MOYENS D'ÉTUDE

f/examen microscopique des ganglions nerveux est hérissé de difficultés.

»Si, après avoir enlevé une petite portion de leur substance à rétat frais, on l'examine sans précautions, on ne voit qu^un corps blanchâtre, d*un aspect graisseux, granuleux, pulpeux, comme on le disait avant Ehrenberg, qui ne se laisse que difficilement traverser par la lumière, malgré son peu d'épaisseur, et dans lequel il est impossible de distinguer ni cellules ni fibres. -^ Si, en voulant Tétaler davantage, on appuie un peu trop la lame de verre, tout s'écrase, et ce ne sont plus que des gouttelettes de graisse flottant dans un liquide plus ou moins trouble. — Si Ton dilacère une petite masse ganglionnaire, on parvient à isoler quelques globules et quelques tubes de la matière qui les entoure ; mais la violence que l'on a été obligé d'exercer sur ces éléments analomiques d'une fragilité extrême a brisé l'enveloppe des

TfcXTUBE DES GANGLIONS NERVEUX PÉRIPHÉRIQUES. 131

cellules et détruit leurs connexions avec les tubes nerveux. — On a songé alors à durcir le tissu par des moyens chimiques, puis à pratiquer des coupes minces dans sa substance. Mais, quand on étudie une coupe d'un tissu composé, en grande partie, de fibres qui sont tantôt longitudinales, tantôt transversales, et tantôt obliques, il faut beaucoup de bonheur pour tomber sur des préparations qui permettent de poursuivre avec certitude la même fibre nerveuse un peu loin et jusqu'à son abouchement dans le globule ganglionnaire. Puis il arrive souvent que celui-ci a été divisé, de manière que le pôle qui porte le prolongement opposé manque.

En face de ces difficultés, il ne faut donc point s'étonner que la texture des ganglions nerveux soit restée si longtemps ipé« connue, et qu'elle présente encore des problèmes nombreux*

Dans cette étude les moyens et les méthodes de préparation ont uae large part; nous y insisterons ici.

IMIBGTION DBS NEBF8.

Une circonstance toute fortuite donna Tidée de Tinjection des nerfs. Poli, voulant injecter les vaisseaux lactés des mollusques, reconnut qa'il avait injecté leurs nerfs. II fit part de cette découverte dans les Testacea utriusque SicHiœ^ etc. (t). Reil (2), Bogros (9) et Dl. Ciruveilhier (Jk) ont i^mployç ce moyen d*étude.

Reil n'injectait que le névrilème, ce qui ne peut donner aucun réçullat heureux; mais Bogros et M. Cruveilhier injectaient les faisceaux primitifs 4es n^fs, c'est-à-dire le3 canaux du pèdfièvre (6), en ies piquant avec l'extrémité d'un tube à injection mer/K^uri/sUe.

(4) In-M. Fanne, 1794, 47^5, el 4628.

(2) foifttlUMîonttai anotomcamm fascieiÊiui primus de $UrmeU»ra nenorum.

(3) Mémoire sur la structure des nerfs, dans le héperUÀt» général éanatonù» et ée physiologie^ m-4> t IV, i'» parlU, 1827, p. %h,

(â) Anatomie descriptive, t. tV, p. 659, 4852.

(5) En 4854, un élémeni nouveau fut découveri dans ie lisiu dès nerfs, c'est le périnèTre. Bofrei et M. CruveiUiiar Tavaient coûCmuIu avec des cloisons néviUé-

Le mercure coule dans ces canaux en se frayant une voie à travers les tubes nerveux, puis vient s^épancher dans les ganglions. Ces injections ne démontrèrent point, comme Bogros l'avança, un canalcentral dans les filets nerveux, mais Texis* (ence des tuyaux du périnèvre autour d^un faisceau de tubes. L'épancbement du mercure dans la substance ganglionnaire prouvç que les tuyaux du périnèvre cessent à Penlrée des ganglions. Cet épanchement n'a pas toujours lieu, ce qui démontre que certains faisceaux nerveux passent sur les côtés des ganglions sans s'identifier avec eux.

Tels sont les faits que Tinjection des nerfs au mercure a appris sur la texture des ganglions^ et je ne crois pas que ce moyen d'éludc soit appelé à un grand avenir. Toutefois, si Ton pouvait injccler les nerfs avec une matière colorée solidifiable, on pourrail arriver à savoir d'une manière certaine comment le périnèvre se comporte vers les ganglions, ce que l'on ignore encore (i).

DE LA DILACÉRATIOM DBS GANGLIONS.

La dilacération se pratique sur des ganglions frais ou sur des ganglions qui ont macéré dans diflërents liquides.

Dans le premier cas» elle est simple ou accompagnée do l'em* ploi d'agents qui altèrent ou colorent certaines parties.

matiques. Le premier assure qu'il se prolonge jusque dans Vépaissenr des gaDglions» avec une structure canaliculée, puis se perd dans leur trame (Henie, t. Il, p. i6â- 165, 1843J. R. Wagner {HandwOrlerbuch der Physiologie, iSM, SympaUscher Nerv., Erste Abtheilung, p. 384, flg. 51^ &, c, et fig. 52, b, c), Rôtiiker (iftAroskopische Anaiomie, t. Il, 1^* partie, p. 515-516 et p. 340, fig« 107, 1850}^ l'avaient entrevu; mais ce fut M. Gh. Robin qui le décrivit le premier dans un mémoire lu à la Société de biologie le 5 août 1854 : « Dans le grand sympathique, le périnèvre fait partie des racines blanches, de ses filets ou rameaux viscéraux blancs^ ainsi que de la plupart de ceux du cou et des filets de communication des ganglions dans toute la longueur de la colonne vertébrale ; il manque dans ses racines grises ou gélatinilbrmes et dans les filets gris viscéraux. Dans le grand sympathique da cou, il enveloppe les fibres de Remak, en même temps que des tubes nerveux, n

(1) Le procédé d'injection microscopique des tubes nerveux, présentée l'Académie des sciences (1849) par MM. Coxe et Michels, procédé par lequel ils prétendent avoir mis hors de doute la nature tubuleuse des nerfs, n'est qu'un phénomène de difsolution du contenu des tubes par l'éther, le chloroforme ou l'essence de térébenthine.

DKS GANGLIONS NERVEUX PÉniPHÉRIQURS. 133

I. Dilacéralion simple des ganglions à Vétat frais. — Elle se Tait dans un liquide inerte, lel que le sérum du sang, l'eau sucrée, l'eau gomniée, la glycérine.

Lorsqu'on se propose d'examiner les éléments ganglionnaires d*un animal à sang chaud, pour ainsi dire à Tétat dévie, il importe de leur conserver leur chaleur. Pour cela il faut les placer sur un porte-objet chauffé et les maintenir à la température de 37 à hO degrés pendant toute la durée de l'observation. J'ai employé un appareil qui atteint parfaitement ce but. Il se compose d'une botte aplatie de 1 à 1 centimètre et demi d'épaisseur, de même forme que la platine du microscope, et qui peut se ûxer solidement sur elle^ les deux faces do cette boîte sont de glace, pour laisser passer les rayons lumineux ; le pourtour est un cercle de laiton qui réunit les deux rondellçs de glace, et laisse entre elles un intervalle circulaire où se trouve un petit thermomètre. Cette cavité communique avec l'intérieur au moyen do deux petits robinets vissés sur le pourtour de laiton. A chacun de ces robinets s'adapte un tube de caoutchouc aussi long qu'il sera commode à l'observateur. L^un de ces tubes communique avec un vaisseau plein d'eau chauffée à une température donnée; l'autre va se déverser dans un autre vaisseau placé sur un plan inférieur au premier. On comprend que, par le mécanisme des siphons, on peut avoir« sur la platine du microscope, dans la boite que j'ai décrite, un courant continu d'eau chaude, et que l'objet qui y sera placé pourra être maintenu à une température constante et déterminée, pendant des heures entières. Ce but n^est pas atteint avec les appareils qui chauffent l'objet au moyen de métaux bons conducteurs : ils donnent tous des soubresauts de température nuisibles pour des observations délicates.

II. Action des réactifs sur les dilacérations. — Lorsque la petite masse ganglionnaire a été dilacérée, il est utile de faire agir sur elle différents réactifs pour rendre les éléments plus apparents. Les préparations que l'on obtient ainsi ne sont bonnes que pour l'observation extemporanée, car la plupart de ces réactifs altèrent et détruisent le tissu au bout d'un temps plus ou moins long. Pour conserver les préparations, il faut s'abstenir de

leur emploi. J'indiquerai (page hh) quelques moyens de conservation.

L'acide sulfurique concentré gonfle instantanément les tubes nerveux et les globules ganglionnaires qui deviennent trèstransparents et dont les noyaux disparaissent. Les tubes deviennent ilexueux, variqueux, deux fois plus volumineux, et se présentent comme des circonvolutions intestinales entrelacées les unes dans les autres. Quelques secondes après le commencement de la réaction, on voit le contour des tubes et des globules prendre une légère teinte jaune, qui gagne progressivement leur centre *, toute la préparation présente alors une belle coloration jaune-orange, qui brunit de plus en plus, jusqu'à ce que les éléments soient complètement désorganisés et transformés en matière ulmique. R. Bucbholz a indiqué une réaction singulière de l'acide sulfiirique concentré sur les granulations pigmentaires (1863^ [). 25i) : il les colore en bleu indigo foncé, de môme que l'iode colore l'ahiidon ; et il suffit d'enlever l'acide sulfurique par un lavage pour restituer au pigment sa couleur rougeâtre primitive. On peut ainsi bleuir plusieurs fois le pigment et le rendre a sa coloration naturelle. La présence de l'acide sulfurique concentré ne modifie donc pas chimiquement ce corps, puisque, lorsqu'on Tenlève, on le retrouve intact; mais en le pénétrant, il ne fait que changer sa propriété de laisser passer la lumière rouge, de manière à ne le rendre diaphane qu'aux rayons bleus.

V acide chlor hydrique fumant agit comme l'acide sulfurique concentré, mais sans produire de coloration.

Vaddis nitrique concentré rélràele immédiatement la paroi propre des globules et des tubes, en chassant au dehors la moelle qu'ils contiennent, sans attaquer de prime abord le cylindre -axe; au bout de trois ôu qudtrë heures, les énVeloppes, le contenu des globules et le Cylindre-axe sont jaunis. L^acîde nitrique est loin de donner d'aussi bon^ résultats que les acides sulfurique et chlorhydrique pour l'étude immédiate des éléments ganglionnaires.— Lorsque après l'aclion de Pacide iiitHque fumant, on ajoute une goutte d'une dissolution de potasse caustique, le contenu des globules et l'aie central se dissolvent, la gaine médul-

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laire est saponifiée par la potasse, et il ne reste plus que les enve* loppes jaunies.

Les acides minéraux étendue j les acides phoiphorifue, hydrofluosUidque^ arsénieuXi oxalique^ gallique^ tartrique^ ont tous des réactions analogues^ à dds degrés divers, à celle de Tacide acétique que nous allons étudier.

V acide acétique concentré gonfle les éléments lamineux et les transforme en gelée; par suite, toute la préparation devient plus transparente et plus facile à observer. lies noyaax embryoplastiques^ les noyaut des gaines des globules et des tubes, les noyaux semés dans la substance amorphe fondamentale, deviennent trèsapparents. Le contenu des globules devient plus clair et les contours de son tioyau se dessinent très*nettement«

Les solutions concentrées des basa caustiques^ soude^ potasse^ ammoniaque^ gonflant et pâlissent les éléments ganglionnaires dans les premiers instants de leur action ; ils fournissent alors un excellent moyen d'étude; mais il faut se hâter de les observer, car leur pâleur augmente de plus en plus, et leurs contours finis* sent par se confondre et disparaître.

ie ferai remarquer qu^on face de tous las réactifs énergiques que je viens de passer en revuci les globules ganglionnaires résis^ teht moins que les tubes nerveux ; ils semblent constituer des organes plus délicats^ qui sont attaqués et détruits les premierfe.

Le bichlorure de mercure^ Valcool, durcissent Tenveloppe des globules, en rétractant leur contenUi qui devient plus granuleux, plus foncé.

Lorsque l'on a enlevé l'humidité de la dilacération au moyen d'une goutte d'alcool absolu qu'on laisse en partie évaporer, si l'on ajoute une goutte d'éther, de chlùroformêf A^essence de térébenthine ou de benzine^ on voit les globules et les tubes se gonfler et leur contenu devenir très-transparent, parce que les matières grasses, qui étaient devenues plus ou moins opaques en se solidifiant, sont dissoutes. La créosote agit d'une manière analogue, mais elle racornit trop les éléments, pour être utile â l'étude.

Les moyens que l'on peut employer pour colorer les dilacéra-

ISd J. F. B. POt.ULLON. — ÉTUDES SUR L4 TfilTDIlE

lions sont la solution aqueuse et iodurée de Tiode^ la teinture alcoolique d^iode, Tacide chromique, qui donnent en peu de temps une coloration jaune aux substances albuminoîdes; la solution ammoniacale de carmin, la fuchsine dissoute dans la glycérine ou l'eau alcoolisée, etc., qui leur donnent une coloration rouge; la solution alcoolique d'aniline, qui leur donne une coloration bleue. Je ne fais que mentionner ici ces agents, sur lesquels je m'étendrai un peu plus loin (p. 69) .

IIL Dilacération après macération dans différents liquides. — L'expérience montre bientôt que la dilacération des ganglions est favorisée par leur macération dans certains liquides.

Gûnther conseille de faire macérer les ganglions dans l'eau jusqu'à ce qu^ils commencent à se putréfier. Le contenu des tubes nerveux, qui s'était d'abord opacifié, redevient quelquefois clair et transparent sous l'influence du ferment putride, et les éléments 9ont plus faciles à dissocier.

La cuisson peu prolongée dans l'eau bouillante, en amenant la coagulation des substances albuminoîdes, peut donner quelques bons résultats. Il ne faut pas toutefois beaucoup compter sur ce moyen, parce que cette coagulation se fait toujours si irrégulièrement que le contenu du ganglion se détache en débris.

J'ai employé pour faire macérer les ganglions un grand nombre de solutions plus ou moins étendues de bases ou d'acides, sans avoir constaté des avantages bien réels dans mes dilacérations. Au contraire, l'acide acétique et l'acide chromique sont des moyens précieux dans ces sortes de recherches; mais il faut s'en servir dans un état de dilution très-grand, de peur de trop ramollir et de trop dissoudre les substances albuminoîdes avec Tacide acétique ; de trop les durcir et de trop les ratatiner avec l'acide chromique. Une dissolution de ^ à ^ d'acide acétique, et une dissolution dix fois moins concentrée d'acide chromique, m'ont paru les plus utiles. On laisse les ganglions pendant deux ou trois jours dans de tels liquides; au bout de ce temps, la dilacération se fait mieux, et les détails des éléments anatomiques sont plus faciles a observer. Il faut noter qu'on ne doit faire macérer dans des solutions si étendues que de très^petits gan-

DES GANGLIONS NKClYEt'X PÉniPHÉRIQUES. 437

glions ou de très^petites portions des gros ganglions des noam* mifères.

J'ai aussi employé avec avantage le procédé de macération conseillé par J. Arnold (1865). Partant de ce fait que Tacide acétique rend le (issu conjonclif transparent, et que Tacide chromique durcit les éléments anatomiques, il arrive a combiner leur action. Il met le petit ganglion dans un verre de montre, où se trouve A ou 5 centimètres cubes d'une solution à ~ d'acide acétique; il l'y laisse quelques minutes, puis il le transporte dans un autre verre de montre plein d'une solution d'acide chromique à — ^. Le temps de l'action de Tacide chromique varie entre douze et quarante-huit heures.

J'arrive au moyen qui m'a paru le plus utile dans l'étude des éléments ganglionnaires, c'est leur digestion dans le suc gastrique. Ce moyen avait déjà été préconisé par M. E. Faivre, dans ses recherches sur le système nerveux de la sangsue; je l'a; employé chez les mammifères avec le plus grand succès.

On peut faire agir le suc gastrique dans deux conditions, à froid et à chaud.

A froid, son action prolongée pendant cinq ou six heures seulement est peu différente de celle de l'acide acétique étendu. Mais, si on le laisse agir pendant vingt à vingt-quatre heures, le tissu lamineux du ganglion est dissous, et celui-ci se sépare en débris par une légère agitation du vase qui le contient. Si l'on examine ces débris au microscope, on constate que la paroi propre des tubes et des globules a été dissoute dans la majorité d'entre eux : ici les tubes ne présentent que le cylindre-axe complètement dépouillé d'enveloppe et semblable à de petites tiges de verre plus ou moins flexueuses ; là une portion de gaine médullaire reste encore autour du cylindre-axe, puis s'interrompt pour se montrer plus loin ; en un mot, la gaine propre semble digérée la première, et le cylindre-axe reste encore intact quand son enveloppe médullaire est énergiquement attaquée (pi. II, Gg. 0 et 12), Le contour des globules est devenu plus granuleux, ce qui empoche de voir le noyau aussi distinctement; ses bords sont en général irréguliers, parce que la désagrégation de ses molécules se fait

138 J, F. B, POLAILLON. — ÉTUDB8 SUa LA TEXTURE

d'une façon plus active dans un point que dans un autre. Il nage dans le liquide de la préparation, où il roule facilement comme une pciite sphère, et se retourne en tous sens. C'est alors que Ton peut Voir, sur la surface de presque toUâ.les globules, de petits appendices tout à fait semblables aux cylindres-axes qui se trouvent isoléâ dans d'autres points; qu'on ne peut s'empêcher d'ajouter par la pensée ces cylindres-axes à ces appendices, et qu'on II la conviction d* avoir devant les yeux des globules polaires (pL II, flg. 0). Tous les globules ont des traces de cylindre-âxe ; ^ur la plupart on peut en compter deux, souvent un plus grand nombre. Aucun réactif, aucune dilacériition ne donne des résul* tats aussi nets chez les animaux supérieurs, oh Tétude des été« triënts gangliônnalfes est si difficile.

A chaud, c'est-à-dire à la température du corps, l'action du suc gastrique est beaucoup plus rapide: au bout d*une heure, le tis^u est déjà gonflé; au bout de deut ou trois heures, il est désogrégé au point que je viens de décrire, li faut toujours que le suc gastrique soit proportionné à la ttiâsse du tissu : pour cinq ou six petits ganglions rachidiens ou sympathiques de rat, j'enn ployais deux gouttes de suc gastrique. Je les renfermait dans un petit tube de verre bouché, et lorsque je voulais accélérer la i*éaction p^r la chaleur, je conservais le tube sdus Faisselle j^endiint le temps voulu, comme Spatlanzani le faisait pouf se^ digestions artiflcielles.

V a'^t-il Une mani^.re spéciale de faire les dildcérdtiori^ de gongllon ? — Évldethttient non. Le scUl précepte à observer, fc'esi de dilacérer en parties aussi Qnes que possible, sous lé microscope sirtiplc ; mais il est indiflerent de le faire avec plus ou moins de précautions, parce que c'est toujours le hasard; et non le calcul, qui peut conduire à une préparation intéressatile.

Les dilacérations sont très-^uliles pour étudier les éléments isolés d'un tissU ; mais, lorsqu'il s'agit de déterminer leur arraii'gertient, il faut s'adresser à d'autres moyens.