'') cartilage triangulaire; b) membrane basilaire dont on voit les stries obliques, assez régulièrement parallèles entre elles; c) membrane de Reissner dont on voit très-bien les prolongements d en forme de grappes avec leurs branches vasculaires centrales; e) cellules auditives dont les faisceaux de cils, plus ou moins obliquement coupés se projettent conune des lignes droites ou infléchies sur le plan de la membrane basilaire; f) noyaux intermédiaires, restes des ëléments granuleux de la papille spirale; g) fibrilles nerveuses très-tënues qu^on. voit circuler entre les cellules sur la membrane basilaire; h) ëpithé- ^ lium simple faisant suite au névro-épithéli\mi à mesure qu'on s'avance vers le cartilage triangulaire.

Fig. 30. Fragment d'une coupe très-fine de la papille acoustique du pigeon. Hartnack. 111/13. Immersion, a') cartilage nerveux; b) membrane basilaire un peu étalée; c) papille spirale dans toute son épaisseur; d) membrane de Corti; e) cordons nerveux dont on voit en e') quelques filets se diviser en gerbes de fibrilles d'axe f rayonnant dans la papiUe. Quelques-unes de ces fibrilles r peuvent se poursuivre jusqu'au niveau des cylindres auditifs g, et même jusqu'aux toufies de eils acoustiques h); i) noyaux de la papille spirale; j) fibrilles plus grosses, moins nettes, formant une sorte

de roseau, dont quelques-unes en j' partent des nerfs en même temps que les fibrilles d'axe; k) substance moléculaire de la papille acoustique,

Fig. 31. Coupe transversale du limaçon du pigeon comprenant une partie de la papille spirale. H. III/8.

a') cartilage quadrangulaire ou nerveux , présentant quelques vaisseaux sanguins transversalement coupes; b) angle d'insertion de la membrane basilaire; c) papille spirale; d) membrane de Corti^ dëtachëe en e'; e) ëpithëUum cylindrique du cartilage nerveux tapissant en e' le stUctis spiral, intem; fj filets^ nerveux; g) membrane de Reissner avec ses ëlëments protoplasmatiques fonces g'; h) couche des cylindres auditifs avec les touffes de poils i dont on peut voir la disposition en gradins; j) noyaux de la papille spirale; k) bouquet de filaments nerveux trës-pâles s'incurvant pour aller se perdre au niveau des cylindres; 1) autres fibres plus épaisses, plus foncées.

Fig. 32. Fragment d'une coupe ayant obliquement divisé la membrane basilaire et les parties qu'elle supporte (chez le pigeon). Verick 111/10. Imm. a) membrane basilaire; b) noyaux de la papille à peu près ronds; c) autres éléments plus ou moins anguleux, multipolaires communiquant d'une part avec des fibres de la papille spirale, d'autre part avec des filaments dont quelques-uns se rendent aux cellules auditives d); e) fibres de la papille; f) substance moléculaire intermédiaire.

Planche IV.

Fîg. 33. Coupe de la papille acoustique du pigeon au niveau de la membrane basilaire. Verick III/IO. Immersion.

a) stries de la membrane basilaire dont on voit également quelques noyaux; b) éléments nucléaires de la papille; c) cellules auditives dont on voit les faisceaux c' taillés en escalier faire saillie au-dessus du niveau de la papille; d) cils auditifs de la rangée de cellules postérieure à la précédente.

Fjg. 34. Fragment d'une coupe ayant obliquement emporté les faisceaux auditifs de la papille spirale, avec une partie de la membrane de Corti adhérente (pigeon). Verick 111/10. Immersion.

a) éléments cellulaires plus ou moins tronqués de la papille; b) faisceaux auditifs diversement inclinés faisant saillie k travers les mailles c de la membrane de Corti.

Fig. 35. Coupe de la papille acoustique du pigeon jusqu'au niveau de la membrane basflaire. H. III/8.

a') cartilage nerveux; b) membrane basilaire; c) papille spirale; d) membrane de Corti; e) épithélium cylindrique du cartilage nerveux; f) nerf; g) noyaux de la papille; h) cylindres auditifs; i) fibres de la papille plus grosses, formant une sorte de reticulum dont les mailles d'abord assez serrées se perdent peu à peu; j) fibrilles excessivement fines, pâles, allant se perdre dans la couche des cylindres et se repHant en j' au-dessus de la membrane basilaire pour gagner le névro-épithélium qui la recouvre.

Fi^. 36. Coupe de la papille spirale du limaçon du moineau {Fringilla dom.). H. III/8. , . '

a') rebord du cartilage nerveux se perdant vers b dans la membrane basilaire; c) papille spirale; d) membrane de Corti; e) nerf; I) couche des

noy«ax particoliërement serrëB an mTeaii de la soitie des nerfs; g) filets nervenz plexiformes se rendant aux ceUoles auditives h).

Fig. 87. Fragment de la lagena du pigeon. H. III/8.

a) cartilage de la paroi ; b) tubes nerveux perdant peu 2t peu leur myëlin; et leur gaine de Schwann pour s^efHler b' et pënëtrer ainsi dans le nëvro-ëpithëlium 0.

Fig. 88 Quelques cellules auditives du limaçon du pigeon isolëes par le liquide

de Moleschott. H. in/8.

Fig. 89. Cellules auditives du limaçon du pigeon (raitëes par le chlorure d^or 1 200.

Les cils agglomères ont pris la forme d*un aiguillon a) dans lequel on voit une ligne centrale plus foncée b. Sur une cellule isolée, on voit que le filament central b' très-tënu présente de petits renflements transversaux plus sombres.

Fig. 40. Quelques cellules auditives du limaçon du pigeon isolées et examinées , à Vétat frais, dans une solution étendue diacide osmique. H. Il 10. Im. a) corps de la cellule rempli de granulations foncées; b) plateau terminal ; c) faisceau de cils auditifs avec les stries concentriques et la disposition en gradins.

Fig. 41. Un groupe de cellules auditives provenant du limaçon du pigeon et dont

Textrémité inférieure se continue avec des filaments nerveux. 11/10. Im.

a) corps des cellules; b) plateau terminal; c) cils auditifs; d) filaments

sombres, quelques-uns variqueux, se perdant dans Textrémité inférieure

des cellules.

Fig. 42. Cellules et cils acoustiques de Tampoule du canard. II/8.

a) corps des cellules; b) quelques noyaux épars; G) cils en général assez épûs à la base , trës-raides et dont quelques-uns ont une longueur trës-considérable.

Fig. 43. Cellules acoustiques du limaçon du pigeon après macération dans une solution d'acide chromique 1/10.000. Elles se sont gonflées et ont en partie laissé échapper leur contenu.

Fig. 44. Cellules du limaçon du pigeon isolées dans Teau salée.

a) quelques-unes de ces cellules à peu près entières; a') d'autres fragmentées; b) d'autres ne présentant qu'un seul cil en forme d'aiguillon ; c) une cellule cylindrique du cartilage nerveux.

Fig. 45. Crista acustica et cupula terminalis du pigeon. H. III/S.

a) paroi osseuse; b) cartilage de la crista avec c) faisceaux nerveux obli- . quement coupés et d) quelques rameaux vasculaires ; e) névro-^ëpithélium avec ses deux couches; f) épithélium indifiérent; g) cupula terminalis; h) cils terminaux.

Planche V.

Fig. 46. Fragment de la paroi du saccule {laeerta agiliê)^ traitée par l'acide osmique dilué, l'alcool 1/3, et le picrocarmin. H. III/8. a) lamelle cartilagineuse; b) traînées protoplasmatiques avec c) cercles brillants ; d) épithélium pavimenteux de la paroi du saccule devenant plus petit et plus serré à mesure qu'il se rapproche de la lamelle cartilsigineuse.

Fig. 47. Fragment d'épithélium de la paroi du saccule {ktcerta agilia). Même préparation. H. III/8.

a) cellules protoplasmatiqnes; b) oelloles ëpithëliales simples intermëdiaiies.

Fîg. 48. Fragment ëpîthëlial de la paroi du saccule chez YorYet(Angui8 fragilis). Même mode de prëparatîon. H. m/S.

a) masses de protoplasma plus on moins contracte remplissant les lacunes formëes par le tassement des cellules ëpithëliales simples b.

Fig. 49. Fragment ëpîthëlial de la paroi du saccule chez la couleuvre (Tropidonot. natr.). Même prëparation. H. 111/8.

a) cellules protoplasmatiqnes ramifiëes, ëtoilëes, formant un rëseau entre les cellules simples b. .

Flg. 50 Quelques cellules protoplasmatiqnes isolëes du saccule du lëzard. Même mode de prëparation. H. ni/8.

Fig. 51. Une de ces cellules complëtement isolëe, montrant ses prolongements en tous sens. H. 111/ 8.

Fig. 52. Quelques-unes de ces cellules isolëes aprës macëration dans une solution de monochromate ammonique.

a) leur extrëmitë supërieure en forme de pëdicule par lequel elles sont rattachëes au rebord cuticulaire; b) noyau central entoure de toutes parts par des filaments protoplasmiques G .