EXPOSÉ TECHNIQUE

Je crois bon, avant de terminer, d’exposer rapidement les procédés que nous avons mis en usage dans nos recherches; nous avons, en général, suivi les méthodes indiquées par WaALpeYEer dans son article du Manuel de SrrickER, page 958.

Pour l'examen des parties à l’état frais, nous nous sommes servi de l'humeur aqueuse, du sérum iodé, d’une solution salée 0,50 — 0,75 ‘/, ou chromique {/,550 — ‘/10,000 La liqueur de Morescuorr (alcool et eau salée) et surtout l'alcool !/; de Ranvrer nous ont rendu de bons services comme liquides à macération. Les solutions faibles d'acide osmique !,, — 1/,°/,, dont on peut du reste faire varier la durée d'action, sont peut-être celles qui nous ont donné les meilleurs résultats. Nous avons également employé le procédé recommandé par HENSsEN, c'est-à-dire exposé les fragments à examiner aux vapeurs de l'acide osmique solide avec conservation ultérieure dans l’eau salée, ou la solution d’acétate de potasse recommandée par ScHuzrze. Un procédé qui nous a particulièrement réussi pour la dissociation des diverses formes de l’épithélium indifférent, et dont nous avons déjà parlé, consiste à faire macérer dans l’alcoo! !/; des fragments de tissu préalablement traités par une solution osmique faible. Comme matières colorantes, nous nous sommes surtout servi du picrocarminate d’ammoniaque, de la purpurine, de la fuchsine et du bleu d’aniline; ces deux dernières substances semblent avoir une affinité spéciale pour les membranes de recouvrement et les cils acoustiques. Le chlorure d’or employé en solution concentrée et sur les tissus frais ne nous a pas paru spécialement avantageux.

Pour ce qui est des préparations durcies et des coupes, nous ferons refharquer qu'après avoir rapidement dépouillé la tête de l’animal tué à l'instant, fendu le crâne sur la ligne médiane, nous iso-

lions grossièrement le labyrinthe osseux dont les cavités étaient ouvertes par l’ablation de la columelle et de parcelles osseuses plus ou moins étendues. Ainsi préparé (ce qui, avec un peu d'habitude, ne prend que quelques instants), le labyrinthe était soit en entier, pour les reptiles de petites dimensions, soit en.fragments, plongé dans une solution d'acide osmique de 0,5 à 1,20 °/,, où il restait pendant 24 heures, dans un endroit frais, Soigneusement lavées dans de l'eau distillée, les préparations étaient ensuite portées dans de l'alcool absolu, d’où elles passaient dans le liquide à décalcifier. Ce dernier était ordinairement une solution de chlorure de palladium acidulée par quelques gouttes d'acide chlorhydrique, ou une solution d'acide chromique 0,25 — 0,50 °/,, ou enfin une solution d'acide picrique saturée. Après un temps variable, très-court dans quelques cas où la substance osseuse était réduite à une lamelle excessivement mince, les labyrinthes décalcifiés étaient sortis du liquide, dégorgés dans de l’eau distillée et conservés dans de l’alcool. Nous avons, comme on voit, suivi des procédés assez compliqués; mais aussi nous ont-ils donné des résultats bien supérieurs à ceux que nous avons obtenus avec des préparations simplement traitées par le liquide de Müller, ou la solution de mono- ou bichromate ammonique. Du reste, remarquons de suite que même avec la méthode indiquée plus haut, nous avons obtenu dans les résultats une différence que nous ne pouvons nous empêcher de rapporter ici: des coupes, en effet, les unes étaient excessivement foncées, noires, mais d’une netteté de détails ne laissant pour ainsi dire rien à désirer; les autres, à épaisseur même relativement plus grande, présentaient une coloration beaucoup plus claire, plutôt jaune ou vert-jaunâtre, mais par contre une netteté moins considérable des éléments anatomiques. Cette différence, que nos fig. 5 et 31, 21 et 25, par exemple ont essayé de reproduire, nous ne pouvons l’attribuer qu’à la nature du liquide à décalcifier, et nous nous croyons autorisé à admettre que c’est l'acide chromique qui empêche la coloration de l'acide osmique de devenir aussi intense. L’acide picrique a sur les deux autres solutions et notamment sur la solution palladique le désavantage de favoriser la désagrégation de la préparation et de rendre ainsi les coupes plus difficiles.

Pour ces dernières, nous avons du reste été forcé de suivre un manuel opératoire assez compliqué, maïs qui nous paraît indispensable, Le fragment de labyrinthe, sorti de l'alcool, retrempé un instant dans de l’eau, était plongé dans un mélange à parties égales de géla-

tine et de glycérine, et maintenu un certain temps dans cette masse chauffée au bain-marie. Cette dernière précaution est nécessaire pour chasser autant que possible les bulles d'air et remplace sans trop grand désavantage la machine pneumatique proposée à cet effet par Mosezey !, Enfin le fragment, placé dans une cavité creusée dans un morceau de foie durci, recouvert du mélange de glycérine et de gélatine, était replongé dans l'alcool, où en quelques jours le tout prenait une consistance très-favorable à la coupe. Comme masse à inclusion, le mélange de glycérine st de gélatine nous a paru de beaucoup supérieur au savon transparent, à la paraffine et surtout au mélange de cire et d'huile préconisé par STRICKER.

Les coupes, faites à main libre, étaient toutes examinées et au besoin conservées dans la glycérine.

Tel est le procédé qui nous a le mieux servi et que nous avons de préférence mis en usage. Rappelons toutefois que, pour toute une série de préparations, nous avons essayé le procédé de GeErLacx : le labyrinthe durci dans une solution de monochromate ammonique était divisé en coupes très-fines; les coupes elles-mêmes étaient soumises pendant un ou plusieurs jours à l’action d’une solution diluée 1/40000 de chlorure d’or et de sodium, puis examinées après exposi tion suffisante à la lumière ; mais cette méthode n’a pas réalisé ce que nous en attendions, et pour les détails de la distribution nerveuse comme pour tout le reste le cède de beaucoup à la précédente.

Nous avons peut-être insisté trop longtemps sur des détails qui peuvent paraître futiles à qui n’a pas l’expérience des difficultés que présente l'étude histologique du labyrinthe membraneux; c’est que les obstacles déjà si nombreux que l’on rencontre dans l'examen microscopique du limaçcon des mammifères se multiplient peut-être encore quand il s’agit de répéter cette étude chez les animaux inférieurs: la simplicité plus grande de structure est largement compensée par l’exiguité même des parties, et l'on rencontre parfois de grandes difficultés à faire, dans un sens déterminé, une coupe convenable d’un organe qui souvent, comme le limaçon de la couleuvre ou de l'orvet, rentre presque déjà dans le domaine des objets microscopiques.

1 Moserey, On methods preparing the Organ of Corty, ete., in Microsc. Quart, journ., XLVIII, p. 374.

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