B. —— PROCÉDÉS QUANTITATIFS

1 — Hémo-Alcalimétrie. — Comme on vient de le voir, l'emploi de substances poreuses colorées par le tournesol est déjà capable de fournir par comparaison quelques indications approximatives sur le degré d’alcalinité de divers liquides sanguins.

J'avais imaginé d'en tirer un véritable procédé de titrage en impreignant au préalable chaque parcelle poreuse, d’une quantité connue d'acide. Dans ce but, j'avais préparé dix solutions d'acide oxalique de titres gradués. Je découpais de petits carrés, tous égaux, d’un papier buvard blanc très épais et bien neutre. Sur chacun d'eux je laissais tomber une goutte de teinture de tournesol neutre et je laissais sécher. Puis je

(4) — Giornale di Farmacia, di clinica e di se. affini — XXXIII. (2) — Rivista clin. e. terapeut. anno VII, num. 6. (3) The journ. of Physiol. — vol. III. — 1889-82— p. 292-293,

les rangeais par séries de dix et je laissais tomber sur le n° 1 de chaque série, une goutte d’un volume connu de la solution acide la plus faible; sur le n° 2, une goutte de la solution acide n° 2, et ainsi de suite jusqu’au carré de papier n° 10 de chaque série, qui recevait une goutte de la solution acide la plus forte. Je laissais sécher encore et je conservais les papiers dans cet état.

Au moment de faire un dosage alcalimétrique, je déposais au centre de tous les carrés d’une même série, une goutte d’une solution de sultate de soude, puis une fraction de goutte de sang obtenue par la piqûre du doigt. Dans ces conditions, les globules demeuraient au centre du papier humide et le plasma seul diffusait eirculairement. La zone imbibée par le plasma se colorait en bleu foncé sur les carrés les moins riches en acide, et cette auréole apparaissait de plus en plus pâle sur les autres carrés. Sur l’un d’eux, enfin, elle ne se formait plus : c'était le point neutre:

J'avais entrepris également des essais analogues avec du papier collé. Une série de dix cercles de même rayon était tracée au compas sur du papier Wathman très épais. Sur chacun de ces cercles, on étalait d'une manière uniforme une goutte d’un volume connu de solutions acides de titres gradués, préalablement teintées en rose par du tournesol. Après dessication, l’on déposait sur chacun de ces petits cercles colorés, une gouttelette de sang que l’on aspirait ensuite à l'aide d’un linge humide, comme le faisait Schäfer. Le sang laissait alors sur les premiers cercles une trace bleue qui était de moins en moins prononcée à mesure que l’on se rapprochait des cercles plus riches en acide. Sur l’un d’eux enfin, elle n’était plus perceptible : c'était le point neutre.

Mon intention était, dans l’un et l’autre cas, de déterminer une fois pour toutes, à l’aide de liqueurs de soude convenablement titrées, à quel degré d’alcalinité correspondait chacun de mes papiers-réactifs.

Les avantages évidents d’un pareil procédé auraient été la rapidité et la simplicité extrême. Malheureusement là réaction bleue diminuait d’une manière insensible, de sorte que la détermination du point neutre restait toujours incertaine. Je n’ai donc pas donné suite à ces essais et si je les mentionne ici c’est afin d'éviter d’assez longs et pénibles tâtonnements aux expérimentateurs qui pourraient être tentés de s'engager dans la même voie. C’est aussi afin de ljustifier les réserves que je crois devoir faire sur une « note préliminaire » publiée naguère par MM. John Berry Hayeraft et R. J. Williamson (1). Ces auteurs proposent d'employer « six ou sept bandes de papier (glacé) préparées avec du tournesol, et d’une teneur en acide variable. Avec le papier riche en acide, disent-ils, le sang doué d’une forte alcalinité donne seul une réaction, tandis que le papier pauvre en acide réagit avec du sang doué d’une faible alcalinité et ainsi graduellement pour les autres. Le titre de ce papier peut d'ailleurs facilement être évalué en l’essayant avec une solu- ‘tion de potasse caustique. » MM. J. B. Haycraft et R. J. Williamson recommandent de « tremper le papier sec dans du pétrole (Petroleum) et de le lisser ensuite avec soin. » Je souhaite que cette variante dans la manière d'opérer ait fourni entre leurs mains de bons résultats. Mais je commence à craindre qu'ils ne se soient heurtés à des difficultés semblables à celles qui m'ont arrêté, car depuis leur note préliminaire, qui remonte actuellement à plus de deux ans déjà, ils n’ont, à ma connaissance, publié encore aucun résultat.

Dès 1850 le docteur Cahen fils avait imaginé de titrer . directement le sérum du sang à l’aide d’une solution au centième d'acide phosphorique tribasique (2). Comme réactif, il

:employait le tournesol. Étant donné l’époque de son travail

(4) Centralbl. f. Physiol. Band III, n° 19 (4889). (2) V. l'index bibliographique.

— 36 — | et la nature inflammatoire des maladies qu'il étudiait il n’est pas douteux qu'il opérait sur d'assez grandes quantités de liquide provenant de la saignée.

Ce que le docteur Cahen avait fait sur le sérum, Zuntz, (4867) le fit sur le sang total. Il opérait sur le sang artériel du porc ou du chien. Afin de reconnaitre le terme de la réaction il déposait de temps en temps une petite goutte de ce sang sur un fin papier de soie ifeines Seidenpapier) coloré avec du tournesol et imbibé d'une solution concentrée de chlorure ou de sulfate de soude. Dans ces conditions, ditil (4) «la matière colorante ne se diffuse pas dans le papier et, sur le bord de la goutte, la réaction se manifeste bientôt. » Plus tard (2) il prit même la précaution de réabsorber la tache de sang après quelques secondes à l’aide d’un papier buvard, afin de mettre la réaction mieux en évidence.

Zuntz avait employé l'acide phosphorique très dilué, « parce que, disait-il, les autres acides minéraux coagulent l’albumine et que les acides organiques paraissent peu dignes de confiance, eu égard à leur oxydation possible par l'oxygène osonisé du sang (2). » Lassar (1874) ne crut pas, à juste titre, devoir s'arrêter à ces considérations un peu subtiles, en ce qui concerne les acides organiques. Il fit observer que l’acide phosphorique présentait l'inconvénient grave de ne pas donner avec le tournesol un virage bien net, par suite de la réaction amphotère due à la coexistence des phosphates bi et mono-métallique. Il adopta une liqueur contenant 7,5 gr. d'acide tartrique par litre (£ normale). A part cela il opérait, d’après les indications de Zuntz, sur le sang artériel des animaux (lapins, chats, chiens, moutons), refroidi dans la glace. Chaque titrage portait sur une quantité de sang voisine de 30 grammes.

(1) Centralbl. f. d. Med. Wissensch, Ve année, n° 34 (3 août 4867). (2) ibid. — ibid., n° 51 (23 nov.).

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Un procédé d'analyse exigeant une telle quantité de sang n'aurait pu être appliqué à l’homme sain ou malade, qu’à l’époque où l’on abusait de la saignée, Alors Becquerel et Rodier pouvaient dire, en parlant des saignées qu’ils avaient faites sur des individus bien portants, pour leurs « Rechersur la composition du sang » : Elles ne leur ont jamais été prescrites que sur leur demande et même sur leur insistance. C'était ce qu’on est convenu d'appeler des saignées de complaisance ou de prégaution (4). » Il n’en va plus de même aujourd'hui. C’est pourquoi M. Lepine, lorsqu'il entreprit, en 1878, d'étudier les variations alealimétriques du sang dans les maladies, s’ingénia tout d’abord à trouver un procédé qui lui permit de n’opérer que sur la petite quantité de sang que l'on peut obtenir par la simple piqûre du doigt (2).

Cet auteur, et à son exemple MM. Canard (3) et Garél (4), ses élèves, recucillaient préalablement dans une éprouvette graduée 2 ou 3 centimètres cubes d’une solution saturée de sulfate de soude exactement mesurés. Piquant alors le doigt avee une lancette, ils en exprimaient le sang à l’aide d’une lanière de caoutchouc qu’ils enroulaient et déroulaient à plusieurs reprises. Le sang tombant dans la solution de sel neutre ne se coagulait pas. Lorsqu'ils en avaient ainsi recueilli de 4 à 2 centimètres cubes, ils mesuraient très exactement le mélangeet procédaient à un titrage par le procédé de Zuntz à l’aide d’une pipette graduée en 1/50 de centimètre cube. M. Lépine recommande indifféremment l'emploi de l'acide tartrique ou celui de l'acide oxalique.

Le principal défaut de ce procédé consiste en ce qu’il manque de rapidité. Il est incontestable que pendant les quelques minutes exigées par l'écoulement de 4 ou 2 centim.

Rech. sur la comp. du s., elc. Paris, 1844, p. 7.

Soc. Biol. 1878, et Rev. mens. de méd.et de chir. 1880. Thèse de la Fac. de méd. de Paris, 1878.

Soc. des Sc. méd. de Lyon, nov. 1880.

cubes de sang, et pendant la durée d’un titrage très délicat, Vacidification spontanée du sang se produit; d'autant plus que, afin de laisser à l’acide carbonique le temps de, se déga-. ger, les auteurs recommandent de «ne procéder qu'avec une certaine lenteur» (4). Ajoutons que la méthode des touches successives appliquée à d'aussi petites quantités de liquide, ne constitue certainement pas un mode d'évaluation bien précis. Et notons que l'appréciation du pointneutre était si délieate que les auteurs eux-mêmes reconnaissaient ne pouvoir légitimement comparer entre eux que les résultats obtenus par le même opérateur avec le même papier réactif et la même liqueur acide. Ce procédé n’en conserve pas moins le grand mérite d’avoir été le premier procédé hémo-alcalimétrique véritablement applicable en clinique et d’avoir fourni, entre les mains de ses auteurs, de très intéressants résultats.

Dans le travail qu’ils ont publiéen 1886 (2), MM. Mya et Tassinari ont fait usage d’un procédé qui consistait essentiellement à titrer, à l’aide d'une liqueur d'acide oxalique, 15 ou 20 centim. cubes du sang de la saignée mélangés à 40 ou 20 centim. cubes d’une solution à 10 °/, de sulfate de magnésie on de soude. Is fixaient le terme de la réaction en déposant de temps en temps une goutte du mélange sur deux feuilles de papier de tournesol, l’une rouge et l’autre bleue et parfaitement sèches. En effet, la dilution préalable du sang par une dissolution de sel neutre permettait de ne pas opérer sur du papier humide. Cette petite simplification constitue assurément un progrès sur le procédé de Zuntz; mais si l'on considère que M.M. Mya et Tassinari étaient obligés d'employer un volume de sang tel que la saignée peut seule le fournir, on devra reconnaître que leur procédé était loin de constituer un progrès sur celui de Lépine.

(1) L&pinE. — Rev. Mens. de Med. et de Ch. 1880. (2) Archivio per le Sc. mediche. — V. IX. Fase. 4

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Antérieurement à la publication du mémoire des auteurs italiens, M. Landois (4885) avait proposé un mode opératoire qui satisfait à la double condition d’être extrêmement rapide et de n’exiger qu’une goutte de sang (1). Ce mode opératoire exige que l’on prépare d'avance dix solutions d’acide tartrique de titres gradués que lon maintient saturées de sulfate de soude. (« Weinsaüre-Glaubersalzgemisch I-X ».) À l’aide d’un tube de verre effilé, divisé par deux traits en deux moitiés égales, de 6 mm. cubes environ, on aspire environ 6 mm. cubes du mélange de «Sel de Glauber-Tartrique » n°1, puis un volume égal de sang obtenu en piquant le doigt du sujet avec une aiguille. On souffle le contenu du tube dans un verre de montre, on agite et on examine la réaction du mélange en y trempant une languette de papier de tournesol neutre. On recommence au besoin la même opération avec les neuf autres liqueurs acides, jusqu'à ce que l’on obtienne un mélange neutre au tournesol. Pour comparer les résultats fournis par différents échantillons de sang, on peut se contenter de désigner chacun de ces échantillons par le numéro d'ordre de la liqueur acide qu’il neutralise. (I, I, II,... X): On peut aussi, d’après le titre adopté pour les solutions, calculer en NaOH Falcalinité correspondant à 100 em. cubes de sang.

Le procédé de Landois a été adopté avec ou sans modifications par MM. E. Peiper (1888), E. Graeber (1890) Rumpf(1891) en Allemagne et par M. John A.Jeffries(1889) en Amérique (2). M. Jeffries ajoutait un peu de sublimé à ses solutions d'acide tartrique afin d'en prévenir la fermentation. Pour essayer la réaction de chaque mélange de sangavec les diverses solutions titrées, il en portait une goutte sur un morceau de papier de tournesol sensible préalablement fixésur

(4) Réal-Encyclopädie.. Art. CBlut ».

(2) V. l'index bibliographique.

RAIDS un fragment de liège. Puis il plongeait le liège et le papier dans de l’eau et observait rapidement la couleur de la tache.

M. V. Jaksch, tout en s'inspirant des idées de Landois, a apporté une modification assez importante au procédé de cet auteur (4). Il prépare 48 solutions d’acide tartrique additionnées de SO#Na?, et au moment de faire un dosage il dépose, à l’aide d’une pipette, 1 ‘"* de chacune de ces solutions dans autant de verres de montres. Il recueille le sang à l’aide d’une ventouse et, avant la coagulation, il en dépose 0,4°"* dans chaque verre de montre. Il agite et trempe dans chaque mélange deux bandelettes de papier de tournesol, une rouge et une bleue, afin de déterminer celui dans lequel la neutralisation du sang à été obtenue.

Les avantages de cette manière de faire sont contestables. L'application d’une ventouse scarifiée est assurément moin simple pour l'opérateur, et moins. indifférente au patient, que la piqûre du doigt. En outre, même entre des mains exercées, la durée d’une opération, depuis le premier moment où la ventouse est posée jusqu’à celui où le point neutre est déterminé, est assurément plus grande que dans le procédé Landois : ce qui constitue encore une infériorité sur ce procédé. En revanche, le procédé de V. Jaksch présente cet avantage d’être mieux approprié que celui de Landois aux expériences faites sur les animaux; et c’est précisément ce qui a détérminé M. Swiatecki (2) et M. Winternitz (3) à en faire usage avec quelques modifications. Le premier de ces auteurs, qui opérait sur des chiens, recevait 10 ‘5 de sang veineux ou artériel dans 90 ‘*# d’une solution de sulfate de soude à 10 °/,, et prélevait pour chaque essai 5 tm? de ce mélange : soit, 0, 5% de sang. Le second, qui opérait sur des lapins, puisait à l’aide d'une pipette graduée, reliée à la

(4) V. JAKSCH. — Klinische Diagnostik, elc... Wien, 1887. (2) Zeitschrift f. physiol. Chem. XN B., 1 H. (1890). (3) Tbid., XV B., 6 H. (1891).

carotide par un tube de caoutchouc et une canule, 4 "? de sang qu'il répartissait également dans 10 verres de montre (*).

Notons enfin les deux procédés que M. Fr. Kraus a proposés (1) pour déterminer l'alcalinité du sang que cet auteur désigne assez heureusement par le mot Satre capacitat (capacité acide) (2).

(A). L'un de ces procédés consiste à éliminer du sang toutes les matières albuminoïdes, y compris l'hémoglobine. Pour cela « on place une quantité pesée de sang avee un volume quadruple d’une solution de sulfate d'ammoniaque saturée et parfaitement neutre par rapport à l'indicateur employé. Une partie aliquote du filtratum rapidement étendu est titrée à l’aide du lackmoïd (8). .... « Lors de la précipitation de l’hémoglobine et des albuminoïdes, dit M. Kraus, les globules se ratatinent et permettent ainsi au liquide alcalin qu'ils renfermaient de passer dans la solution saline. On peut donc considérer le titrage comme portant jer sur l’alcalinité du sang total (4). »

(B). L'autre procédé consiste à laisser déposer les globules. « On ne dose donc, à proprement parler, que la réaction du plasma (du sérum dans le sang défibriné). » Dans ce but, le sang est étendu avec 10 fois son volume d’une solution de sel de cuisine à 4°/ et abandonné pendant 12 heures, à basse température, dans un vase cylindrique. « Après

() M. FReuDBERG, d'après les conseils du prof. SAHLI, a également proposé certaines modifications au procédé de Jaksch, que l’on trouvera exposées dans les Archives de Virchow. Bd 195, H. 3, sept. 1891.

(4) Archiv. f. experim. Pathol. u. Pharmakol. T. XXVI (1889-90).

(2) Tandis qu'il désigne l'acidité réelle du sang par le mot: Basencapacität (capacité basique).

(3) Le lackmoïd est une matière colorante dérivée de la résorcine, bleue en solution alcaline, rouge en solution acide, dont l'usage a été ‘recommandé par MM. Traue et Hocx (Per. d. deutsch. chem. Geselsch. XVII Bd; s. 2615 et ibid. XVIII: Jahrgang-Referate, p. 126).

(4) Loc. cit., p. 202.

ce temps de repos on peut, dans un mélange de sang et de sel égalant environ 50 ‘, prélever aisément, à l’aide d’un siphon capillaire, 20 °° d’un sérum parfaitement clair, et seulement teinté en jaune pâle (1). » On titre soit avec le tournesol, soit avec le Lackmoïd.

On pourrait objecter au premier de ces procédés qu’en détruisant les globules et en précipitant les albumines il introduit dans la composition du sang de graves perturbations, et au second qu'un repos de 142 heures à pour conséquence nécessaire un abaissement spontané de l’alcalinité du sang, quoi qu’en ait dit l’auteur. Il est vrai qu’on peut répondre à cela que toutes les observations prises à l’aide de l’un ou de l’autre de ces procédés seront du moins comparables entre elles. Mais un défaut plus grave, au point de vue clinique, commun aux deux procédés de M. Kraus, consiste dans la quantité de sang relativement grande qu'ils exigent. En fait l’auteur avait recours à la saignée, même chez des chloro-anémiques (2).

2.— Procédés gazométriques. —MM. Walter (1877), Burckhardt (1881), H. Meyer (1881-1883), C. Raimondi (1884) et Karl Noorden (1886-87) (3) qui ont préconisé la méthode indirecte consistant à évaluer les variations hémo-alcalimétriques d’après les variations de l'acide carbonique du sang, n’ont opéré que sur des animaux. La mise en pratique de cette méthode est environnée de difficulté matérielles qui ne permettront jamais d’en généraliser l cPphqen en clinique.

Nous n’avons pas à rappeler ici les procédés Ne d'analyse des gaz du sang : on les trouve décrits dans tous les

(4) Loc. cit., p. 203.

(2) V. Zeitschrift für Heilkunde. — X Band — s. 106 — 162: (3) V. l'Index bibliographique.

-traités de chimie: biologique. — Les pompes à mercure qui servent ordinairement à cet usage sont des instruments dispendieux, fragiles et pesants, qu'on ne peut guère transporter même dans un hôpital, de salle en salle et de malade en malade.

Cest après s'être heurté à ce premier obstacle que M. Fr. Kraus à imaginé de doser l'acide carbonique, non plus en volume mais en poids. Il reçoit le sang dans un petit appareil de forme spéciale désigné sous le nom de « Blutrecipient » (récipient du sang). Ce petit appareil est en communication avec des tubes garnis de chlorure de calcium et de potasse et l’on peut y faire le vide à l'aide d’une trompe à eau. Deux pesées successives du « Blutrecipient » avant et après l’introduetion du sang donnent le poids de ce liquide sur lequel porte l’analyse. Deux pesées successives des tubes à potasse, l’une faite avant l’introduction du sang, l’autre après l’adjonction à celui-ci d’un peu d’acide sulfurique étendu et l’action prolongée de la trompe à eau, donnent le poids d’acide carbonique dégagé (1).

Ce manuel opératoire ne parait pas bien avantageux. Il est bien évident, tout d’abord, que la trompe à eau est encore moins transportable que la pompe à mercure. D'ailleurs Île procédé n’est guère rapide, puisqu'au dire de l’auteur luimême «le dosage tout entier, y compris les pesées, dure environ deux heures. » Enfin il présente, aussi bien que le dosage volumétrique, l'inconvénient d'exiger une quantité de sang relativement grande et l'ouverture d’un vaisseau.

Pour être correcte, même, une analyse des gaz ne devrait porter que sur du sang conduit directement de l’intérieur du vaisseau dans la chambre à vide, sans jamais subir le contact de l’air. Elle supposerait donc la fixation préalable d’une ca-

(1) Fr. Kraus. Arch. f. exp. Path. u. Pharm. T. XXVI (1889-90). On trouvera à la page 194 une figure de l'appareil complet.