III. — Exposé des faits de coloration i?itra- vitale

A. Os rougis par ralimentation garancée, — On continue à répéter que l'os seul rougit pendant Talimeutation garancée. C'est là une erreur que Serres et Doyère avaient déjà relevée. Le sang est rouge foncé et tous les organes vasculaires possèdent même teinte, du moins au voisinage des vaisseaux. Le foie est couleur gelée de groseille, -le rein est rouge, et, sur les coupes, on voit les glomérules de Malpighi congestionnés et rouge foncé. Les membranes vasculaires (pie-mère, mésentère) sont gorgées de sang el rouge foncé. Il en va de môme de la rate, des ganglions lymphatiques, du tissu adipeux, etc.

Les organes conjonclifs peu vasculaires (tendons, aponévroses) ont leur couleur naturelle, sauf le long des vaisseaux sanguins. Sans parler de Tépiderme qui s'est coloré par sa surface externe, on voit le derme rouge foncé partout où il est parcouru par des vaisseaux sanguins. Les muscles sont également rouge foncé.

1. Voir pour les détails le Journal de VAnatomie et de la Physiologie, lîWO, p. 418'

Kastschenko (voir. p. 474) avait noté quelques-uns de ces faits sur la grenouille.

Quant a la teinte que prend le squelette pendant le régime garance, elle dépend de plusieurs conditions, dont la principale est la plus ou moins grande vascularité des tissus. Cette considération avait échappé à la plupart de nos devanciers qui ignoraient la structure et révolution de Tos.

Les cobayes longs de 4, 8 à 6 centimètres possèdent des segments squeleltiques constitués essentiellement par du cartilage vasculaire. De minces lamelles osseuses , périchondrales et non calcifiées encore, entourent la masse cartilagineuse. A partir de cet âge, apparaissent de fines lamelles osseuses qui transforment le cartilage vasculaire en un tissu osseux spongieux; les travées osseuses circonscrivent de larges aréoles remplies de tissu conjonctif très vasculaire telles que je les ai représentées (fig. 1, p. 199 de mon mémoire cité, 4906). Un pareil tissu osseux, coloré pendant la vie par la garance, se teint en rouge vif dans toutes ses parties.

Plus tard, après la naissance, les travées osseuses delà diaphyse des os longs s'épaississent, les espaces médullaires primitifs se rétrécissent et se limitent à un canalicule : à Toeil nu, ce tissu devenu compact paraît blanc, bien qu'une mince zone osseuse colorée en rouge entoure le vaisseau de Havers. Les couches périphérique (sous-périostique) ou périméduUaire montrent, au contraire, une couche ou virole osseuse rouge, parce qu'un tissu conjonctif très vasculaire confine à ces parties osseuses.

I^es os courts, larges, ou les épiphyses, offrent un aspect tout différent : leur masse principale continue à rester formée de tissu spongieux à aréoles remplies de tissu médullaire, très vasculaire. Aussi le régime garance a-t-il pour effet de colorer en rouge vif les épiphyses, les os courts et les os larges.

Ces faits non seulement nous rendent compte des résultats différents que produit Talimenlation garancée chez les animaux jeunes et adultes, mais ils nous permettent d'expliquer et de juger les conclusions des expérimentateurs du xvin^ et du xix" siècle. A cette époque, on ignorait la texture différente des os jeunes et adultes; le plus souvent, on se bornait à l'examen, pratiqué à Tœil nu, de la diaphyse des os longs qu'on croyait formés des mêmes lamelles à épaisseur et à disposition identiques à tous les âges«

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Pour iûlerpréter Taspect blanc de la diaphyse adulte et la teinte rouge de la diaphyse du jeune animal, on supposa que les couches osseuses déjà formées ne fixent pas la fçarance, tandis que l'os en voie de formation prend la teinte rouge. Cette hypothèse erronée fut le point de départ de toutes les conclusions fausses qu*on tirait de ces observations en ce qui concerne le processus de rossificalion.

Lejeu7ie pigeon a toujours été Tanimal de choix pour ce genre d*expériences, tandis que le pigeon adulte semblait peu favorable. L'état et l'évolution de leur squelette nous en donnent la raison. Au sortir de l'œuf, le squelette du pigeonneau est presque enlièrement cartilagineux comme celui d'un embryon de cobaye de 4, 5 ou 6 centimètres de long. Les premiers jours, 2 à 4 jours après la naissance, les vertèbres cartilagineuses deviennent vasculaires; il en est de même du sternum, du bassin, des phalanges. Les segments squelettiques des membres commencent, de plus, à montrer une mince couche ou croûte osseuse qui se développe aux dépens du périchondre ou périoste.

Sur un pigeonneau de douze jours, la diaphyse du fémur montre, outre la couche osseuse périostique, des traînées de cartilage calcifié traversées de larges espaces vasculaires et de minces cloisons osseuses. Du centre de la diaphyse, les vaisseaux sanguins s'étendent vers les extrémités, qui sont à leur tour envahies par les vaisseaux sanguins. Ce cartilage vasculaire n'est entouré vers les extrémités diaphysaires que d'une mince couche osseuse périchondrale.

Les phalanges d'un pigeonneau de 8 à 6 jours sont entièrement composées de cartilage, sauf toutefois le milieu de la diaphyse dont le centre est constitué par du cartilage vasculaire, entouré d'une mince couche osseuse périchondrale.

Les phénomènes de l'ossification sont essentiellement les mêmes chez les mammifères et les oiseaux; les différences portent sur l'âge : à la fin du premier mois seulement, le squelette du pigeon se trouve au stade de développement qui correspond à celui da chien ou du chat à la naissance : tissu osseux spongieux, c'estrà-dire pourvu de larges espaces médullaires qui peu à peu élaborent des systèmes de Havers et se transforment en tissu compact.

Après cet aperçu rapide sur l'évolution du squelette, je passe à la description des points qui sont rougis par la garance.

Les cartilages paraissent incolores même dans leurs portions calciiiées ; mais si Ton examine, à la lumière réfléchie ou transmise, les coupes des cartilages coslaux, par exemple, on reconnail, à la surface du tissu cartilagineux incolore, c'est-à-dire dans le péricbondre, une virole rouge au niveau des vaisseaux, et, jaune orangé dans rintervalle des vaisseaux sanguins.

Quant au tissu osseux, il m'a paru être devenu plus fragile sous l'influence du régime garance. Chez les pigeons, il en est de même, diaprés Du Hamel.

La coloration apparente du tissa osseux varie selon Tâge.

Chez les jeunes Cobayes, la diaphyse des os longs est rouge, tandis que celle des Cobayes adultes parait incolore. Celte appareaee différente tient au développement inégal des lamelles osseuses et du tissu conjoncUf qui remplit les espaces médullaires ou canaux de Havers. Chez les jeunes animaux, les lamelles osseuses sont minces et séparées par des aréoles vasculaires très larges; d*où une teinte rouge uniforme. Chez Tadulte, Tos compact parait incolore, parce que les lames osseuses sont épaisses de 0 mm. 03 à 0 mm. 07 . et traversées par des canaux vasculaires larges de 0 mm. 01 seulement. A Texamen miscroscopique, le tissu osseux proprement dit est coloré à tout âge de la même façon : les sections des canaux de Havers el de Volkmann donnent Timpression d'un semis de points rouges, qu'entoure une zone osseuse colorée en rouge. Il en est de même sous le périoste et autour de la moelle où existe une virole rouge qui atteint dans le tibia et les phalanges, par exemple, une épaisseur de 0 mm. 03 à 0 mm. 04.

Partout où les lames osseuses sont épaisses et les vaisseaux espacés (lames compactes entourant les os longs, courts et larges), Tos rougit peu par la garance. Il en va tout autrement pour des os composés de lamelles minces séparées par du tissu conjonctif très vasculaire (diaphyses des animaux jeunes, épiphyses, portions centrales des os courts et plats). Toujours ce tissu spongieux rougit vivement par Talimentation garancée. Il est facile d'étudier la coloration de ce tissu osseux. Il sufGt d'enlever avec une pince quelques lamelles de ce tissu spongieux et de les monter en préparation persistante (fig. I, pi. VIII). Le tissu médullaire est teint en ronge sombre. Les lamelles osseuses périphériques (2, 2) sont rouge vif sur une épaisseur de 0 mm. 02 à 0 mm. 06, c'est-à-dire

comprenant une ou deux rangées de cellules osseuses. Vers la profondeur (3, 3) cette teinte rouge vif passe au rose, puis au rouge orangé, à l'orangé et enfin au jaune.

En ce qui concerne les éléments du tissu osseux qui sont colorés par la garance, voici ce qu'on observe à un grossissement suffisant : le protoplasma amorphe du noyau, du corps cellulaire ainsi qaela masse amorphe de la substance osseuse sont seuls teints par la garance ; les grains et le réticulum chromatiques du noyau, le réticulum chromophile du corps cellulaire, la capsule et les prolongements capsulaires ont conservé leur apparence sombre ou foncée. Il est facile de s'assurer qu'il ne s'agit pas de canalicules remplis d'air, car l'os frais montre la môme apparence.

En comparant ce dessin aux images que j'ai publiées après fixation et coloration post-vitale, on se convainc que la structure du tissu osseux est la même pendant la vie qu'après l'action des bons fixateurs.

En résumé, les lamelles cartilagineuses ou osseuses qui sont en contact avec les vaisseaux sanguins se colorent à tout âge sur nne épaisseur de 0 mm. 01 à 0 mm. 05. Si les vaisseaux sont rares et espacés (tissu cartilagineux non vasculaire et os compact), le tissu parait incolore à l'œil nu; si les lamelles cartilagineuses ou osseuses sont parcourues et traversées de nombreux vaisseaux, le caFlilage et le tissu osseux (spongieux) sont rouges. C'est là ce qu'on observe dans les épiphyses, les os courts et larges des animaux de tout âge.

En d'autres termes, la garance ingérée dans le tube digestif passe dans le sang qui prend une teinte rouge foncé et qui communique la même couleur à tous les organes vasculaires, du moins aux parties qui avoisinent les vaisseaux sanguins. Les tissus non vasculaires restent incolores. L'os se comporte comme les autres organes : la substance osseuse qui est au contact immédiat des vaisseaux prend une teinte rouge vif, qui se continue par une zone carmin, pour passer plus loin au rouge orangé, puis à l'orangé et enfin au jaune.

Quel que soit l'âge de l'animal, le tissu osseux possède les mêmes affinités, la même élection pour la garance, mais il rougit sur une étendue de quelques centièmes de millimètre seulement, à partir des vaisseaux sanguins. Le cartilage vasculaire et en voie d'ossifl-

ET post-vitai;bb du tissu oiseux. 449

<^on se oolore d*une façcm anssi intense que le tissu osseux qmt «voisine les yaisseaiix sangains. Il offrira par conséquent ooe teinte rcmge Tif.

Le rooge Congo et le rouge neutre agissent comme la garance : Au contact des vaisseaux sanguins, l'os rougit sur une certaine 'étendue. I^es éléments osseux qui se colorent en rouge sont : l"" la masse amorphe de Tos; ^ le cytoplasma homogène <le la cellule; a<» Thyaloplasma du noyau. Les éléments figurés de Tos so«( peu ou point teints par le rouge neutre ou le rouge Congo.

B. Bleu de méthylène. — Le bleu de méthylène ne se porte pas sur les niémes éléments du tissu osseux que la garance, le rouge neirtpe et le rouge Congo. Comme le monfcre la figure II, pi. VIH, les granulations et le réticulum du noyau et du corps cellulaire sont teints en bleu, tandis que le protoplasma amorphe est à peu près incolore. Le bleu de méthylène a une grande affinité pour la cap suie et les prolongements capsnlaires auxquels il confère une teinte bleu foncé ; la masse amorphe reste à peu près incolore bien qu'elle soit traversée et cloisonnée en tous sens par le réticulum bleu des prolongements capsulaires.

Le carmin d'indigo injecté deux fois par jour sous Tépicràne ou dans les sacs lymphatiques de la grenouille fournit, en ce qui concerne la coloration du tissu osseux, des images analogues à celles du bleu de méthylène. Ce sont les éléments figurés du tissu osseux qui prennent la couleur. C'est donc à tort que J. Arnold (voir plus loin, p. (76) a cru injecter ainsi un système creux ou canaltcules du suc du tissu osseux.

Ce qui prouve que nous avons affaire à des colorations intravitales, c'est qu'il suffit de cesser Tusage des substances sus-menlionnées pour voir disparaître toute coloration, sans qu'il survienne de nécrose dans les éléments du tissu osseux.

Ces expériences nous renseignent quelque peu sur la vitalité et la colorabilité du protoplasma vivant. Ces questions sont, chacun le sait, des plus controversées (voir plus loin l'historique, p. 479) : pour les uns, îTiyaloplasma, pour les autres, les filaments et le réticulum chromophile sont vivants à l'exclusion l'un de l'autre. D'autres encore admettent l'égale vitalité de ces deux espèces de protoplasma, mais ils la refusent aux produits d'élaboration, aux enclaves et aux déchets contenus daiis la cellule. Quant à la colo-