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De cet ensemble de données bibliographiques, il ressort qu'il existe une divergence d'opinions : Laverax et Mesuir, Mesnii. et Brinonr décrivent des phénomènes de phagocytose tout à fait typiques; Massaccra, Roner et VarLer pensent au contraire que la destruction des trypanosomes relève exclusivement de l’action trypanocide des humeurs, les leucocytes jouant seulement le rôle de balayeurs de déchets.

SAUERBECKX est d'opinion mixte : la destruction des trypanosomes est due aw leucocyte. Celui-ci est l'âme même de la défense. Seulement la destruction des parasites, à cause de l'activité toxique des globules blancs, arriverait avant que l’englobement soit complet. Telle est aussi, nous l'avons vu, l'opinion de Levaniri.

Il n'était donc pas sans intérêt d'envisager à nouveau l'importance de Ja phagocytose dans la destruction des flagellés. Nous avons dans ce but étudié, sur les conseils de notre maître M. Messi, professeur à l’Institut Pasteur, l’immunité de la souris à l'égard d’un certain nombre de protozoaires.

L'IMMUNITÉ NATURELLE DE LA SOURIS A L'ÉGARD DES CULTURES DE BOUTON D'ORIENT ET DE KALA-AZAR TUNISIENS

(Leishmania tropica J. H. Wriçur, 1903, et Leishmania infantum Cu. Nicozce, 1908)

La souris blanche possède à l'égard des cultures (1) de Kala- Azar et de bouton d'Orient tunisiens une immunité naturelle

‘1) Ces cultures ont été aimablement fournies à M. Mesniz par M. Cu. Nicozee, de Tunis.Elles ont été depuis régulièrement entretenues dans le laboratoire de M. Mesxiz par passages en milieu Novy, simplifié par Cn. Nicozze.

Voici la manière exacte dont nous préparons le milieu de culture : sel marin, 6 grammes; gélose non lavée, 14 grammes ; eau, 900 cent. cubes. Répartir dané des tubes sans neutralisation ou alcalinisation préalable, puis stériliser à l'autoclave par un chauffage à 120 degrés un quart d'heure. Les tubes sont encapuchonnés et conservés à l'abri de la lumière. Au moment de s'en servir, on en fait fondre le contenu dans de l'eau bouillante. On les laisse ensuite se refroidir et quand la température est descendue à 45-50 degrés, on

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très forte, que des injections péritonéales fréquemment répétées et faites pendant des mois n’arrivent pas à vaincre (1). Ainsi du 7 octobre 1910, au commencement de mars 1911, nous avons, sans aucun succès, inoculé, à cinq ou six jours d'intervalle, douze souris avec des cultures de ces virus arrivées au maximum de leur développement. Les injections étaient faites à la dose de un demi-centimètre cube environ.

Le mécanisme de cette immunité naturelle est des plus simples. Il est le même qu’il s'agisse de Bouton d'Orient ou de Kala-Azar. Il est particulièrement facile à mettre en évidence avec les cultures de Bouton d'Orient; car ces cultures, en milieu Novy simplifié, sont sensiblement plus riches que celles de Kala-Azar. Sitôt injectés, les leptomonas de culture se piquent sur les lymphocytes, gros et petits, qui normalement abondent dans le péritoine de la souris. Cette fixation des flagellés est très rapide. Déjà, une minute après l'injection, on constale qu'un grand nombre de leptomonas sont adhérents. En quinze minutes, la fixation est quasi totale. Le nombre des flagellés attachés à un leucocyte est très variable. On peut en constater jusqu'à 10 à 12 sur un seul globule blanc. C'est ordinairement par l’extrème bout du flagelle que les leptomonas se piquent sur les leucocytes, mais ils peuvent y adhérer soit par leur extrémité postérieure, soit plus rarement en un point quelconque du corps.

On peut aussi constater, mais rarement, la fixation d’un leptomonas sur un globule rouge; cette fixation a lieu par le bout du flagelle. Elle peut être telle que le leptomonas n'arrive pas à se débarrasser de l’hématie, qu’il secoue avec violence.

y incorpore, en volume, un tiers de sang défibriné de lapin. On mélange intimement gélose et sang. Les tubes, afin de permettre le milieu d'adhérer au verre, sont conservés, inclinés, à 28° une nuit. Le lendemain, on les encapuchonne de nouveau et on les place à 37 degrés seulement deux à trois heures. Cela suffit pour permettre au liquide de condensation de se former en petite quantité. Les tubes sont ensuite placés à la glacière, où on peut les conserver pendant un mois et plus, à une température voisine de 0 degré, jusqu'au moment de l’ensemencement. Le sang défibriné doit être aussi frais que possible. Il est entendu qu'avant la préparation des milieux on en éprouvera la Stérilité par ensemencement en bouillon simple:

(1) MM. A. Laveran et A. Perrir ont pu déterminer chez la souris et le rat des infeclions légères, essentiellement guérissables, en leur inoculant une émulsion de rate et de foie de chien infecté de Kala-Azar tunisien.

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La fixation des leptomonas n'a donc pas lieu exclusivement sur les globules blancs. Nous n'avons pas vu plusieurs leptomonas attachés à un seul globule rouge. Par contre, ce fait est très fréquent avec les mononucléaires.

Les lymphocytes ne tardent pas à réagir à la fixation des protozoaires. On peut les voir, sous le microscope, une fois accommodés à la température du laboratoire, montrer un petit promontoire protoplasmique juste au point de fixation du flagelle, puis, de part et d'autre de celui-ci, allonger deux minces et fins pseudopodes, transparents et dépourvus de granulations cytoplasmiques. Ces pseudopodes, peu à peu, grandissent et finissent par saisir en totalité le leptomonas. Une fois l’englobement complet, le leucocyte rentre ses pseudopodes et régularise son contour. Peu après, on voit apparaître en plein cytoplasme, une vacuole claire, transparente, ronde ou plus fréquemment ovalaire, à contours parfaitement nets, dans laquelle on distingue le leptomonas, renflé en boule, dont les contours épousent étroitement ceux de la vacuole. Celle-ci, on le devine, n’est rien autre qu'une vacuole digestive. Rapidement, en effet, le protozaire inclus devient transparent; les granulations cytoplasmiques de son protoplasme sont animées d'un mouvement brownien très net, diminuent de grosseur, puis de nombre, et ainsi jusqu’à disparition complète. Il est d’ailleurs facile de contrôler par des préparations colorées toutes les phases de la digestion phagocytaire qu'on aura pu suivre simplement entre lame et lamelle. Il suffit même de déposer sur une lame une goutte de l’exsudat péritonéal d’une souris neuve et une goutte de culture et de recouvrir le tout d’une lamelle pour assister in vitro à toutes les phases de l’englobement.

La technique que nous avons employée, pour la coloration des frotlis de liquide péritonéal, est la suivante : fixation humide aux vapeurs osmiques (solution aqueuse à 1 p. 100) quinze secondes; après dessiccation, surfixation à l’alcool-éther, parties égales, deux minutes. Laisser sécher. Laver à l'eau courante et colorer vingt minutes dans une dilution de Giemsa, au 40° (1 cent. cube de Giemsa pour 10 cent. cubes d’eau distillée).

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Il est nécessaire que la coloration suive de près la fixation. Des préparations fixées seulement depuis 48 heures se colorent mal, dans tous les cas moins bien que si elles avaient été colorées de suite après la fixation.

Pour les frottis, les dilutions de Giemsa au 10° valent mieux que les dilutions au 50° ou au 100°. Celles-ci, en raison du long espace de temps qu'elles exigent (12 à 15 heures au minimum), donnent lieu à un abondant précipité rougeàtre qui gène la lecture des préparations. Pour les coupes, au contraire (nous détaillerons plus loin leur mode de coloration), les dilutions au 50° ou au 100° valent mieux : le précipité rougeâtre est entièrement enlevé par l’acétone au moment de la déshydratation.

C'est en pleine vitalité que les leptomonas de culture sont englobés. On se rend surtout compte de ce fait quand on à affaire à des leptomonas fixés par leur extrémité postérieure. Le flagelle, qui est alors la dernière partie englobée, reste mobile jusqu'à complète disparition. Nous n'avons Jamais constaté d'action lytique en dehors des globules blancs. Le sérum de la souris n’a d’ailleurs aucune action nocive sur les cultures de Bouton d'Orient et de Kala-Azar; par l’immunisalion, on développe simplement une légère propriété agglutinative qu'on ne peut d'ailleurs affirmer que dans le cas des cultures de Bouton d'Orient, puisque le Kala-Azar donne déjà en culture de nombreux amas de microbes. Notons, en passant, que les leptomonas des cultures de Bouton d'Orient s’agglutinent de facon quelconque; ils se rapprochent les uns des autres et s'entremêlent sans disposition spéciale. On ne peut donc trouver ici confirmation de la théorie de Prowazer (1905), qui prétend qu'au cours de l’agglutination des trypanosomes en rosaces, le blépharoplaste sécrète une substance visqueuse qui tend à les réunir les uns aux autres. Si cette théorie était exacte, les leptomonas auraient tendance à se grouper par leurs extrémités antérieures.

Bref, l'immunité naturelle de la souris à l'égard des Leishmania tropica el infantum, en cullure, estune immunité d'ordre exclusivement phagocytaire. Les leptomonas, introduits dans le péritoine, sont l’objet d’une phagocytose rapide. En une