I. — TITRAGÉ DU SERUM HEMOLYTIQUE

Il consiste à déterminer la quantité minima de sérum hémolytique qui permet l'hémolyse totale en présence d'un excès de complément. Le titrage est effectué une fois pour toutes, à chaque nouveau lot de sérum hémolyÿtique. On utilise le sérum hémolytique dit concentré fourni par l’Institut Pasteur (titre indiqué 1/10.000). On prépare dans des tubes à hémolyse ordinaires une série de dilutions de sérum hémolytique allant du 1/300 au 1/16.000 en progression à peu près arithmétique. On reporte chaque diluüon dans une série de tubes à hémolyse, à raison de 0,1 ml. On répartit ensuite dans chaque tube 0,1 ml. de complément au 1/20 ou au 1/30. On complète par 0,2 ml. de tampon véronal ; on ajoute enfin 0,1 ml. d'une suspension d'hématies de mouton à 2 % du culot (calculés à l’hématocrite) ; on agite vigoureusement et on porte au bain-marie à 37° pour une heure. Les quantités de réactifs présents dans chaque tube sont les suivantes pour chaque dilution de sérum hémolytique (en ml.) :

Sérum hémolytique .::....:..., 0,1 Complément au 1/20 ou au 1/30 0,1 Tamiponsvéronal tit ie a 0e Suspension d'hématies .......... 0/4

Volume total .. 0,5

Il faut noter que la proportion de la suspension d'hématies par rapport au volume total est de 1 à 5 comme dans le titrage du complément et la réaction. Après un séjour d’une heure au bainmarie, la dilution la plus élevée qui détermine une hémolyse totale représente la dose minima hémolytique (M.H.D.). Pour le titrage du complément et la réaction, on utilise 4 M. H. D., c'està-dire une dilution 4 fois plus faible que celle qui a déterminé l'hémolyse totale.