IÉCANISME DE LA GUÉRISON. IMMUNITÉ ACTIVE ET PASSIVE

Il était classique d'admettre jusqu'ici que la souris est réfractaire au T. Lervisi. En modifiant expérimentalement ce virus, et, pour employer l'expression de MM. Laveran et Perrir, en le «renforçant », Roupsky, le premier, a pu inoculer en série des souris (1). [1 déclare d'ailleurs, avec les auteurs, que cet ani-

(1) Comptes rendus de la Soc. de Biologie, 5 et 12 mars 1910, 12 novembre 1910: el Comptes rendus del'Acad. des Sciences, 5 janvier 1941.

mal est réfractaire non seulement au virus normal, mais encore aux cultures de celui-ci.

Les faits que nous apportons corroborent les données de Rocosky en les élargissant, si on peut ainsi dire. Nous avons pu, en effet, à notre grande surprise, infecter d'emblée des souris avec le Lewisi normal, tel qu'on le trouve soit chez un rat d'égout (infection spontanée), soit chez un rat blanc ou pie (infection expérimentale), soit encore dans les cultures (4).

Les souris ont été infectées par inoculation d’une simple goutte de sang prise à la queue d’un rat, soit au moment de la période d'état de l'infection sanguine, soit à celle de la multiplication des parasites. On peut, au lieu de sang, se servir du liquide péritonéal d'un jeune rat récemment inoculé. Le pourcentage des résultats positifs n’est pas plus élevé quand on se sert d’un sang riche en formes de multiplication. Les souris de T1 à 8 grammes ne sont pas plus sensibles que les souris de 15 à 20 grammes.

Nos expériences ont été faites avec 3 origines différentes de Lervisi, que nous numérotons 1, 2 et 3. Les Lewis 2 et 3 ont été isolés par nous de rats d’égout. En faisant des inoculations péritonéales à l’aide d’une goutte de sang de rat infecté, sur 26 souris inoculées avec le Lerisi 1, nous avons eu 6 résultats positifs; sur 10 souris inoculées avec le Lewrsi 2, 4 succès; et sur 42 souris inoculées avec le Lewisi 3, seulement 5 succès. On peut, de ces 3 séries d'expériences, conclure que les difrérentes races de Lewisi ne sont pas également inoculables d’emblée à la souris; elle peut être complètement réfractaire à certaines races.

La souris peut également être infectée par la voie souscutanée, qui est aussi bonne que la voie péritonéale. Nos injec-

(1) Nous avons, pour la première fois, signalé dans les cultures de T. Lewisi de petits trypanosomes qui, après fixation humide aux vapeurs osmiques el coloration lente au Giemsa, ont, en moyenne, 1u8 de long sur 1 u 1 de large. Le blépharoplaste fait souvent saillie tout à l'extrémité postérieure du parasile. Ces petits trypanosomes de culture ressemblent beaucoup aux « Small trypanosomes » signalés par S WELLENGREBEL €l STRICKLAND dans l'intestin de ja puce du rat, Ceratophyllus fascialus Bosc. Consulter à ce sujet la note que nous avons fait paraitre à la Société de Biologie, séance du 6 mai 1911, p. 704,

tions, pour la plupart, par simple commodité d'étude, ont été faites dans le péritoine.

Nous avons pu infecter des souris en leur inoculant des cultures faites en Novy-Nicolle. Nous avons constamment eu un pourcentage de résultats positifs plus élevé avec les cultures qu'avec le sang du rat. Et cette différence, très certainement, ne tient pas à ce que la dose de culture contenait plus de parasites que celle du sang; car, on n’a pas de résultats meilleurs en inoculant à des souris de fortes doses de virus; l'immunité naturelle, quand elle existe, est, en effet, une immunité très solide, que l’on ne peut faire fléchir en injectant de grandes quantités de trypanosomes, Alors que, sur 26 souris inoculées dans le péritoine avec une goutte de sang à Lewisi 1, 6 seulement prennent la maladie; sur 23 souris inoculées dans le péritoine avec des cultures de ce virus, 11 s’infectent. De même, sur 42 souris inoculées avec du sang à Lerwisi 2, 5 succès; et sur 19 souris inoculées avec les cultures de ce virus, 10 succès. Il faut en conclure que T. Lewisi en culture perd un peu de sa spécificité étroite pour le rat, etque, de ce fait, il peut mieux infecter la souris. Rappelons, à ce sujet, que Roupsxy, dans la première note qu'il a communiquée, indiquait comme idée directrice d’élucider l'influence des passages en milieux de culture sur l’évolution de 7. Lerwvisi.

Il nous a semblé que la maladie n’évolue pas chez la souris avec cette régularité ponctuelle que Laveran et Mesnis ont fait connaître chez le jeune rat. L’infection du sang se fait soit en même temps, soit après celle du péritoine. La durée de la maladie est très inégale : en moyene, 15 jours; maximum, 24 jours; minimum, 4 à 5 jours. La disparition des parasites a parfois lieu brusquement; bien plus souvent, elle se fait lentement, progressivement, durant 2 à 3 jours. Les formes de multiplication dans le péritoine et dans le sang sont absolument identiques à celles du rat. A noter dans certains cas la présence, seulement durant la phase de multiplication des parasites, de trypanosomes sans flagelle libre, quoique avec une membrane ondulante bien développée, et di. de formes à blépharoplaste seul, sans noyau, et qui, à la coloralion, nous paraissaient être en parfaite intégrité. Ces formes à

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blépharoplaste seul sont {oujours très rares, au nombre de 4 ou 5 au plus sur un frottis. Nous avons dernièrement constaté la présence de formes à blépharoplaste seul dans le sang de Jeunes rats, pesant 15 grammes, inoculés depuis 5 à 8 jours, en pleine période de multiplication sanguine des parasites.

A la période d'état de l'infection, les trypanosomes, chez la souris comme chez le rat, sont d’une régularité parfaite.

Il est plutôt exceptionnel que l'infection de la souris soit légère. Le plus souvent, il y abondante multiplication des parasites. Notamment, les rosaces sont, dans le sang, quelquefois si nombreuses qu'on peut en rencontrer avec un objectif 5, jusqu'à 7 à 8 dans un champ microscopique. L'infection trypanosomienne peut, ainsi que l’a signalé Roupsxy, entraîner la mort. Nous avons observé celle-ci 2 fois sur 233 cas, dont 55 positifs. La multiplication des parasites dans ces 2 cas mortels a duré jusqu à la mort, survenue 3 et 5 jours après l’inoculation. Le sang était si riche en parasites qu'il était manifestement décoloré, comme un liquide rosé. Aucune bactérie, aérobie ou anaérobie, n’a cultivé. Une fois sur deux, la mort est survenue brusquement, comme chez un rat nagané.

À vrai dire, nous avons observé la mort 5 fois. Seulement, dans 3 cas, le sang des souris mortes nous à fourni sur gélose simple une abondante culture microbienne. En conséquence, nous n avons pas cru devoir attribuer ces 3 décès à l’infection trypanosomienne.

Comme lésions anatomo-pathologiques macroscopiques, chez les deux souris dont la mort a pu être avec vraisemblance imputée au 7’. Lewisi, nous avons observé une dégénérescence granulo-graisseuse accentuée du foie. Les veines intralobulaires apparaissent sous forme de taches rouge foncé, irrégulièrement arrondies, entourées du tissu lobulaire jaune pâle. La rate était grosse, violacée, très congestionnée. Les reins étaient normaux. Chez une souris, nous avons noté un léger œdème du poumon avec de rares ecchymoses.

A l'examen microscopique, nous avons observé une atteinte profonde de la cellule hépatique. Les cordons de Remax, comprimés par la dilatation des capillaires, étaient partiellement détruits. Dans les capillaires, nous avons nolé une accumula-

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tion considérable de leucocytes, formés en majeure partie de mononucléaires (moyens et gros) et de plasmazellen; pas de mastlzellen, pas d’hématies nucléées.

A. Perur (1) a montré que, dans diverses trypanosomiases expérimentales, le foie subit, du fait de l'accumulation de leucocytes, formant manchon autour des vaisseaux hépatiques, une véritable transformation lymphoiïde. D. Roupsks# (2) a observé la même lésion chez les souris inoculées avec le T. Lewisi Kewr renforcé. Nous n'avons rien constaté de semblable chez les deux souris mortes d'infection trypanosomienne et chez les souris en cours d'infection. L'accumulation des leucocytes a lieu simplement dans les capillaires.

La transformation lymphoide du foie telle que l’a observée Rouosrey semble donc bien, ainsi que l’affirme A. Pernr, répondre à une propriété nouvelle acquise par Le T. Lerwisi KEnT renforcé.

Nous ajouterons que les tout jeunes rats inoculés avec le T. Lerwisi normal ne présentent pas la transformation Ilymphoïde du foie, même quand ils succombent à l'infection trypanosomienne. Nous en avons observé dernièrement 1 cas très net. Un jeune rat de 15 grammes, inoculé de sang trypanosomé le 9 octobre, meurt le 30 du mois. A l’autopsie, nous notons une transformation granulo-graisseuse accentuée du foie, avec teinte Jaune manifesle, mais sans trace aucune de transformation lymphoïde.

Avec le Lewisi n° 1, nous n'avons pas réussi les passages en série de souris à souris. Du moins, avons-nous subi des échecs répétés. Les inoculations étaient faites, dans le péritoine, à la dose de quelques gouttes de culture ou de sang. Nous donnons ici le résumé des expériences que nous avons faites :

(1) Comples rendus de la Soc. de Biologie, séance du 4 février 1911,t. LXX, p.165, et Archives internationales de Pharmacodynamie el de Thérapie, fase. 3-4, vol. XXI..

(2)RLoc-cit:

es:

PREMIÈRE EXPÉRIENCE : Le 27 décembre 1910, 10 souris blanches de 12 à 15 grammes sont inoculées avec une culture riche, datant du 17 novembre (culture du 5° passage en milieu arlificiel. 11 ÿ avait alors 5 mois que le trypanosome était isolé). Quatre souris s'infectent. Treize jours après, le sang d’une des souris infectées, riche en parasites, est inoculé à la dose de 2 gouttes à 6 souris neuves de 12-15 grammes. Aucune ne s'infecte.

DEuUxIÈME EXPÉRIENCE : Le 17 janvier 1911, 6 souris neuves de 10-12 grammes sont inoculées avec une goutte de sang, très riche en trypanosomes adultes et en formes de multiplication, d’un rat pesant 70 grammes et inoculé depuis 5 jours. Sur 6 souris, une seule s’infecte. Le 20 janvier, la souris réceptive a dans le sang de très nombreux parasites. Les formes de multiplication et les rosaces sont nombreuses. On inocule 3 à 4 gouttes de sang à 6 souris de 10 à 12 grammes. Aucune ne s'infecte.

TROISIÈME EXPÉRIENCE : Le 17 novembre, nous inoculons 3 à 4 dixièmes de cent. cube de culture de T. Lewisi à 3 souris (culture datant du 16 septembre 1910, correspondant au 4° passage en milieu artificiel. Il y avait alors # mois que le trypanosome était isolé). Deux souris s’infectent, dont 1 gravement; l'infection trypanosomienne a, en effet, duré dans ce cas 24 jours. Le 20 novembre, le sang de la souris gravement infectée, riche en formes de multiplication, est inoculée à 1 souris de 16 grammes, qui s’infecte. L’infection est moins grave que dans le cas précédent; elle ne dure que 13 jours. Le 25 novembre, le sang de la souris du 2° passage, riche en formes de multiplication, est inoculé à 1 souris de 15 grammes qui s'infecte gravement. La maladie dure 18 jours. Le 12 décembre, 8 à 10 gouttes de sang de la souris du 3° passage, riche en formes de multiplication, sont inoculées à # souris de 9-11 grammes. Aucune ne s'infecle.

QUATRIÈME EXPÉRIENCE : Le 3 novembre 1910, 3 souris de 12-18 grammes sont inoculées avec le liquide péritonéal, riche

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en formes de multiplication, d’un rat de 70 grammes, inoculé depuis 4 jours. Deux souris s'infectent. Le 10 novembre, le sang d’une des 2 souris infectées, riche en formes de multiplication, est inoculé à raison de 4 gouttes à 3 souris neuves de 11, 13 et 17 grammes. Deux souris s’infectent, dont 1 gravement. Le 15 novembre, le sang d’une des 2 souris infectées, riche en formes de multiplication, est inoculé à 6 souris neuves de 12-15 grammes. Aucune ne s’infecte.

CiNQUiÈME ExPÉRIENCE : Le 20 décembre 1910, nous inoculons à 6 souris de 12-15 grammes le mélange de 3 cultures ensemencées à des dates différentes (cultures du 22 octobre, du 10 novembre et du 17 novembre; toutes du 5° passage en milieu artificiel). Trois souris s’infectent. L’infection trypanosomienne dure en moyenne 8-10 jours. Le 2 décembre, le sang d’une des souris infectées est inoculé à 4 souris de 12-15 grammes. Une seule souris s'infecte : l’infection trypanosomienne dure 10 jours. Le 30 décembre, le sang de la souris du 2° passage, riches en formes de multiplication et en trypanosomes adultes, est inoculé à 5 souris neuves de 15-17 grammes. Deux souris s'infectent; chez 1 souris, l'infection trypanosomienne dure 6 jours ; chez l’autre, seulement 3 à 4 jours. Le 4 janvier 1911, le sang de la souris la plus infectée est inoculé à 5 souris de 10-12 grammes. Aucune ne s'infecte.

SIXIÈME EXPÉRIENCE : Le 17 janvier 1911, 6 souris de 12- 15 grammes sont inoculées avec 1 goutte de sang d’un rat, inoculé depuis 5 jours, riche en formes de multiplication. Une seule souris s’infecte. Le 20 janvier, 12 souris sont inoculées avec 1 goutte de sang de la souris infectée, riche en formes de multiplication. Aucune souris ne s’infecte.

Afin de faciliter la lecture de nos résultats, nous les avons groupés dans le tableau suivant :

Nous pouvons donc affirmer, en toute certitude, en raison des 6 essais infructueux que nous avons faits et qui portent sur un total de 83 animaux, que le 7. Lewisi n° 1 n'est pas

inoculable en série à la souris. Le virus, au cours des passages, loin de s'exalter, semblerait plutôt s’atténuer. Nous faisons, cependant, des réserves sur ce point attendu que la marche de l'infection tryp: I ( is, 1 ;

et rypanosomienne chez des souris, inoculées dans des conditions identiques, est très variable d'un animal à l’autre.

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La guérison survient chez les souris réceptives par phagocytose. Celle-ci, comme chez les souris qui ont d'emblée

l’immunité naturelle, est difficile à constater lorsqu'on examine,

entre lame et lamelle, le liquide péritonéal de ponction. Les meilleurs renseignements sont fournis par les frottis colorés, sur lesquels on peut rencontrer de bonnes figures de phagocytose. Les coupes ne donnent rien de particulier; des inclusions chromatiques dans les mononucléaires de la rate, des poumons, du foie, dans les cellules de Kupffer hyperplasiées.

Les souris qui ont eu une première infection sont toujours réfractaires à une seconde inoculation, quelle que soit la dose de trypanosomes inoculée dans le péritoine. La souris, comme

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le rat, est done susceptible de s'immuniser activement à l'égard du 7. Lerwisi.

Nous avons constamment observé que les trypanosomes passent dans le sang lors de la 2° inoculation. Le fait est plus rare lors de la 3° inoculation. La 4° inoculation n'est Jamais suivie d'infection sanguine : les parasites sont alors détruits dans la cavilé péritonéale même.

Nous avons immunisé nos souris par injection de sang trypanosomé de rat ou de souris. Avec le sang de rat, il faut aller avec prudence et se contenter d’inoculer 4 à 2 gouttes. Les doses plus fortes sont mal supportées, et souvent les souris meurent vers la 6° et 7° réinoculation. Il vaut mieux injecter du sang de souris infectée. On n’a pas alors à craindre l'effet toxique des injections et la phagocytose des globules rouges ne vient pas compliquer celle des trypanosomes. On peut encore immuniser des souris avec du sang de souris, puis au moment où l’on désire étudier le mécanisme de l'immunisation active, inoculer du sang de rat. La destruction des globules rouges du rat est alors tardive, celle des trypanosomes précoce. Les deux phénomènes se succèdent, et on peut les étudier l’un après l’autre.

La plupart de nos recherches sur l’immunité active ont été faites sur des souris qui avaient reçu au minimum 4 à 5 injectons.

La première chose qui frappe chez une souris en immunité active est l’agglutination des trypanosomes. Celle-ci a lieu dès que l'injection est faite. Au bout de 2 à 3 minutes, on assiste à la formation de gros amas de trypanosomes, affectant ou non la forme de rosaces. Les trypanosomes, et cela dépend de l'importance du traitement que l'on à fait subir à l'animal, peuvent être simplement agglutinés, et alors à cause de leur mobilité persistante ils se disposent en rosaces (Laverax et Meswir), ou à la fois agglutinés et paralysés. La paralysie n’est d’ailleurs jamais totale. Chez les souris qui ont recu près de 20 injections, les trypanosomes conservent encore quelques mouvements de la membrane ondulante et du flagelle. Nous n'avons jamais observé la lyse des trypanosomes en dehors des éléments cellulaires. L’immunité active de la souris, si poussée

soit-elle, fait donc apparaître simplement la propriété agglutinante, jointe ou non à la propriété paralysante.

La destruction des trypanosomes, par phagocytose, chez les souris en immunité active, est facile à observer. La phagocytose est précoce. Déjà 2 à 3 minutes après l'injection, elle est manifeste. Elle est au maximum au bout de 10 à 20 minutes. On voit alors, de gros amas de leucocytes, au milieu ou sur le pourtour desquels se rencontrent de nombreux trypanosomes à divezs stades d’englobement. Les préparations colorées donnent souvent des déceptions : les amas de leucocytes et de trypanosomes sont si épais qu'ils prennent la coloration d’une manière très intense, et il est alors impossible de les utiliser. Les meilleurs renseignements sont fournis par des leucocytes isolés, ou par les petits amas de leucocytes. On peut alors étudier tous les stades de la phagocytose, depuis le simple attachement jusqu’à la présence dans Le cytoplasme des noyaux et des blépharoplastes, ainsi que de simples enclaves chromatiques.

Nous avons injecté à des souris en immunité aclive des trypanosomes du sang de ratet de souris, débarrassés par centrifugation électrique des globules rouges et lavés deux fois à l’eau physiologique, ces différentes manipulations ne demandant pas plus qu'un 1/4 d'heure à 20 minutes. Nous avons, dans ce cas, constaté très nettement non seulement la phagocyltose, mais aussi la destruction extra-cellulaire d’une partie des flagellés. Nous pensons que la centrifugation, si ménagée soit-elle, amène de graves altérations chez beaucoup de flagellés. Certains seraient même, de ce fait, complètement détruits, réduits au flagelle et au blépharoplaste ainsi que l'attestent les frottis du culot de centrifugation colorés au Giemsa. On comprend, étant donné le trouble apporté dans l'équilibre leucocytaire par la piqûre abdominale, que les trypanosomes, en voie d’altération grave, puissent continuer à se détruire avant mème que la phagocytose se produise.

Quand nous avons étudié l’immunité naturelle, nous avons montré quelles précautions il fallait prendre à l'égard de la ponction du péritoine. Ici, c'est en quelque sorte l'envers de la médaille; et les expériences, rapportées plus haut, montrent