Technique du dosage de la folliculine dans le sang

La technique employée a été celle du Professeur Simonnet dans le laboratoire duquel ces dosages ont pu être effectués, technique dérivée elle-même de celle utilisée en dernier lieu par Frank et Goldberger.

1° LE PRÉLÈVEMENT. — Le prélèvement de 30 cm° de sang au minimum est effectué par ponction veineuse à la période où la folliculinémie est la plus élevée, c’est-à-dire dans les quelques jours qui précèdent les règles.

2° PRÉPARATION D'UN EXTRAIT A PARTIR DU SANG PRÉLEVÉ. — Le sang est reçu dans 5 volumes d’alcool à 95°. Le coagulum séparé par filtration est repris par deux volumes d’alcool et est soigneusement exprimé. Les extraits alcooliques réunis sont concentrés par distillation à basse température. Leur résidu est épuisé par l’éther. L’extrait éthéré, desséché sur sulfate de sodium anhydre, est concentré à petit volume et incorporé à une quantité convenable d’huile d'olive stérile. L’éther est chassé par évaporation. On obtient ainsi une solution huileuse injectable dont 1 cm* correspond par exemple à 20, 50 ou 100 cm® de sang, la folliculine étant à peu près également répartie dans le sérum ou le plasma et les globules.

3° LE TITRAGE BIOLOGIQUE.

A. — Principe du titrage. — Il repose sur la propriété œstrogène de la folliculine, caractérisée chez la rate castrée par l’apparition de la kératinisation de l’épithélium vaginal, le test d’Allen et Doisy.

En effet, chez la rate ovariectomisée (ou la souris), les modifications de l’épithélium vaginal sous l'influence des variations du taux de la folliculine présente dans l’organisme ne se produisent plus. L'administration de folliculine en quantité suffisante détermine la réapparition des cellules kératinisées dans le fluide vaginal et la disparition des leucocytes, reproduisant l'aspect cytologique de l’œstrus physiologique et caractérisant la présence de la folliculine injectée ou de son existence dans le produit administré.

C’est une réaction de seuil, le principe du dosage consistant à rechercher quelle est la plus petite quantité de substance employée (extrait en l’occurrence), qui provoque la réaction œstrale. La folliculine dosée représente ici une entité physiologique et non une individualité chimique. De très nombreuses substances possèdent le pouvoir œstrogène, qui, toutes, renferment un noyau commun phénanthrène ; mais les activités æstrogènes de ces substances varient de 1 à 10.000, suivant leur structure dont la moindre modification entraîne

des différences d’action parfois considérables. C’est ainsi que l'hormone mâle ainsi que la progestérone qui, toutes deux, contiennent ce noyau phénanthrène, sont dépourvues, même à haute dose, de tout pouvoir œstrogène, tandis que la folliculine proprement dite, l’hydrate de folliculine, la di-hydrofolliculine donnent la réaction œstrogène à des doses de l'ordre du millième de milligramme. Elles sont donc d’un ordre d'activité tel qu’il permet d’éliminer les autres corps œstrogènes qui pourraient intervenir dans le dosage ; le coefficient d’erreur, par suite, devient minime. Seule la nature chimique, l’unicité ou la multiplicité des folliculines contenues dans l’extrait ne sauraient donc être précisées au cours de ces essais pharmacodynamiques.

B. — Facteurs conditionnant l'exactitude du dosage. — Comme tous les titrages biologiques, le titrage de la folliculine, pour comporter un degré de précision suffisant, doit s’assurer de différents facteurs qui en conditionnent l’exactitude.

— Il est nécessaire d'utiliser des animaux éprouvés de temps à autre pour éliminer le facteur sensibilité individuelle (hyper ou hyposensibilité) en même temps que les variations de la sensibilité. Ces animaux doivent être entretenus assez régulièrement par l'injection de folliculine donnant un œæstrus artificiel pour suppléer à son absence consécutive à la castration et éviter la diminution de la sensibilité qui s’observe normalement de ce fait.

— L'alimentation sera suffisante, suffisamment riche en protéines et en vitamines A et B. Les animaux seront placés dans de bonnes conditions de luminosité et de température. Tous ces éléments sont importants, mais faciles à obtenir.

— Quant à l'espèce animale utilisée, c'est pour nombre d'auteurs et pour nous-même le rat femelle. Mais si le lapin, le cobaye ne peuvent être employés, la souris peut l'être par contre, au même titre que Île rat.

En raison des üifférents animaux utilisés pour les dosages, il est facile de comprendre que les auteurs ne puissent s’en-