DE LA MÉTHODE DES COUPES UIGROSGOPIQUES

La texture des ganglions s'étudie au moyen de [eoupes trèsminces, pratiquées dans différents sens au sein de leur substance. Pour obtenir des coupes instructives d*un organe, il faut employer différents procédés que nous allons énumérer, puis décrire le plus brièvement possible. Il faut : 1^ durcir Torgane; S"* le fixer dans une position déterminée; S"* le couper; à"* soumettre les coupes aux réactifs chimiques et les colorer. Enfin, dans un dernier chapitre, nous dirons quelques mots des moyens de conservation qui s^appliquent aussi bien aux préparations dilacérées qu'aux coupes microscopiques.

I. Durcir les ganglioni. — Une coupe très-mince ne peut se faire que sur des organes durcis. Quelques ganglions offrent, lorsqu'on les prend immédiatement après la mort, une consistance assez ferme pour que le durcissement ne soit pas indispensable ; tels sont : le ganglion cervical supérieur du veaii, les ganglions rachidiens de la plupart des mammifères, etc. ; mais les ganglions dd ()lexus solaire, les ganglions crâniens, etc., doivent nécessal* rement être rendue plus diirs.

Jacobson parait ètt*e le premier qui ait utilisé l'acide chromique pour l'exameh microscopique du système nerveux, fiannover, qui avait étudié sous Sd direction, en vulgarisa remploi. Pour durcir les ganglions nerveux, bn commence par les plonger dans une solution très-légère, 1 partie d'acide chromique pour 100 parlies d'eau distillée ; oh renouvelle cette solution tons les jours, en augmentant progressivement la dose de Facide, jusqu'à ce qu'elle en contienne A ou 6 parties pour 100 d'eau. En trois ou quatre jours les petits ganglions sont assez durs pour être coupés ; vingt jours ou un mois suffisent pour les plus gros. Quand on emploie Tncide chromique comme moyen durcissant, il y a un écueil à éviter, c*est de trop laisser durcir le ganglion, qui devient cassant, à cassure granuleuse, et qui se pulvérise sous l'instrument tranchant : son tissu est comme brûlé par l'acide.

140 J. F, B. POIAILLON. — ÉTUDES SUR LA TEXTUUE

Au lieu d*acide cbromique, on [)eui employer le bichromate de potasse dans la solution suivante :

Eau distillée àSO grammes.

Bichromate de potasse '. 10 —

Sulfate de soude • 2 «-

M. Vulpian a signalé (1856) \e perchlorure de fer comme moyen de conserver et de durcir les pièces du système nerveux. 11 conseille de commencer par une solution au 20* ou au 30% pendant un mois ou six semaines, puis de concentrer la solution jusqu'au 12'' environ d'un perchlorure de fer à kh"". Celte solulion, que j'ai employée souvent, est très-favorable pour durcir les ganglions, et surtout pour les conserver presque indéfiniment, sans que Ton ait à craindre qu'ils s'altèrent, comme cela arrive souvent lorsqu'on les laisse trop longtemps dans une solution rbromique.

L'alcool absolu pur ou étendu d'eau distillée par moitié ou par tiers est un moyen de durcissement très-ex péditif; un jour ou deux suffisent.

La congélation vantée par M. Roudanovsky (1865) doit donner de très-bons résultats. Je n'ai pas eu occasion de m'en servir.

IL Fixer le ganglion dans une position déterminée. — Lorsque les ganglions, qui ne sont point naturellement durs, ont acquis une consistance assez ferme pour résister au tranchant du rasoir, il faut les fixer solidement, de manière que celui-ci puisse les couper précisément dans le sens qui semblera le plus avantageux pour rétude, soit en long, soit en travers. On comprend que des organes aussi ténus que la plupart des ganglions ne sont pas faciles à manier, si Ton n'en grossit pas le volume, ou si Ton ne les accole pas à des corps saisissables. Pour atteindre ce but, voici les procédés que j'ai employés. Après avoir retiré le ganglion a couper de la solution qui a servi à le durcir, je le dispose en étendant ses branches sur du papier buvard, où je le laisse sécher à Tair libre pendant une heure ou deux, Lorsque sa surface est bien privée d'humidité^ je le trempe dans la paraffine fonduo, dont la température de fusion (42**) n'est pas assez élevée

DES GANGLIONS NEHVEIX PIÈRIPHÉRIQIES. lâl

pour en altérer la substance ; puis je le retire immédiatement pour laisser solidifier à sa surface une première couche de paraffine. En trempant ainsi le mémo ganglion à plusieurs reprises, j'obtiens bientôt un petit bloc de paraffine contenant mon ganglion, dont je connais la position exacte, c'est-à-dire oii sont ses faces, ses extrémités, les points d'émergence de ses principales branches. Ce petit bloc de paraffine est encore Irop petit pour èlre tenu facilement entre les doigts ; je le fixe alors au moyen d'un peu de la môme substance fondue suir un bouchon de liège, ou je le dispose dans la cavité d'un tube de laiton, et j'y coule autour du ganglion une certaine quantité de paraffine fondue. Après la solidification de celle-ci, je retire du tube une petite bougie contenant à Tune de ses extrémités le ganglion nerveux disposé dans le sens précis où je veux pratiquer mes coupes.

Au lieu de paraffine, on peut se servir de divers encollages (que Ton trouve à acheter chez M. Bourgogne, à Paris), au moyen desquels on colle les ganglions à couper sur du liège ou sur de petits morceaux de bois tendre. Il faut toujours appliquer sur l'objet plusieurs couches de ces encollages (1), lesquelles demandent plusieurs heures, quelquefois plusieurs jours pour sécher ; tandis que la paraffine est immédiatement solide, et que mon procédé a au moins Tavantage d'être expéditif.

in. — Les coupes que Ton peut faire à main levée^ suffisantes pour l'étude de la plupart des tissus, sont souvent bien défec^ tueuses pour celle du lissu ganglionnaire. En eflet, il s'agit nonseulement d'avoir une tranche très-mince, mais encore de l'avoîi* souvent dans une grande étendue, afin qu'elle comprenne les nerfs qui s^irradient du ganglion, et que Ton puisse suivre, si c'est possible, la marche des tubes nerveux entre les globules ganglion* naires et leur abouchement avec ces éléments anatomiques. Or, il est presque impossible, quelque habitude que l'on ait de ces sortes de préparations, d'exécuter à main levée des coupes aussi parfaites quMt le faudrait. Pour obvier à cette imperfection delà main, j*ai fait construire, par MM. Robert et Colin, un microtome

(1) Tous ces encollages ont pour base des mélanges de solutioiu coneentrées de sucre ou de gommé avec de la gélatine dissoute.

1A2 J. F. B. POLillLLONt — ÉTUpES SUR LA TEXTURE

qui ne diffère de celui de M. FoUin que par la facilité ^vec laquelle je fixe dans son inlérieur Tobjet à couper. J'ai pprlé de ma manière de faire de petites bougies cylindriques de paraffine ayec un ou plusieurs ganglions pris dans cette substance. Le calibre des moules de laiton qui servent à les fabriquer est égal au calibre du tube de mon microtome» de sorte que les bougies entrent exactement dans ce tube. L^une de leurs extrémités (celle qui ne contient pas le ganglion) repose sur une sorte de piston de cqivre fixé à la yiç micrométrique, piston qui monte avec cette vis, et par suite pousse le cylindre de paraiBnei dont Tautre extrémité (celle qui contient le ganglion) arriyjs au piveau d'un plan d'acier poli. Supposez que je fasse glisser une lame bien affilée sur ce plan» je couperai tout ce qui le dépaçser^; si je fais monter la vis microniétrique d'un trentième ou d'qn cinquantième de millimètre» l'extrémité de la bougie fera saillie au-dessus du plan d'une quantité correspondante» et si je rase ce plan avec la lame d'un couteau» j*aurai une coupe de la paraffine et de l'objet qu'elle contient, d'une épaisseur égale au vingtième, au tjrentjème ou au cinquantième du miUimètref La parafGne se casse et se pulv/érise» mm la coupe 4e Tobjet reste. — Or) peqt remplacer 1^ cylindre de paraffine p^r un petit cylindre de bois tendre de même dia* mètre ; à Tune de ses extrémités on fixe le ganglion par un encollage» on place jput le petit système dans le microtonie» pujf on pratique les coupes comme je viens de le dire.

J*ai aussi étudié qi^elques coupes de ganglions que j'ai fait exécuter par M. Bourgogne» dont Thabileté dans ce genre djç préparation est de réputation européenne.

IV, Emploi des réactifs et des moyens de coloration. — Une fois la coupe microscopique obtenue, on la transporte immédiatement dans un peu d'eau distillée^ où on la laisse tremper douze ou vingt'-quatre beures. On la soumet ensuite aux réactifs chimiques et aux agents de coloration pour en faciliter Tétude.

ie ne répéterai point ici ce que j*ai déjà dit de Taction des agents chimiques (page 133)» que Ton combine et que Ton diversifie de mille manières. Ainsi Ciarke a trouvé qu'un liquide composé d'une partie d'acide acétique et de 8 parties d'aloool

PES GAKGUONS NEav^UX PÉaiPHÉaiQtES. H^

jouit de la propriété de rendre transparents les coupes du système nerveux» Molescbott a trouvé une liqueur analogue, etc. Je DQ veux indiquer que quelques moyens de poloratipu*

Les pièces qui ont été durcies dans TAcide cbromique sont légèrement teintes en jaune, et peuvent sd passer d^autrp coloration.

Les substances colorantes habituellernent employées sont: I>aif iodée, h ti^inture d'iode, une solution d'iodf) d^ns Tficide jcidhy* drique, la solution ammoniacale de carmin, la fuchsine clisj^ute dans Teau alcooli^ om apidMiéa par Tacide acétique Qu dane la glycérine, Taniline discute d^oi» l'eau alcopli^p^. Le procédé 4^ coloration est le même pofir toute?. Lorsque ]^ cpMpea ont trompé dan» l'eau distillée, on les plonge daqs le liqujîde cplori^ni, où pn tes laisse eo général toute une journée* L'ef périi^npe apprend bien vite i ne ise servir que de liqnites peu chargés du'principe colprnntf parce que 1^ «a^ière^ prgwûqui^ f(?^ot^ le Q^nt en grande abondance, et se pp)pjrexH ^vec ^^ intensité plus nuisible qu'utile à l'observation.

J'ai essayé de colorer des préparations de ganglions avec des solutions très-étendues de nitrate d'argent (1 partie pour 400 ou 800 parties d'eau distillée), méthode préconisée par Recklinghau* sen pour d'autres tissus, sans en avoir retiré le moindre avantage.

Lorsque les ganglions ont été durcis dans une solution de uer* chlorure de fer, on peut les colorer par un procédé bien simple que je crois avoir employé le premier, et qui m'a donné d'exceU lents résultats. On laisse tremper les coupes pendant au moins une journée dans Teau dislillée, que l'on renouvelle souvent, aOn d'enlever la plus grande partie du composé ferrique qui les im« bibe; puis, les ayant transportées dans un verre de montre plein d'eau distillée, on y laisse tomber une goutte d'acide gallique. Au bout de quelques instants, la réaction commence : les bords de la coupe prennent une teinte d'un noir bleuâtre, et au bout d'une heure toute la coupe a la même coloration. Lorsqu'on l'examine au microscope, on voit que, si les détails des éléments ana* forniques sont un peu masqués, les globules et les tubes ont pris une couleur noirâtre qui leur donne une netteté de contour et un

relief surprenants. Mais ce qui est surtout bien remarquable, c'est que les éléments nerveux seuls sont colorés, et qu'ils se présentent comme disséqués au milieu du tissu lamineux et de la matière amorpbe d'interposition, qui sont restés incolores. Ce fait peut sans doute s'expliquer ainsi : a la suite de lavages successifs dans Teau distillée, les éléments nerveux ont la propriété de retenir plus longtemps la solution de perchlorure de fer qui les imbibait, etFacide gallique, intervenant, les colore sans agir de la môme manière sur le tissu lamineux et la matière amorphe qui ont abandonné leur sel ferrique. C*est d'après une coupe qui avait été colorée par ce procédé que j*ai dessiné la figure 11 (pi. II). En employant ce procédé, il y a un écueil à éviter, c*est d'avoir une coloration noire trop intense qui ne permet plus de rien Jis^ tinguer ; aussi, pour peu que la coupe ne soit pas très-mince, pour peu qu'on ne Tait pas fait dégorger longtemps dans Teau distillée et qu'on ne Tait pas soigneusement lavée, il vaut mieux avoir recours à un autre moyen de coloration.