IV. — Colorations post-vitales

Serres et Doyère (voir p. 476) eurent Tidée d'enfoncer dans les muscles pectoraux d'un pigeon soumis au régime garance des fragments d'os morts. Après les avoir retirés le lendemain, ils les trouvèrent colorés de la même teinte (par places) que le squelette de l'oiseau lui-même. Ils en conclurent que, dans l'un et l'autre cas, la couleur rouge de l'os n'est qu'un effet de teinture.

Quelque frappante et intéressante que soit cette expérience, elle

ne comporte nullement les conclusions qu'ils en ont tirées. Elle ne montre que les apparences et ne nous renseigne en aucune façon sur les phénomènes intimes de la coloration des éléments anatomiques.

Voici les essais que j'ai tentés pour juger des différences de coloration qui se produisent dans Tos vivant^ en voie de mortification ou complètement mort,

A. Tissu osseux en voie de mortification. — Des os enlevés sur des animaux venant d'être sacriGés sont mis à colorer pendant 24 heures : l*' dans une solution lithinée de garance (garance bouillie dans une solution concentrée de carbonate de lithine); S"* dans une solution aqueuse de rouge neutre; 3^ dans une solution aqueuse de bleu de méthylène.

Dans ces conditions post-vitales, la garance colore la masse amorphe de Tos en rouge, ainsi que l'hyaloplasma du noyau et de la cellule osseuse. La capsule et les prolongements capsulaires sont incolores.

Le rouge neutre colore la substance osseuse amorphe en rose pâle; la cellule el le noyau deviennent rouge vif; la capsule est peu distincte, mais de chacune de ses extrémités part un prolongement rougeâtre qui se teint plus que la masse amorphe.

Le bleu de méthylène donne des images identiques à celles que j'ai obtenues après fixation de los frais, puis coloration par la thionine ou le bleu de toluidine {Journal de Vanatomie^ 1908, p. 569, fig î2 et 3).

B. Os frais fixé dans V alcool, — Le rouge neutre colore la cellule osseuse, la capsule et les prolongements capsulaires en rouge vif, tandis que la masse amorphe de la substance osseuse reste rose ou rouge orangé.

La solution lithinée de garance teint en brun rougeâtre la cellule et la substance amorphe de Tos, mais laisse une apparence foncée on sombre aux capsules et aux prolongements capsulaires.

Le bleu de méthylène colore Tos fixé par l'alcool comme l'os en voie de mortification.

B. Os fixé frais, puis décalcifié, — J'ai montré dans mon mémoire cité, 1905, p. 565, que la fixation précise, puis les colorations progressives ou régressives mettent en relief les portions figurées du tissu osseux et les différencient nettement des parties

amorphes. Les images qu'on obtient ainsi correspondent de ions points à celles que fournissent les colorations intra-vitales ou celles que donne le bleu de méthylène appliqué sur Tos frais.

Ces constatations sont importantes, depuis que A. Fischer et d'autres ont voulu attribuer les différentes structures du protoptasma à l'action des réactifs coagulants. Dans le tissu osseux, le protoplasma vivant possède une structure granuleuse et réticulée dans une portion du noyau, du corps cellulaire et de la substance osseuse; mais, à côté du protoplasma granuleux et réticulé, coexiste, dans chacune de ces parties, un protoplasma homogèfte ou hyaloplasma.

On a rhabitnde de désigner, avec Flemming, les éléments figurés du noyau sous le nom de chromatine, en raison de leur affinité pour les colorants. Dans le même ordre d'idées, j'ai employé le nom (( d'éléments chromophiles » pour les parties granuleuses et figurées du cytoplasma cellulaire, afin de les distinguer du protoplasma homogène ou hyaloplasma.

Excellents pour définir les éléments examinés dans diverses conditions post-vitales, ces termes cessent d'être conformes à la réalité, si on les applique au tissu osseux teint sur le vivant par des principes colorants, tels que la garance ou le rooge neutre. Ces dernières substances se portent, en effet, presque exclusivement sur les protoplasmas homogènes et amorphes du tissu osseux, qui méritent également, dans les conditions intra-vitales, le nom de chromatiques ou de chromophiles. Il faudra donc trouver une terminologie qui convienne à la fois aux phénomènes de coloration intra-vitale et post-vitale.

V. — Parties du tissu osseux qui fixent les principes colorants.

Pour Rutherford (voir l'historique, p. 460), le phosphate de chaux se combine chimiquement avec les principes colorants de la garance et y constitue une laque. C'est au moment où le phosphate (Je chaux sort du sang pour prendre place dans l'os que les principes colorants de la garance se combinent avec lui.

Gibson, au contraire, pense que la coloration a lieu dans le tissu tout ossifié. C'est un phénomène de teinture dans lequel le phosphate joue le rôle de mordant.

Serres et Doyère sont entièrement de Tavis de Gibson; pour ces expérimenutenrs, nous le savons, an fragment d'os enfoncé sous la peau d'un animal soumis au régime de la garance se colore comme les os vivants du même individu. Milne Edwards ' adopta cette opinion : « La fixation de la garance sur les sels calcaires du tissu osseux est un phénomène anaiogoe à celui dû à Taetion des mordants dans la teinture d'nne étoffe et n'est aucunement liée au travail nntritif. »

l^eiscke, purs Strelzoff (voir p. 470) sont arrivés à des résultats opposés : décalcifiant les os des pigeons rongis par la garance, ils ont vu qo^après le départ des sels calcaires, la substance organique on osséine conserve une teinte rouge. Kastschenko a constaté même chose sur les os de grenouille.

Rappelons, d'autre part, que Flonrens, après avoir soumis des femelles pleines au régime de la garance, avait ccmstaté la couleur ronge des os du fœtus. Il en avait simplement conclu que la garance passe du sang maternel dans le sang de Tembryon.

Sachant que le tissu osseux se développe chez les embryons avant que les sels calcaires y apparaissent, j'ai repris les expériences de Floarens et j'ai nourri des femelles pleines avec du son mélangé de garance. Comme je l'ai déjà dit (p. 441), ces femelles avortent vers le 6'^ ou ?• jour et les embryons longs de 4, 5 ou 6 cm. ont leur squelette ossenx teint en rouge. Pour m'assurer que cette teinte n'est pas due à une coloration post-vitale, j'ai sacrifié d'autres femelles dès le 4* ou S' jour, et j'ai constaté sur les embryons vivants la même teinte rouge du squelette.

Voici l'état du squelette.

Chez les embryons de cobaye longs de 4, a à 6 cm., le tissu osseux est déjà développé dans la diaphyse des os longs et dans la voûte du crâne, mais il n*est pas encore calcifié. Aussi peut-on y pratiquer des coupes comme sur le cartilage, sam décalcification préalable. La diaphyse des os longs, qui est à Tétat de cartilage vas- CQlâkire, est rouge sombre, grâce aux nombreux vaisseaux qui sillonnent les espaces médullaires. Sous le périoste existe une zone osseuse rouge vif ou rose, épaisse de 0 mm. 04 à 0 mm. 05. A partir de lot ligne de résorption, le cartilage des épiphyses est ineo^

i. PkffiMofie et Atu^^WM comparéty t. VUI, p. 427.

lore. Les os de la voûte du cràoe, le pariétal, par exemple, est constitué par une table externe sous la forme d*une lame osseuse continue, épaisse de 0 mm. 05. La table interne, qui n'est épaisse que de 0 mm. 01 à 0 mm. 02, est réunie à Texlerne par des irabécules osseuses, de 0 mm. 08 à 0mm. 06 de long, qui circonscrivent des aréoles vasculaires de 0 mm. 10 à 0 mm. 18. •

La pie-mère et les espaces médullaires sont rouge foncé, tandis que les nuances des lamelles osseuses varient entre fe rose vif et le rouge orangé. Pour ce qui est de la colorabilité des éléments osseux, les principes colorants de la garance se portent avec élection sur le protoplasma amorphe, quelle que soit la teinte rouge vif, rose, rouge orangé ou orangée que prenne la lamelle osseuse. La masse amorphe ou hyalopla'sma de la substance osseuse, puis le protoplasma de la cellule et du noyau fixent la garance, à Texclusion de la chromatine du noyau, du réticulum chromophile de la cellule, de la charpente capsulaire et des prolongements capsulaires.

Il est possible que sur Tos vivant les sels calcaires se combinent également avec les principes colorants de la garance; mais la teinte rouge que prennent les os embryonnaires encore libres de sels calcaires prouve que la masse amorphe de la substance osseuse fixe les principes colorants de la garance. Cette masse amorphe ou hyaloplasma se comporte à cet égard comme Thyaloplasma du corps cellulaire ou du noyau. Les éléments figurés du noyau et du corps cellulaire, la capsule et les prolongements capsulaires ont peu ou point d'élection pour la garance.

VL — Résultats.

La structure du tisu osvsseux ivant est identique à celle que nous décèle la coloration du tissu osseux fixé frais. Les parties figurées y préexistent; la fixation ne fait que conserver des éléments préformés, que les colorants définissent et différencient ensuite avec plus de netteté. L'élection des éléments osseux vivants n'est pas la même pour tous les colorants : la garance et le i*ouge neutre colorent spécialement les protoplasmas homogènes et les masses amorphes, tandis que le bleu de méthylène et le carmin d'indigo se portent plutôt sur les éléments figurés. Ces deux espèces

de principes colorants permettent de reconnaître dans le noyau, la cellule et la substance osseuse l'existence de deux protoplasmas distincts, l'un homogène et amorphe, Taulre figuré. Celle distinction n'est plus possible dans le tissu en voie de mortiHcation; le protoplasma amorphe tend à se colorer comme le protoplasma figuré. Bien que les bons fixateurs du tissu osseux frais en conservent toute la structure préformée, les teintes qu'on obtient par coloration progressive ou régressive varient avec la nature du fixateur. Malgré ces variations de couleur, les bons fixateurs confirment Texistence des protoplasmas amorphes et figurés dans toutes les parties de l'os. Ces deux proloplasmas ont une structure dissemblable, une élection spéciale pour les colorants ditîérenls et une affinité particulière pour un seul et même colorant.

G*est principalement la substance organique du tissu vivant qui se combine avec les principes colorants (exemple : os embryonnaire non calcifié).