PRE

on peut se rendre compte de cette pénétration : en examinant une goutte de sang prise à la queue, on y constate de rares lrypanosomes. Ceux-ci augmentent de nombre pendant plusieurs heures (4 à 5 en moyenne), puis leur nombre décroît lentement. Les trypanosomes cessent d’être visibles dans le sang plus rapidement que dans le péritoine. La disparition totale des parasites a lieu entre 36 et 48 heures. LAVERAN et Mesniz, avant nous, ont, à ce sujet, fait des constatations analogues. « Après avoir injecté, disent-ils, du sang riche en trypanosomes dans le péritoine des souris blanches, nous avons vu que les trypanosomes se retrouvaient dans le péritoine et dans le sang après 24 heures; au bout de 48 heures, ils avaient loujours disparu (1). »

Lorsqu'on inocule une dose faible, 1 à 2 gouttes de sang, pour se rendre compte de la présence des trypanosomes dans le torrent circulatoire, il faut sacrifier les souris, aspirer le sang du cœur et le centrifuger : on trouvera des trypanosomes dans le culot de centrifugation.

Bref, que l'on injecte une dose forte ou faible, la pénétration des trypanosomes dans le sang a toujours lieu; de telle sorte que, pour résoudre le problème de limmunité naturelle de la souris, il faut se demander ce que devient le T. Lewisi, non seulement dans le périloine, mais encore dans les viscères.

Lorsqu'on ponctionne, à intervalles rapprochés, le péritoine d’une souris inoculée, on constate très nettement, lors des deux ou trois premières ponclions, que les trypanosomes sont tous ou presque tous entièrement libres et dans un parfait état d’intégrité. Roupsxy (2) a vu, à l'état frais, des mononucléaires de souris phagocyter des trypanosomes, et cela par le mème processus que Laveran et Mesniz ont fait connaître chez le rat immunisé et chez le cobaye. Nous avons, de notre côté, fait semblable constatation. Mais il faut ajouter que la phagocytose se constate rarement. Et c'est bien là qu'est la difficulté du problème. Le plus souvent, on n’observe que des trypanosomes fixés par leur extrémité postérieure sur les leucocytes. Ceux-ci

(4) Loc. cit. F (2) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 6 mai 1914, t. LXX, p. 693.

on.

ne réagissent pas à l'attachement des protozoaires et l'on peut, pendant des heures, observer des trypanosomes piqués sur des mononucléaires, sans que la moindre réaction se manifeste de la part du globule blanc. Les leucocytes de la souris, placés entre la lame et la lamelle, 4 /a température du laboratoire, se trouvent dans des conditions très désavantageuses pour phagocyter le T. Lewisi. Nous avons vu qu'il en était tout autrement avec les flagellés des cultures. Pour que la phagocytose du Levist puisse se, faire in vitro, il faut qu'elle débute dans le péritome et qu'elle soit déjà en partie faite. De là, sans aucun doute, la difficulté que l’on éprouve à la constater. Comme l'acte phagocytaire est difficilement visible, dans l'espoir de mieux le rencontrer, nous n'avons pas hésité, ainsi que l’a fait MassaGLrA chez le cobaye, à multiplier les ponctions péritonéales. A partir d'un nombre de ponctions, variable suivant les souris, nous avons constaté la présence de {rypanosomes détruits en dehors des leucocytes. Dès lors, il fallait se demander si la disparition des parasites est due à la phagocytose ou à l’action trypanolytique du liquide péritonéal, ou encare à ces deux processus réunis. Après de nombreuses recherches, nous avons la conviction que la phagocytose est le seul processus normal de destruction des trypanosomes. Par la répétition des ponctions, on met le péritoine dans un véritable état pathologique. On sait bien aujourd’hui qu'il suffit d’une simple piqüre de la paroi abdominale pour amener, durant plusieurs heures, une leucopénie plus ou moins manifeste. On ne s'entend pas d'ailleurs sur Je déterminisme de cette leucopénie.

Pour les uns, du fait seul de la piqüre, il y a destruction d’un nombre plus ou moins considérable de leucocytes; pour les autres, la piqûre amène la transformation du fibrinogène du liquide péritonéal en fibrine; le réseau de fibrine, en se constituant, enserrerait dans ses mailles plus ou moins de leucocytes. Quoi qu'il en soit, il parait établi que toute piqûre de la paroi du ventre, si minime soit-elle, surlout chez un animal aussi petit que la souris, peut entraîner des lésions appréciables. Nous pensons que celles-ci sont constituées, pour une grande part, par des altéralions leucocytaires. Nous avons, en effet, constaté sur les frottis de liquide péritonéal, prélevé

après plusieurs piqûres abdominales, des leucocytes avec des noyaux en karyolyse, réduits à l’état de boules régulières, mais d'inégale grosseur, répandues dans le cytoplasme : témoignage histologique indéniable de la souffrance du péritoine. Grâce aux altérations des leucocytes, les substances trypanolytiques contenues dans les phagocytes diffusent dans le liquide péritonéal. Cette hypothèse se renforce du fait que nous avons assisté x vitro à la destruction extracellulaire des trypanosomes. En voici, entre plusieurs autres, un exemple des plus convaincants : le 22 mars 1911, nous inoculons, dans le péritoine d’une souris neuve de 20 grammes, un centimètre cube de sang citraté d'un jeune rat très richement infecté. Treize heures après, le sang de la souris contient quinze à vingt parasites par champ (oculaire compensateur n° 4, objectif Sriassnie n° 5). Nous en mettons une goulte entre lame et lamelle que nous lutons à la paraffine. Nous. traitons de même une goutte de liquide péritonéal de ponction. Les trypanosomes, sitôt qu'ils viennent d'être retirés de l'organisme, sont tous, sans exception, très mobiles. Les préparations, de contrôle, au Giemsa, montrent qu'il en est bien ainsi et que les trypanosomes sont en parfait état d'intégrité. Au bout de dix minutes, manifestement au bout d’un quart d'heure, alors que les flagellés contenus dans la goutte de sang conservent leur aspect normal, les trypanosomes contenus dans le liquide péritonéal montrent des altérations de plus en plus accentuées. Celles-ci débutent à certains endroits de la préparation; puis, elles s'étendent et se généralisent. C’est d'abord une paralysie notable du trypanosome; le flagelle et la membrane ondulante se mouvant si paresseusement qu'il devient incapable de se déplacer. Finalement, c'est l’immobilité complète. Alors, le protoplasme devient clair, vitreux ; il montre des vacuoles d'inégale grosseur, de plus en plus nombreuses. Le contour du trypanosome finit par ne plus être reconnaissable ; on ne voit plus que le flagelle auquel adhère Je blépharoplaste. Bref, le trypanosome a littéralement fondu, en l’espace de quinze à vingt minutes, sous l’œil qui l'observait. La destruction des trypanosomes s’échelonne pendant plusieurs heures. Au bout de six heures, presque tous les trypanosomes sont détruits.

NC ES

Les trypanosomes, contenus dans la goutte de sang, gardent, au contraire, leur intégrité première. Rounsky (1) a observé, de son côté, que « le sérum sanguin de la souris blanche constitue un milieu favorable pour la conservation in vitro du T. Lervisi ».

Ainsi, en conservant, entre lame et lamelle, le liquide péritonéal de souris infectées, les trypanosomes, très mobiles au sortir de l'organisme, peuvent se détruire complètement en l’espace de quelques heures et se réduire à l'appareil flagellaire.

Il faut, en conséquence, se résigner à ne ponctionner qu’une fois le péritoine des souris et à faire, silôt après la prise, des frottis avec le liquide péritonéal de ponction. Le seul inconvénient de cette technique est de multiplier beaucoup le nombre des animaux mis en expérience. On devra également ne tenir compte que des préparations d’une parfaite coloration : de la sorte, on constate que les trypanosomes retirés des péritoines des souris, quel que soit le moment de la ponction, sont en parfaite intégrité. Par contre, sur ces mêmes frottis, on rencontre, par lame, deux ou trois figures indéniables de phagocytose.

Il est probable que la digestion des trypanosomes se fait très vite; la digestion du protoplasme serait très rapide, car, avec la plupart des auteurs, nous n'avons que très rarement observé dans les leucocytes des trypanosomes renflés en boule à l'intérieur de vacuoles digestives. Nous avons seulement vu, plongeant en plein cytoplasme cellulaire et tranchant vigoureusement par contraste de coloration, le noyau et le blépnaroplaste. Fréquemment, le blépharoplaste existe seul. Ailleurs, nous avons observé dans les leucocytes des enclaves ayant la réaction de la chromatine nucléaire; sont-ce des restes de trypanosomes digérés ?

Nous avons aussi recherché la destinée des trypanosomes dans les viscères. Nous fûmes obligé, dans ce but, d’inoculer aux souris une forte proportion de virus (au moins 1/2 cent. cube de sang; la plupart du temps, 1 à 2 cent. cubes de sang).

(41) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, séance du 12 mars 1910.

BD

Avec les doses faibles (4 à 2 gouttes), la quantité de trypanosomes qui passent dans la circulation est si faible, qu'il serait puéril de vouloir les rechereher sur les coupes. Nos recherches, tant par la méthode des frottis que par celle des coupes, ont porté principalement sur la rate, le foie, les poumons, les ganglions lombaires, la moelle osseuse ; accessoirement, sur l’épiploon et la paroi abdominale fixée en pleine épaisseur musculaire. Les souris étaient tuées au chloroforme ou asphyxiées au gaz d'éclairage.

D'une manière générale, au point de vue de la coloration des trypanosomes, les frottis nous ont donné des résultats bien supérieurs à ceux des coupes. Nous n'avons pas réussi à différencier le flagelle des trypanosomes contenus dans les coupes. Par contre, nous avons coloré avec une grande netteté le corps même du trypanosome ainsi que les noyau et blépharoplaste : le cytoplasme apparaît en bleu délicat, très finement alvéolaire; le noyau en rouge; le blépharoplaste en violet foncé.

La méthode que nous avons employée pour la fixation et la coloration des coupes est à peu près celle qu'a fait connaître dernièrement Gremsa (4). Comme fixateur, le sublimé hydroalcoolique acétique de Scxauninx et PROWAZER :

Solution saturée aqueuse de sublimé . . . . . . 2 parties. AICOUIFAbSOIMAOUAMIEUeRTES ER D ATtIe.

Acide acétique pur, 1 p. 100 du total.

Suivant les conseils donnés par M. Borrez dans ses Cours, c'est à la glacière, à une température voisine de 0 degré, que nous avons fait nos fixations. Comparativement, les fixations faites à basse température nous ont paru supérieures à celles faites à la température du laboratoire. Suivant la grosseur des pièces, le temps de la fixation varie de 5 à 12 heures. Les poumons ont été fixés in foto, suivant l'excellente pratique préconisée par M. Borrez dans un Mémoire des Annales de l’Institut Pasteur (2), la trachée est liée avant que d'ouvrir le thorax. Puis, tout l'arbre pulmonaire est enlevé d’un bloc, plongé

(1) Deutsche mediz. Woch., 1910, n° 12. :

(2) « Tuberculose pulmonaire expérimentale. Etudesanatomo-pathologique du processus obtenu par injection intra-veineuse », t. VII, p. 593.

à même le fixateur et recouvert d'une couche d'ouate hydrophile suffisante pour empêcher les poumons de flotter. Au bout de 5 à 6 heures, pour faciliter la pénétration du fixateur, on pratique au bistouri des incisions dans les poumons. Au bout de 12 heures, la fixation est faite.

La ligature de la trachée avant l'ouverture du thorax a pour but de fixer le poumon en extension physiologique. Sans cette précaution, les alvéoles s’affaissent parfois si bien que les coupes deviennent absolument illisibles. Avec des alvéoles moyennement distendues, les coupes de poumons apparaissent comme une dentelle bien ajourée; et il devient très simple de s’y retrouver.

Au sortir du fixateur, afin d’être bien certain d'enlever tout le sublimé, les fragments d'organes sont plongés pendant trois jours dans l'alcool à 70° iodé. Puis, on les fait passer par la série classique : alcool à 86 degrés, 24 heures; alcool à 95 degrés, 24 heures; alcool à 100 degrés, 12 heures; xylol, 12 heures; xylol-paraffine, 12 heures; paraffine, 12 heures. Les coupes sont débitées à 6 4 et colorées au Giemsa en solution faible : 1 goutte pour 2-5 cent. cubes d’eau distillée. Laisser agir trente-six à quarante-huit heures, et renouveler le bain colorant au bout de vingt-quatre heures. La déshydratation, après lavage à l’eau courante, a lieu dans des mélanges, à proportions variables, d'acétone et de xylol. Il est pratique de mettre ces mélanges dans des tubes Borrel étiquetés 1, 2, 3 et 4, et de porter les lames successivement du tube 4 au tube 4.

Les mélanges contenus dans les tubes sont les suivants :

nbe ACC LONe - iCentacuDes.

NOIR Ne EE 5 — RUDeMLIE= PACEIONE CEE A no = ; NICOLE EE AASICRE RAR 30 — (HbeMIT EE ACétONC LT CRE 30 = NO E EE S C 10 =

Tube IV. — Xylol pur.

4, il ne reste plus qu'à monter

Après passage dans le tube

au baume.

D'après S.-B. Wozsacx et S.-HL. Mc Ker, l'addition de colo-

NN

phane à l’acétone (20 p. 100 de colophane) empècherait la décoloration de l’éosine. Nous n'avons pas obtenu de meilleurs résultats en appliquant ce procédé (1).

Nous devons tout de suite dire que, sur les nombreuses coupes que nous avons pratiquées, nous n'avons pas trouvé une seule figure histologique susceptible d'être interprétée nettement comme le résultat de la phagocytose. Nous avons simplement rencontré dans les phagocytes des enclaves analogues à celles des leucocytes du péritoine. Par contre, nous avons constaté avec la dernière netteté que les trypanosomes contenus dans les viscères, et notamment dans la rate (2), sont en parfait état d’intégrilé; ce qui rend très improbable leur destruction par (rypanolyse.

Il nous est arrivé à maintes reprises de voir des trypanosomes piqués sur les leucocytes et à divers stades de phagocytose sur des frottis de rate et de ne rien constater de semblable sur les coupes. Ce résultat s'explique par l'imparfaite coloration des trypanosomes autant que par le trop grand tassement des éléments cellulaires dans les coupes. Du fait de la compression des leucocytes, il y a une réelle impossibilité à dire si les trypanosomes sont à l'intérieur des leucocytes ou simplement à côté d’eux, étant donné que le cytoplasme du phagocyte et celui du trypanosome se colorent de la même façon, en bleu plus ou moins foncé. Ajoutons que SAUERBECK, dans les coupes de rate de rat nagané, a éprouvé des difficultés de même ordre. L'auteur signale qu'il est très difficile de dire si les parasites sont à l’intérieur ou à l'extérieur des globules blancs, « car le protoplasme du globule et celui du parasite se colorent dans le même ton ». Les trypanosomes, dans la rate, se rencontrent au niveau de la pulpe splénique et surtout au niveau des sinus veineux. Nous n'avons pas noté leur présence au niveau des corpuscules de Malpighi.

Une lésion est constante au niveau du foie : l'hyperplasie

(1) Journ. of med. Res., L. XXIV, n° 2, avril 1911.

(2) Quand on examine, entre lame et lamelle, un fragment de rate trypanosomée disséquée dans de l’eau physiologique, il passe dans le champ du microscope, une série de formes bizarres que l'on pourrait prendre pour des trypanosomes altérés et qui ne sont en réalité que des amas d’hématoblastes. Aussi ne doit-on faire confiance qu'aux préparations colorées.

2 et -

des cellules de Kupfter. Celle-ci peut présenter tous les degrés. Tantôt, elle se limite au simple boursouflement du noyau ; tantôt, c'est toute la cellule qui est tuméfiée, allongée en un long fuseau, parallèlement au vaisseau. Il est probable que les cellules de Kuplfer en hyperplasie abandonnent la paroi des capillaires, car ceux-ci peuvent être dénudés sur un parcours plus ou moins long. L'endothélium des capillaires hépatiques joue vraisemblablement un rôle actif dans la phagocytose des trypanosomes. Il nous est cependant impossible d’en fixer exactement l'importance, car nous n'avons trouvé dans le cytoplasme des cellules endothéliales que des fragments irréguliers, ayant les réactions de la chromatine et qu'on ne pouvait qu'hypothéliquement rapporter à des trypanosomes dégénérés. Pour Sauergeck, il n’est pas douteux que les cellules de Kuptffer phagocytent les trypanosomes du Nagana, chez le rat nagané. Seulement, la digestion du protozoaire se ferait si rapidement qu’on ne peut le retrouver qu'à l’état de vestiges méconnaissables.

Les capillaires hépatiques des souris infectées sont plus riches en globules blancs que normalement. On y rencontre peu de lymphocytes, surtout des mononucléaires gros et moyens et quelques mastzellen. Le cytoplasme des mononucléaires des capillaires contient fréquemment des enclaves chromatiques.

L'abondance des trypanosomes dans les vaisseaux du poumon contraste singulièrement avec leur rareté dans les vaisseaux des autres viscères. Cela est, sans doute, dû à ce que les poumons sont, dans un temps donné, traversés par une quantité de sang infiniment plus grande que celle qui traverse les autres organes. Nous avons facilement trouvé des trypanosomes jusque dans les fins capillaires, à peine plus larges qu'un globule rouge, qui rampent à la surface des alvéoles. Ces trypanosomes n'étaient séparés de la lumière alvéolaire que par la couche endothéliale limitante. Nous n'avons jamais constaté la pénétration des trypanosomes dans l’intérieur des alvéoles. L'endothélium alvéolaire ne joue donc aucun rôle dans la destruction de T. Lewisi. Nous rappelons, par comparaison, que Sauergecx à constaté la pénétration de 7. Brucei dans les

alvéoles des poumons du rat, et la phagocytose de ce trypanosome par l’endothélium alvéolaire.

Le tassement des éléments lymphatiques est tel au niveau des ganglions lombaires qu'on ne peut avoir aucun renseignement utile de l’examen de la couche corticale et du système caverneux. Le tissu sous-capsulaire donne seul des renseignements utiles : à son niveau, les cellules Iymphatiques sont écartées les unes des autres et les trypanosomes peuvent facilement être mis en évidence. On note leur intégrité parfaite. On trouve également des trypanosomes en parfait état dans les fins capillaires du lissu graisseux qui entoure incomplètement la capsule du ganglion.

La moelle osseuse des fémurs et des tibias n'a été examinée qu'en frotlis. Elle contient de rares trypanosomes, tous intacts.

La phagocytose doit être accentuée au niveau de l’épiploon, à la surface duquel nous avons rencontré, dans un réseau de fibrine, un grand nombre de leucocytes parfois littéralement bourrés d’inclusions chromatiques.

En somme, les coupes renseignent sur la distribution topographique des trypanosomes dans les viscères et l'existence dans les leucocytes de nombreuses inclusions chromatiques qui sont vraisemblablement des trypanosomes en voie de digestion. En plus, elles montrent très nettement l'absence de trypanolyse en dehors des globules blancs.

B. — Souris RÉCEPTIVES.