Anatomie générale^ t. III, p. 100, éd
2. Mm. of the liUer. tmdphUwùpk, So€. of Mancfusitr, 2' série, t* 1, ^ 153, 1803.
Un siècle après Da Hamel, Floureos a repps cette étude, Malgré le nombre et la variété de ses expériences à Taide du régime garaucé» Flotirens B*a ajouté aucun fait nouveau aux données de Du Hamel. Ses explications se ressentent toutes de Tignorance où Ton était pour tout ce qui concerne le développement et la structure du tissu osseux.
Flourens * a soumis de jeunes pigeons de 2 à 3 semaines, ainsi que de jeunes porcs, au régime de la garance, La garance respecterait tous les organes et n*atteindrait que les os ^. u Tous les os sont rouges et les os seuls, (es ligaments, les tendons, les cartilages, conservent leur couleur ordinaire. Dans chaque os, tout ce qui est encore cartilage garde sa couleur ordinaire ; dans chaque cartilage, tout ce qui est déjà os a pris la couleur rouge. »
Un seul repas suffit pour colorer touslesosd'onpigeonen 5ou24 heures.
«c Des pigeons adultes offrent à peine un commencement de coloratioD après plusieurs jours du régime de la garance^ et toujours Tefl'et de la garance est d'autant plus faible que Tanimal est plus vieux et que son ossification est terminée depuis plus longtemps. De vieux pigeons, après 18 el même 22 jours du régime de la garance^ ne m'ont offert, dans leurs os, aucune trace de coloration. »
Du Hamel pensait que, dans les os, la garance n'atteint que les portions d^os qui se forment. Flourens croit avoir vu le même fait : « L'os de ranimai qu'on nourrit de garance se revêt d'une couche rouge; l'os de l'animal qui, après avoir été nourri de garance, est rendu à la nourriture ordinaire, se revêt d'une couche blanche, laquelle se place sur la couche rouge. C'est donc par couches qui se superposent, par couches qui se forment par-dessus les autres, que les os croissent. » En même temps le canal médullaire s'accroît par la résorption des couches internes. Un jeune porc de quatre semaines, soumis pendant 24 heures seulement au régime de la garance, offre des os qui ont déjà pris une couleur rose.
Après un mois de régime garance, un porc est remis à la nourriture ordinaire pendant six mois : tous les os sont blancs à l'extérieur, sauf quelques points rouges dans le corps de l'os, parce qu'ici l'ossification était déjà avancée et Vos rougi n'avait pas à se recouvrir de nouvelles couches. Voilà pourquoi l'os blanc ne s'est point formé en ces points.
Un porc soumis au régime garance, puis au régime ordinaire, ensuite remis au régime garance, présente dans ses os 3 cercles : un rouge externe, un rouge interne et un moyen, blanc.
Les os courts (astragale, rotule) offrent un noyau osseux rougi par la garance; ce noyau est partout séparé du périoste par le cartilage; c ce n'est donc pas dans le périoste, c'est dans le cartilage que l'os se forme » {loc, cî7., p. 109).
. 1. Nouvelles recherches concernant Taction de la garance sur les os, Annales des Se, naturelles, 2* série, (. XIII, p. 97 et 104, 1840.
2. D'après Du Hamel également, ni les viscères (cœar, poumon, foie, rein, etc.), ni les muscles, ni les membranes, ni les cartilages ne se colorent. C'est là une erreur.
Flourens * répète et varie ses expériences qui semblent lui fournir constamment des résultats identiques. Les territoires osseux qui rougissent sont les portions nouvellement formées; ceux qui restent blancs représentent Tos ancien. Sur un jeune pigeon, un seul repas de poudre de garance mêlée aux aliments suffit pour teindre en rouge toutes les parties du squelette, et tous les autres organes restent incolores. Le cercle osseux de la sclérotique est également teint en rouge.
Les os des vieux pigeons se colorent peu ou point du tout.
Malgré Tapparente simplicité de la théorie de Flourens, ses explications sont pleines de contradictions : il admet, d'une part, un périoste interne qui ne serait qu'une continuation du périoste externe^ et, de l'autre, il écrit : « L'os se forme aux dépens du périoste par couches successives et superposées. Du côté de la face interne de l'os, les couches anciennes sont résorbées et c'est grâce à cette résorption que le canal médullaire s'accroît. Gomment deux membranes de composition identique peuvent-elles présider l'une à la formation et l'autre à la résorption? »
Plus loin, Flourens écrit : u Tout ce qui dans un os se forme pendant l'usage de la garance devient rouge, tout ce qui était formé avant l'usage de la garance conserve sa couleur ordinaire. » Ensuite (p. 95) il ajoute : « Mais l'os jeune se colore plus que l'os ancien. Quand on donne de la garance à un jeune mammifère (porc), l'os s'entoure d'un cercle rouge, extérieur, et présente un cercle hlanc^ intérieur. « Sans doute, dit Flourens (loc, cit,, p. 96), l'os du cercle blanc n'est pas absolument blanc. Si l'on soumet au microscope cet os qui parait blanc à l'œil nu, on le trouve coloré, » 11 n'y a donc qu'une inégalité de coloration.
Tout jeune que soit un pigeon, il possède du tissu osseux vieux de plusieurs jours ou de quelques heures; or, un seul repas garance fait apparaître son squelette osseux d'un beau rouge au bout de 24 heures. Il est peu probable que toutes les parties osseuses se soient résorbées, puis reformées en une journée. Flourens concède, il est vrai, que tout os u en état de formation se colore par la garance ». Gomment se fait-il, d'autre part, que « l'os complètement formé » ne soit pas pénétré par la garance?
L'expérimentation et Texamen pratiqués par Flourens étaient les mêmes que ceux de Du Hamel et ses résultats apparents étaient identiques. Du temps de Flourens, la structure et révolution du tissu osseux n'étaient pas mieux connues qu'au xvm« siècle; les procédés d'examen se réduisaient à l'inspection faite à l'œil nu. Toutes les
1. Recherches sur le développement des os et des dents, 1842, et Théorie expérimmtaie de la formation des os, 1847, p. 76.
comparaisons avec les végétaux, toas les raisonnements fondés sur l'os jeune ou ancien ne tiennent pas contre la constatation que voici : que le tissu osseux soil jeune ou ancien, il apparaît rouge à l'œil nu, quand l'animal est soumis au régime garance, partout où il est spongieux, c'est-à-dire formé de minces lamelles que sépare un tissu coojonctif abondant et très vasculaire. Le tissu osseux semble rester, au contraire, blanc (à Tœil nu), lorsque le tissu osseux est devenu compact^ parce que des couches épaisses de lames osseuses ne sont plus traversées que par des vaisseaux espacés (canaux de Havers), autour desquels n'existe qu'une faible zone colorée en rouge. Ne rougissent, sous l'influence du régime garance, que les lamelles osseuses voisines des vaisseaux sanguins, peu importe leur âge, qu'on ait affaire à de l'os en voie de formalion ou de résorption.
Brullé et Hugueny * disent : u Lorsqu'on examine extérieurement un os coloré au moyen de l'alinientaliou garancée, la simple observation fait reconnaître que Vos n'est pas colwé sur toute sa surface ».
Sur les os longs d*un porc nourri de garance, Brullé et Hugueny ont vu trois régions colorées : une région moyenne plus étendue et deux régions extrêmes qui se distinguent de la précédente par une couleur moins vive. Aux extrémités, la coloration se porterait de Tintérieur vers l'extérieur, et de l'extérieur vers l'intérieur dans la région moyenne.
Chez les oiseaux également, la coloration occupe toute Tépaisseur de l'os des extrémités; quant au milieu de la longueur de Fos, il est surtout coloré par Textérieur, et un peu aussi par Tintérieur, ce que constate l'existence des deux cercles colorés sur une section transversale.
Les parties qui ne se colorent pas seraient celles qui sont en voie de résorption.
Il en serait de même de la surface interne de Tos.
€ Sur les deux surfaces de l'os, la substance osseuse est déposée par les vaisseaux de Tun et de l'autre périoste; la matière colorante est portée dans la profondeur par les mêmes vaisseaux. »
Brullé et Hugueny {loc. cit., p. 352) admettent, dans la vie des os, deux périodes : Tune pendant laquelle il y a renouvellement incessant; c'est rintervalle compris entre la naissance et Tàge adulte ; l'autre, pendant laquelle l'os ne se modifie plus que d'une manière extrêmement lente, et où l'on ne peut plus admettre, d'après les expériences faites jusqu'à ce jour, de renouvellement du tissu osseux.
« Dans certains animaux adultes, tels que les poules, les oies, les
1. Expériences sur le développement des os dans les mammifères et les oiseaux, AnnaUt des $ciencet naturelles ; 3* série. Zoologie, t. IV, 1845, p. 317.
464 ED. RETTERER. — COLORATWNS INTRA-TITALES
pigeons, disent Bnillé etHngueny (toc. etf.,p .316), ooos n'avons obten« de coloration que vers les extrémités et dans quelques parties de Tépaisseur de Tos. Il y a donc lieu de croire qu'un peu plus tard la coloratioo ne se serait plus opérée; quant à la résorption, elle ne se fait plus alors, c'est-à-dire quand l'animal est adulte. Par conséquent, il n'y a plus de renouvellement, il n'y a plus de mutation de la matière. »
€omme leurs devanciers, Brullé et Hugueny igooraient le développement et la structure du tissu osseux et ils ont fait fausse roule en voulant expliquer les phénomènes apparents par les principes hypothétiques du renouvellement de la matière osseuse.
Au total, tous les expérimentateurs qui ont eu recours à ralimeotalion garancée avaient cru voir que la coloration des os est d^aataut plus intense que l'os est plus jeune, plus vasculaire. Le fait est exact : les parties de Tos les plus riches en vaisseaux se colorent le plus vivement. Mais les os en voie de formation se colorent-ils seuls ou la coloration des os par la garance ne représente-t-elle qu'un simple phénomène de teinture des parties déjà formées?
Philipeaux et Vulpian * ont tenté de résoudre ces questions. Pour ces auteurs, la garance s'unit aux phosphates des os et ils se demandent de quelle façon disparait la coloration une fois qu'elle s'est produite. La décoloration se ferait-elle par un simple lavage par le sang qui enlèverait à l'os la matière colorante ?
Ils ont soumis 7 porcs âgés de 27 jours au régime de la garance, qui a duré 22 jours.
Le l*"" animal a été sacrifié le 22* jour. Les autres porcs ont ensuite été nourris avec des aliments ordinairc-s.
De ces porcs, l'un a été tué à l'âge de 4 mois et demi ; Tautre, à 6 mois et demi; un troisième, à 8 mois et demi; le 4«, à 10 mois et demi; le ^^ à 12 mois, et demi et le 7^, à 18 mois.
Dans une autre série d'expériences, Philipeaux et Vulpian ont soumis 5 porcs âgés de deux mois et huit jours au régime de la garance et les ont sacrifiés l'un après une durée de 22 jours de ce régime et les autres après les avoir nourris pendant des mois et même trois ans et dix mois avec des aliments ordinaires.
L'examen de cette deuxième série d'expériences aurait pleinement confirmé les premiers résultats.
Parle régime de la garance, disent Philipeaux et Vulpian {loc. cit.. p. 547, fig. 1, pi. XII), « le tihia est coloré dans toute son étendue et dans toute sa profondeur. Comme tous les auteurs l'ont vu, la coloration est plus
1. Note sur le mode d'accroissement des os. Archiva de phytiologie, 1870, p. 530.
intense diuis les couches superficielles que dans les couches profondes ; la partie des tissus spongieux de la diaphyse, qui est voisine des épiphyses, est aussi colorée plus vivement que le reste du tissu. »
Lorsqu'après un régime garance on laisse vivre les animaux qu'on nourrit avec des aliments ordinaires, on voit, au bout de quatre mois, qu'à la surface externe, le milieu de la diaphyse des os longs n'est plus rouge. Aux deux bouts de la diaphyse, la teinte rouge existe encore. Sur une coupe, on voit que la moitié interne de l'épaisseur des parois du canal médullaire est fortement colorée dans sa partie moyenne, tandis que la couche superficielle n'est point colorée. Vers les extrémités de la diaphyse, toutes les couches osseuses sont rouges jusque y compris la surface externe.
L'os primitivement rouges^ donc persisté.
Avec Brullé et Hugueny, les deux expérimentateurs concluent qu'il ne se fait pas une couche régulière sur la surface externe de l'os. « Il se produit de l'os nouveau sous le périoste dans les parties moyennes du tibia; mais un peu plus haut et plus bas, là où nous, voyons persister la teinte rouge à la surface de l'os, il ne s'est fait aucune production nouvelle de tissu osseux. »
Les faits observés sont exacts, mais mal interprétés : en effet, la teinte rouge continue à exister dans les points où persistent les lamelles minces (os spongieux) avec un. tissu conjonctif très vasculaire, que ce dernier soit du tissu conjonctif jeune ou du tissu en voie de résorption (moelle osseuse) ; mais dans les points (diaphyse) où le tissu spongieux se transforme en os compact, les vaisseaux sont éloignés les uns des autres et séparés par des lames épaisses et incolores de substance osseuse.
B. Examen au microscope des os rougis par la garance.
Serres et Doyère* commencent par dire que « personne encore ne parait avoir soumis au microscope, ni même observé à l'aide d'une simple loupe, un fragment d'os rougi par cette expérience (régime de la garance), du moins dans le but d'étudier la coloration elle-même, dans sa nature intime ».
Serres etDoyère ont vu, après quelques jours du régime de la garance, le tissu cellulaire et les aponévroses teints en rose ; il en est de même des membranes séreuses et des sérosités; le tissu adipeux est rose; la couleur du foie est changée.
1. Exposé de qaelqaes faits relatifs à la coloration des os chez les a ai maux soumis aa régime de la garance. Annales des sciences naturelles; 2* série, Zoologie^ 1842, p. 133.
JOUaN. DB L*ANAT. ET DE LA PHY8I0L. — T. XUI. 30
La sabstance blanche du cervean, les cartilages et les tendoss n'oat pas changé de couleur.
Dans Tes la teinte est fixée, tandis qu'il suffit d'un lavage pour enleTer la teinte rose aux autres organes.
Outre la virole colorée, qu'on aperçoit à la face externe de Tos, on voit sur une surface de section de Tos, à Taide d'une loupe un pea forte, cette teinte continue se décomposer en un semis de points dispersés sur un fond blanc*.
Au grossissement de deux à trois cents diamètres « chaque point deviendra un cercle coloré entourant un trou pratiqué dans la substance osseuse ».
Le trou est un canalicule vasculaire (de Havers); le cercle coloré est un cylindre creux coloré qui constitue la paroi du canalicole; ce cercle coloré est continu avec la substance osseuse incolore.
La coloration ne se produit qu'au contact immédiat des ramiûcatioDs artérielles ou veineuses du tissu osseux lui-même ou du périoste. Il n'y a donc pas de coloration générale du tissu osseux dans sa profondeur.
Après avoir décrit Taspect des corpuscules osseux et de leurs prolongements, qu'ils considèrent comme des cavités et un réseau de canalicules, Serres et Doyère ajoutent : « Que contiennent (loc. cit., p. 160) pendant la vie ces cavités et ce réseau de canalicules qui les fait communiquer entre elles? Un fluide, sans aucun doute; mais l'étude des phénomènes de la coloration des os vivants par la garance ne nous autorise pas à croire qu'ils soient, comme nous l'avions d'abord cru possible, le siège d'une circulation quelconque en rapport avec la circulation au sang; jamais et par aucun moyen, nous n'avons pu y saisir aucnoe trace de la pénétration d'un fluide provenant du système artériel oa capillaire. »
L'épaisseur de la virole colorée est de un à deux centièmes de millimètre. La distance des canalicules entre eux est le double environ de cette épaisseur; donc dans la virole osseuse dont ]& coloration apparente est la plus intense, la majeure partie du tissu osseux sera demeurée blanche.
Pour Serres et Doyère, « la coloration n'est qu'unphcnomène de teinture ». Un fragment d'os ou une dent de mammifère, de reptile ou de poisson, est enfoncé dans les muscles pectoraux d'un pigeon soumis au régime de la garance. Si on le retire après 24 heures ou 30 heures, ces fragments sont colorés (par places) de la même teinte que le squelette de l'oiseau lui-même.
Serres et Doyère soutiennent que la coloration ne procède pas du périoste. La surface externe de l'os n'est pas colorée sur toute son étendue. « Toute table de tissu compact, disent-ils (loc. cit., p. 163,, qu'elle appartienne à un os plat ou à un os long, est bordée par une zone incolore, quellequ'ait été l'énergie du régime et sa durée. »
l. Teinte continue rose qui s'enfonce en s'affaiblissant dans la profondenr de Tes.
ET POgT* VITALES DU TISSU OSSEUX. 467
ti Wan autre c6té, la règle d'après laquelle la coloration marcherait de dehors en dedans ne rend point compte de la plupart des faits que montre l'emploi du microscope. » Ainsi, certains os longs sont colorés presque ezclusÎTement par leur intérieur, et il est très facile de vérifier que le décroissement de la coloration s'y fait de dedans en dehors : tel est le péroné, par exemple K
« Mais, en général, un os long présente à qui Tétudie attentivement deux systèmes de coloration distincts : Tun procédant de dehori en dedans, Tautre au contraire de dedans en dehors. »
Sur une coupe transversale d'un fémur coloré physiologiqoement, on trouve « trois couches ou demi-viroles plus ou moins incomplètes, s'enveloppant... Une demi-virole blanche sépare les demi-viroles colorées extérieure et intérieure... »
Serres et Doyère concluent : n La coloration est un phénomène pure* ment chimique, qui se produit dans le tissu tout formé; c'est un fait de teinture, comme Ta annoncé Gibson.
Serres et Doyère ont expérimenté sur le chien et le pigeon. Ils expliquent {loc, cit., p. 156) la teinte rouge que prend le tissu osseux sous l'influence de l'alimentation colorante en admettant que Talizarine et la purpurine de la garance sont fixées par le phosphate de chaux. En versant, dans une solution aqueuse de garance filtrée, du chlorure de sodium et de phosphate de chaux, il se précipitera une laque de phosphate de chaux... Le phosphate de chaux des os est basique et insoluble et a la propriété à ce double titre de constituer des laques en se combinant aux matières colorantes.
A cette époque, une discussion s'éleva entre Serres et Doyère d'une part, et Mandl de l'autre, au sujet de la nature des corpuscules osseux. Dans plusieurs notes communiquées h VAcadémie des Sciences, ces auteurs citent plusieurs faits des plus intéressaots.
Serres et Doyère {loc. cit,, t. XIV, p. 260) pensent que « les corpuscules osseux ne sont que des cavités microscopiques », contenant un fluide pendant la vie. Dans un bain d'huile, ces corpuscules prennent l'apparence de taches noires et opaques. En prolongeant l'observation, l'huile chassera le gaz et les taches et les lignes noires disparaîtront.
Mandl (/oc. cit,, t. XV, p. 1189, 1842) n'est pas de cet avis : une lamelle de tissu osseux sec plongée dans un bain d'huile devient transparente. « La transparence gagne d'abord les lignes les plus déliées, ensuite les plus grosses et enfin les corpuscules eux-mêmes ». Mais les corpuscules et les lignes persistent; » seulement leur transparence les a rendus beaucoup plus difficiles à voir >•.
Si Ton colore par l'alimentation garancée des os de pigeon, on verra que la couleur rouge occupe toute l'épaisseur de la paroi du canalicule
i. Les auteurs ajoutent ea aote que Le syatène de coloration intérieur teoë d'autant plus à prédominer sur rexlérieur, que l'os est plus avancé dans ma développement.
vasculaire ou de Havers (déjà au bout de 24 heures sur un pigeon Dourri avec de la garauce).
Sur le cochon, il en est de même. « Lorsqu'on examine une parcelle d'os peu colorée, on peut facilement distinguer les corpuscules osseux qui présentent une couleur plus intense. »
Doyère {loc, cit.^ t. XVI,'p. 73, 1843) ne partage pas Topinion deMandl. Il dit que Serres et lui-même prétendent uniquement ceci : si l'on plonge un os dans l'huile, l'on voit disparaître les lignes noires dues à la présence du gaz dans les canalicules ostéoplastiques et les bulles d'air contenues dans les osléoplastes * eux-mêmes.
Pour Doyère « la coloration (par la garance) commence par la couche très mince de tissu osseux qui est en contact immédiat, ou avec le périoste ou avec un vaisseau sanguin ; elle progresse dans le tissu osseux par simple pénétration, et, comme dans les os teints artlûciellement, au delà d'une profondeur excessivement faible, le tissu reste absolument incolore. »
Serres et Doyère évaluent en moyenne l'épaisseur de la couche
colorée à -rgg ou 7^ de millimètre.
u Gomme la distance des canalicules entre eux est généralement plus grande que le double de cette quantité, il est évident que, même dans la virole osseuse dont la coloration apparente est la plus intense, la majeure partie du tissu osseux sera demeurée blanche. »
Au voisinage du périoste où les canalicules vasculaires ne sont pas
séparés par un espace excédant ykq ou t^ de millimètre, toute la
substance osseuse peut se colorer.
 côté d'erreurs, plusieurs des observations de ces auteurs sont encore vraies, en partie du moins. En effet, les corpuscules contiennent, non pas du gaz, mais du protoplasma semi-fluide dont la partie amorphe (hyaloplasma) est teintée, comme Ta soutenu Mandl, par la garance. D'autre part, la couche osseuse la plus vivement colorée par la garance limite constamment un vaisseau sanguin et présente une épaisseur qui se rapproche sensiblement de celle que lui assignaient Serres et Doyère.-
V. Bibra^ a étudié le tissu osseux d'animaux soumis au régime garance. Usées sur la pierre, les lamelles osseuses montrent autour des
1. Doyère dit (p. 73, loc. cit.) que Serres, le premier, a donné anx corpuscules sseux le nom d'otUoplattet.
2. CheaUsche Untenuchungen ûbtr die Knochen und Zâhne des Mauchen und der Wirbelikiere, 1844, p. 49-53.
canaux de Havers (Markkanâlchen) des zones teintes en rouge foncé, tandis que la substance osseuse, intermédiaire aux canaux (Zwischensubstanz) n'ofifre qu*une teinte rose pâle uniforme qui s'étend aux corpuscules osseux.
N. Lieberkûhn * nourrit de jeunes souris pendant deux semaines avec des aliments garances. A la loupe, les coupes de la diaphjse du fémur montrèrent : !<> un cercle blanc autour du canal médullaire; 2^ un cercle rouge entourant chacun des canaux de Havers ; 3*^ un cercle blanc avec des taches rouges; 4<» un cercle rouge périphérique recouvert d*une substance non colorée.
 l'extrémité supérieure du fémur, les vaisseaux sont entourés chacun d'un cercle rouge. Lieberkûhn dit que souvent entre le cercle rouge et le vaisseau se trouve une couche incolore (loc. cit., p. 600).
Sur un pigeon, soumis d'abord au régime garance, puis pendant plusieurs semaines au régime ordinaire, Lieberkûhn observa les faits suivants : au-dessous du cartilage hyalin se trouve une couche en voie d'ossification, haute d'une ligne et incolore ; puis vient l'os coloré en rouge. Les trabécules osseuses sont teintes en rouge et dans leurs intervalles se trouvent de fins canaux dont les parois sont rouges. En dehors de la substance compacte (sous le périoste) et en dedans (autour du canal médullaire), il existe une couche osseuse incolore.
Près du cartilage et dans l'os en voie de formation, la teinte rouge apparaît très vite, tandis qu'elle se fait lentement autour des canaux de Havers.
D'après ces faits, Lieberkûhn pense que la garance ne se propage pas dans la substance osseuse par diffusion. La garance est déposée dans le tissu en même temps que les sels calcaires par voie chimique ou mécanique. Dans le milieu de la diaphyse, les canaux de Havers sont étroits et entourés chacun d'un cercle rouge. Au contraire, dans les épiphyses, les trabécules sont toutes colorées, et cela dans toute leur masse.
Lieberkûhn conclut : la garance se dépose dans l'os en même temps que les sels calcaires; une fois unie aux sels, la matière colorante ne diffuse plus pour se transporter plus loin.
Plus tard, Lieberkûhn est revenu à l'étude du tissu osseux. Strclzoff (voir plus loin) avait montré que l'os rougi par la garance conserve sa couleur Lorsqu'on le décalcifie par l'acide chlorhydrique. Pour contrôler ces observations, N. Lieberkûhn ^ a fait les deux essais suivants : 1» en décalcifiant un os teint par le régime de la garance, la substance osseuse pâlit et parait jaune rougeâtre; si l'on y ajoute de l'eau de chaux, l'os redevient rouge. L'acide chlorhydrique décomposerait l'alizarine ou la purpurine combinée avec l'os; l'alizarine ou la purpurine resterait
1. Ueber KnochenwaGbsthum, Archiv f. Anatom. u. Phytiolog,, 1864, p. 598.
2. Ueber die Einwirkang von Âlizaria auf die Gewebe des lebendea Kôrpers, Sitzungtberichte der Getellschaft det Nalurwitsenichaften zu Marburg, 1874, et Maly's Jahretbmchte, t. IV, 1873, p. 325.
470 ED. RETTBRBR. — COLORATIONS INTftA-VITALES
dans FoBt qaand on le décalcifie et se combinerait ensuite avec la chaax qtt'on y ajoute. 2» Si Ton met un os teint en rouge par le régime garance dans Talcool, il reste rouge. Si Ton décalcifle d'abord Tos avant de le mettre dans Talcool, il se décolore. L'alizarine combinée à la chaux est insoluble, tandis que Talizarine libre est soluble dans l'alcool.
KôUiker ^ a soumis de jeunes porcs et chiens au régime de Talimentation garancée et a trouvé que la garance se fixe uniquement et exclusivement sur le tissu osseuss qui se développe pendant la durée de ce régime. Toutes les parties osseuses formées avant le début de ce régime restent incolores.
Sur les diaphyses des os longs (après un régime garance de 3 à 6 semaines), on observe trois à quatre couches : l® Texterne est d'un rouge intense (couche formée pendant le régime garance) ; 2« 'à celle-ci fait suite en dedans une zone rose pâle, peu épaisse. Vient, ensuite, 3° une zone incolore, et enfin 4<>, à la face interne de ladiaphyse, une zone d'un rouge vif. Dans la 2<^ zone rose pâle, il n'existe qu'un cercle rouge autour de chacun des canaux de Havers.
Si l'on cesse le régime garance pendant quelques semaines, on voit une zone incolore le long de la ligne d'ossification ; des couches incolore5 partout, si ce n'est au niveau des lignes de résorption, lesquelles restent rouges.
En un mot, une fois colorées par le régime garance, les lamelles osseuses restent rouges pendant 3 ou 9 semaines, c'est-à-dire jusqu'à leur résorption *.
H. Weiske ^ nourrit de jeunes lapins âgés de 6 semaines à 6 mois avec du son auquel il avait mêlé de la racine de garance pulvérisée. Les jeunes animaux moururent en. quelques jours, les plus âgés vécurent plus longtemps.
Au bout de 3, 5 et 9 jours de ce régime, les os (fémur) sont colorés au niveau de leur ligne d'ossification. A l'œil nu, on ne voit pas de terri-
1. Weitere Beobachtuogen ûber Vorkommea uad die Yerbreitang typischer Resorp* tioDsfliicheDan detiKiiochen, Verhandlungender physik-medic, GeselUchaftUkWartlmrg. N. F., t. III, 1872, p. 223.
2. Malgré l'intérêt que présentent les recherches de Liebcrkûbn et de Kôltiker, elles n'apportent .pas beaucoup de nouveau et n'élucident aucun des 'points controversés. Pour s'en convaincre, il suffit de comparer leurs résultats à ceux de leurs devanciers. Parmi les auteurs contemporains, il en est qui, ignorant la littérature, les regardent comme les premiers en date. En voici deux exemples, déjà cités -par Sigmund Mayer {Anatomiscker Anzeiger, t. XXIII, p. 227). Gierke (Fûrberei zu mikrotkopischm Zwecken, p. 120 du tirage à part) parle de la méthode géniaUy déoooverte par Lieberkuhn, qui le premier a nourri les animaux avec la garance. Aussi mal iaforoé et léger est Tauteur de farticle AUzarin dans r« Encyklopâdie der mikroskopischeu Technik », publié par Ehrlich, Mosse, Krause, Rosin et Weigert, 1903. il écrit, eu effet : « L'alimentation garancée, inaugurée par Lieberkiihn et KôUiker, a acquis eu technique bistologique une certaine importance, qnand il s'agit d'étudier la croissance du tissa osseux ».
3. ISoliz sur Rothrârbung der Kaochen durch KrappruUernng, JtOiresberieM der Thier-Chemie, de Maly, t. III, 1874, p. 227.
toires rouges; au microscope seulement, on aperçoit leur teinte rouge.
Sur un lapin de 3 jours, après un régime garance de 14 jours, les mêmes territoires étaient colorés en rouge ; de plus, les parois du canal médullaire et la couche osseuse sous-jacente au périoste offraient une teinte rosée.
Sur deux autres lapins de 4 et de 7 mois, les extrémités de la diaphyse avaient rougi ; plus Tanimal est âgé, plus la teinte rouge est accentuée.
Si Ton interrompt le régime garance, pour ne servir que du son pendant 44 ou 28 jours, on voit persister la teinte rouge aux extrémités de la diaphyse, tandis que la diaphyse présente deux cercles rouges, Tun externe, Tautre interne, et une couche osseuse intermédiaire qui est incolore.
Si l'on traite un fragment d'os teint en rouge par Tacide chlorhydhque, Tos décalcifié (cartilage de Tos) reste rouge» surtout si Ton ajoute un aUali. La solution d'acide chlorhydhque qui avait servi à la décalcification donne avec l'ammoniaque un précipité qui est incolore. Par conséquent, la matière colorante de la garance n'est pas combinée aux sels calcaires; elle est fixée par la matière organique de l'os, comme l'avait annoncé Lieberkûhn.
Strelzoff ^ a fait de nombreuses expériences sur les pigeons, quelquesunes sur le chien, pour étudier la coloration des os par le régime garance. Il les a étudiés à l'œil nu et au microscope. Il remarque que des os paraissant rouges à l'œil nu peuvent, sur les coupes microscopiques, être incolores. D'autre part, des os. qui paraissent incolores à la lumière transmise, montrent une teinte rosée à la lumière réfléchie. 11 conservait ses préparations dans la glycérine et à l'obscurité .
Strelzoff crut voir, avec l'objectif à immersion, que ces stries rouges (Krappstreifen) étaient contenues dans un système canaliculaire très délié qui communiquait par des canalicules très fins avec les prolongements des corpuscules osseux. Sur la figure 27 (pi. XI)^ qui est assez confuse, ce système canaliculaire serait représenté par les cavités des corpuscules osseux et leurs prolongements creux. En pénétrant dans ce système de canaux et de canalicules qui correspondrait à un système lymphatique, la garance déterminerait la production de ces stries ou iM>rdores rouges. Strelzoff (loc. cit.^ p. 127) n'a jamais pu observer la coloration des parois mêmes des prolongements partant du corpuscule, c'est-à-dire du système canaliculaire. Cependant il suppose qu'elle existe, car, ajoute-t-il, on ne pourrait pas expliquer la coloration diffuse, s'il n'en était pas ainsi.
Strelzoff [loc. cit. y p. 129) se demande avec quelle substance est combinée la garance : est-ce avec les sels calcaires ou la substance organique? Il croit que c'est avec les deux, car, avec l'acide chlorhydrique, on peut décalcifier un os teint par la garance sans le décolorer. De plus, on
¥, Geoetiscbe und topographische Studien des Kaocbeawacbsthums, Untersuchungen aus dempatKol. IntUtut zu Zurich, pabliées par Ebertb, 1874, p. 94.
472 ED. RETTERER. — COLORATIONS INTRA-VrrALBS
peut traiter Tos rougi par la soude caustique et détruire ainsi la substance organique, la couleur rouge persiste après la disparition de la substance organique. Strelzoflf conclut de ces faits que la garance est combinée et avec les sels minéraux et avec la substance organique.
Pour StrelzofT [loc, cit.^ p. 129) la garance se répand dans les canaui du suc et les prolongements des corpuscules osseux et colore les bords de ces canaux. Bien que les parois des prolongements corpusculaires ne soient jamais colorées, il faut, dit Strelzoff, admettre qu'elles se colorent quand même, car on ne pourrait pas autrement expliquer la teinte diffuse.
Ces canaux du suc n^existeraient que chez l'animal jeune et non point chez le pigeon adulte; c'est pour cela que les os de Tadulte ne prennent pas la garance. Les canaux du suc qui ne paraissent que dans Tos en voie de développement, sont en communication avec les prolongements des corpuscules osseux. Plus tard, ils disparaissent {loc. cU,y p. 132).
Pour Strelzoff (bc. cit.^ p. 115) les zones osseuses colorées par la garance sont constituées par des canalicules du suc disposés en réseau ou en plexus. 11 en existe des zones périphériques^ sous-jacentes k la couche préosseuse; ce sont les stries générales. Outre celles-ci, on ne remarque autour de chaque canal de Havers (zones ou stries baversiennes). Ces zones ou stries ne sont que des canaux du suCy dont les bords sont teints par la garance; de sorte que Strelzoff admet des canaux du suc généraux ou d'autres, haversiens.
Tous ces canaux du suc restent, à tous les stades du développement, en relation ou communication directe avec Us prolongements des corpuscules osseux {loc, ctf., p. 117).
Les deux bords des canaux du suc sont toujours colorés en rose; quand les bords sont inégalement colorés, la teinte est toujours plus prononcée sur celui où Ton observe le plus de prolongements de corpuscules osseux.
Strelzoff' a mesuré, au niveau du trou nourricier du cubitus, le diamètre des canaux de Havers. Sur 12 pigeons d'âge différent, il a pratiqué 2 400 mensurations et il a trouvé que le diamètre des canaux de Havers diminue avec Tàge. Sur les pigeons âgés de deux jours, le diamètre de ces canaux varie entre 0 mm. 114 et 0 mm. 027; sur les pigeons adultes, entre 0 mm. 015 et 0 mm. 003 et, aux âges intermédiaires, les chiffres oscillent entre ces extrêmes.
11 a soumis 45 pigeons au régime de la garance.
Il divise les phénomènes en trois stades :
/c stade. Au bout de 24 heures du régime garance sur les pigeons âgés d'un mois, tous les os sont colorés d'une façon uniforme : au microscope on observe une zone colorée externe, une interne et une autre
1. Ueber Kaochenwachslhnm, Arckiv f, mikrot. Ânattmie^ t. XI, 1874, p. 61.
entourant chaque canal de Havers. Le reste de la substance osseuse est incolore. Les zones colorées passent par des transitions insensibles au tissu osseux incolore.
Sur un pigeon nourri pendant i ou 2 semaines de garance, on retrouve la même image.
2*^ stade. Sur les pigeons âgés de 2 mois, tous les os rougissent : sur la coupe transversale, la zone interne est teinte en rouge pourpre [virole colorée) y et la zone externe est rouge écarlate.
Au microscope, on reconnaît des lignes colorées (Streifige Pârbung) et une teinte diffuse.
Les stries colorées générales, au nombre de 5 à 6, sont parallèles à la surface externe de Tos, les autres stries entourent les canaux de Havers. Ces deux systèmes sont propres au 2*' stade.
La teinte diffuse dépend des stries colorées précédentes en ce sens que la couleur de ces stries passe par des nuances de plus en plus faibles au tissu osseux incolore.
Toutes les stries colorées générales se développent à partir de la surface externe de Tos.
Le tissu osseux qui est en voie de formation ne se colore pas ; la teinte se propage au moyen du système de canaux du suc.
Si on cesse le régime garance, dit Strelzoff {toc. cit. s p. 71), les os en voie de formation continuent à se colorer. En nourrissant un jeune pigeon de garance et en cessant ce régime à Tépoque où les tendons s'ossifient, on voit chez le pigeon devenu adulte, les tendons ossifiés prendre la teinte rouge. Du Hamel avait déjà observé le fait.
En résuméf les stries colorées de Strelzoff se produisent constamment pendant le régime garance : celles, qu*il appelle générales, correspondent aux lamelles osseuses qui sont en rapport avec le tissu conjonctif périostique et médullaire; les stries havérsiennes entourent les canaux de Havers. Ces stries n'ont rien à voir avec le processus même de Tossiflcation. Quant aux canaux du suc, admis par Strelzoff, ils sont un produit de l'imagination, comme Schreiber Ta montré récemment (voir plus loin, p. 475).
F. Busch ^ s'est demandé si la substance osseuse en voie de formation ou l'ancien os se colore pendant le régime garance. Il a déterminé par voie chirurgicale la production d'un cal sur cinq chiens qu'il a soumis pendant la réparation de l'os au régime garance. Sur quatre de ces animaux, l'os ancien était incolore, tandis que la substance osseuse du cal était rouge; le o^' chien présentait de plus, outre un cal rouge, des cercles rouges autour des canaux de Havers. Il conclut de ces faits que la substance osseuse eu voie de formation fixe les principes colorants, et que les zones rouges entourant les canaux de Havers représentaient de la jeune substance osseuse.
t. Ueber dea Wertb der Krappfùtterang als Méthode zur Erkennung neuer Koochensubstanz, Langenbeck't Archiv f. hlini$che Chirurgie, t. XXII, 1877.
474 ED. RBTTERER. — COLORATIONS lOTRA-VITALES
Kastschenko * ingéra de la garance à des têtards et à des grenouilles adultes. Les principes colorants apparaissent dans le sang et dans les tissus. Pour Tos en particulier, il présente la coloration diffuse et les cercles rouges décrits par StrelzofT chez les mammifères. Les cercles rouges apparaissent à une certaine distance de la surface osseuse. Quant à la coloration diffuse, elle dépendrait de la présence des caDalicules du suc.
Dans les os longs existe une couche qui manque de canalicules du soc et de corpuscules osseux; Kastschenko l'appelle la couche osseuse kùmogène. Aussi resle-t-clle ordinairement incolore pendant le régime garance. Cependant, ajoute Tauteur, lorsque la couche homogène touche le canal médullaire, elle se colore par la garance. Kastschenko ne cherche pas à à expliquer cette contradiction.
D'autre part, Kastschenko (loc. cit., p. 380) a relevé les contradictions de Busch et en a pu donner une interprétation rationnelle. - Parmi les grenouilles sur lesquelles il a expérimenté, il en a troaTé une dont les os de la jambe présentaient un cal. Après 36 jours d'alimentation garancée, le cal était plus rouge que le reste des os de la jambe (tibia et péroné). Ceux*ci, examinés au microscope, montrent des zones rouges autour des canaux de Havers; mais, comme d'épaisses lames osseuses les séparent, ces os paraissent, à l'œil nu, tout à fait incolores. Dans le cal, au contraire, l'os est spongieux et les minces lamelles osseuses, quoique éloignées les unes des autres, sont colorées comme les zones qui circonscrivent les canaux de Havers de Tos compact. Cet os spongieux parait rouge à 1- œil nu, parce que le tissu médullaire compris entre les lamelles osseuses présente une teinte rouge.
Ces faits s'accordent avec mes propres résultats et montrent qae le régime garance ne permet pas de décider, d'après l'examen à Tœil, si les portions rougies par la garance représentent de Tos nouvellement formé ou de l'os ancien.
Les recherches les plus exactes sur la coloration par la garance sont celles de L. Schreiber^, qui. peuvent se résumer dans les termes suivants: Ce n'est pas uniquement le jeune tissu osseux en voie de formation qui it colore en rouge pendant qu'on nourrit un anitnal avec des alimenU auxquels on a mêlé de la garance. Sur les jeunes pigeons soumis pendant trois jours à pareil régime, toute l'épaisseur de Vos se colore en rouge.
Après s'être adressé au lapin, Schreiber a obtenu les résultats les plus concluants sur le pigeon, qui est l'animal de choix pour ce genre d'expériences. En ingérant à un jeune pigeon 3 gr. de garance, son squelette est coloré en rouge déjà au bout de trois heures.
1. Ceber die Krappfârbang der Froschgewebe, Archiv f. mikrotk. ÂMtomie, t. XXI. p. 357, 1882.
2. Ueber vitale Krappfârbang. Ëin Beitrag zur Kenntniss der Ernâhruog des knochens, Àrbeiten aus dem Gebiete der pathol, Anatomief etc., de BaanigarteQ, t. lY. p. 257, 1904.
ET P08T-VITALE8 DU TISSU OSSEUX. 47i(
30 grammes de garance ingérés en huit jours à un jeune pigeon donne à son squelette la teinte du vieux bourgogne. Le cartilage ne se colore pas ; les autres organes restent également incolores.
Schreiber étudiait les os frais^ les os conservés dans Valcool ou dans le formol. Le formol conserverait admirablement la matière colorante. Sur ces jeunes animaux, il fit des coupes à main levée, sans recourir aux lamelles osseuses usées sur la pierre.
Les os frais furent examinés dans la solution physiologique de sel marin. Les os fixés par les réactifs furent conservés dans la glycérine ou le baume.
Voici comment Schreiber (loc, cit,y p. 263) décrit Timage offerte par un os coloré à la suite de Tingestion de la garance : « Le tissu osseux est rosé ; de plus les lamelles osseuses périphériques et périméduilaires (Grundlamellen), ainsi que la bordure osseuse des canaux de Havers et de Volkmann présentent une teinte rouge vif. En d'autres termes, les faces externe et interne de Tos offrent chacune une strie ou bordure rouge ; rinterne est plus rouge encore que Texterne. Entre ces deux bordures rouges est compris le système de Havers où chaque canal est entouré d'un cercle rouge. La substance osseuse intermédiaire à ces bordures rouges est colorée d'une façon diffuse en rose pâle. »
Jamais les corpuscules osseux ni leurs prolongements, ni leur contenu ne sont colorés d'une façon plus intense que la substance fondamentale qui les enveloppe et les contient. Les coupes fines montrent même que les corpuscules osHuoi et leurs prolongements sont incolores.
Ces faits sont en désaccord avec les conclusions de Mandl et celles de Strelzoff et de Kastschenko, mais ils sont en rapport avec les phénomènes objectifs signalés par ces deux derniers auteurs.
Pour Schreiber ((oc. cit., p. 264), le système canaliculaire (Saftkanalsystem) de Strelzoff n'est qu'un mythe.
En résumé, Schreiber montre que la substance osseuse est colorée d'une façon intense partout où elle est en contact immédiat avec les vaisseaux sanguins (canaux de Havers, moelle osseuse, canal médullaire ou moelle osseuse de l'os spongieux). La face externe de l'os est un peu moins rouge, car les vaisseaux du périoste sont moins nombreux et plus espacés que ceux de la moelle. De ces divers points s*étend une teinte de plus en plus diffuse & travers la substance osseuse. Les cellules osseuses et leurs prolongements ne sont jamais colorés d'une façon plus vive que la substance osseuse qui les entoure. Ces faits montrent que la garance est amenée par les vaisseaux sanguins et se répand de là, par (U/fusion, à travers la substance osseuse. Ceci confirme l'observation de Kastschenko qui voyait la couche homogène, imolore, quand elle était loin des vaisseaux sanguins, et rouge lorsqu'elle arrivait au contact du canal médullaire. Donc le système canaliculaire ou du suc de Strelzoff, également admis par Kastschenko, n'existe pas.
Les résultats que j'ai obtenus sur le cobaye sont la plupart con-
firmalifs de ceux que Schreiber signale sur le pigeon. Nous différons sur quelques points secondaires. Comme Schreiber, j'ai vu les capsules el les prolongements capsulaires rester incolores, mais j'ai constaté, par contre, que le protoplasma homogène ou hyaloplasma du noyau et de la cellule osseuse prend une teinte rose analope à celle de la masse homogène de la substance osseuse.
