C. — Technique du dosage

Elle comprend : la préparation de l’animal-réactif, le dosage proprement dit.

1° La préparation de l’animal-réactif.

a) L'animal employé. C’est le rat femelle adulte de 100 à 120 grammes. L’ovariectomie est pratiquée sous anesthésie à l'éther par la voie abdominale médiane. L'intervention doit être complète, évitant soigneusement l’implantation de fragments ovariens dont la présence rendrait l’animal inutilisable pour le dosage.

b) Le contrôle de l’animal. 11 peut être effectué 10 jours environ après l’ovariectomie. Le fluide vaginal est alors prélevé à l’aide d’une anse métallique stérile. L'examen est pratiqué à l’état frais entre lame et lamelle, après coloration par le bleu de méthylène et sous grossissement de 300 à 400. Cet examen doit révéler la présence de leucocytes plus ou moins nombreux et l’absence de cellules épithéliales et de cellules kératinisées anucléées. Si ce résultat est obtenu, l’animal est susceptible d’être utilisé. Sa sensibilité à la folliculine doit cependant encore être éprouvée auparavant.

c) Celte recherche de la sensibilité de l'animal à la folliculine est pratiquée avec la folliculine standard. Les animaux au repos recoivent la folliculine en trois injections égales, séparées par des intervalles de temps identiques et réparties sur une durée totale de 9 heures au moins. Les frottis vaginaux sont prélevés le deuxième et le troisième jour, à raison de deux prélèvements par jour.

Deux réponses au moins sont nécessaires pour étalonner l’animal, l’une négative dont nous avons vu les caractères, l’autre positive : aspect grenu du prélèvement vaginal du fait du caséum, présence à l’examen microscopique de cellules épithéliales et kératinisées avec absence totale ou relative de leucocytes. Il suffit qu’une fois au cours des examens on observe ce type de réaction pour que l'épreuve soit qualifiée de positive. L'existence d’une réaction plus prolongée indiquerait qu’un excès d’hormone a été administré.

2° Le titrage de l'extrait.

Le dosage de la folliculine dans le sang, le matériel d’extraction étant réduit puisqu'il porte sur une moyenne de 30 cm° de sang, ne comporte en général qu’un essai. L'idéal, évidemment, serait de pouvoir multiplier les essais, mais la quantilé de sang alors nécessaire serait excessive et difficile à obtenir des malades auxquelles nous nous sommes adressé.

L’injection de l'extrait huileux est pratiquée dans les mémes conditions de technique que les injections de folliculine standard au cours de l’étalonnage de l’animal. Les prélèvements sont également effectués de façon comparable : deux fois par jour le deuxième et le troisième jours, une fois par jour seulement pendant les jours suivants. Tous les éléments de détail doivent être strictement observés pour qu’on puisse accorder une valeur aux dosages ainsi pratiqués.

Les résultats, nous le répétons, sont formulés dans ces conditions en U.R. Pour un animal étalonné dont l’œstrus apparaît pour une quantité de folliculine déterminée, l'essai unique pratiqué avec l’extrait à titrer peut donner une réponse négative ou bien positive ou encore prolongée. Dans ces différents cas on dira que l'extrait expérimenté chez tel animal étalonné contient par exemple : moins de 30 U.R. par litre de sang en cas de réponse négative, 30 U.R. en cas de présence positive, plus de 30 U.R, si la réponse est prolongée.

Ce sont là les seules précisions permises. On aimerait évidemment pouvoir faire et pouvoir dire mieux, mais, encore une fois, il existe là une impossibilité matérielle du fait de la quantité de sang relativement modérée sur laquelle on peut expérimenter.