CHAPITRE II

Le bacille tuberculeux vit habituellement en parasite des cellules lymphatiques. Sa culture dans les milieux arliGciels est lente el difficile, surtout dans les premières générations. On Tobtient cependant sans trop de peine en partant d'organes tuberculeux où il existe à Tétat de pureté ; mais son isolement nécessite des manipulations très délicates s'il s*agit de le réaliser en prenant comme semence des crachats ou d'autres produits pathologiques provenant de lésions ouvertes, dans lesquelles d'autres microbes — tels que les agents habituels des suppurations — se trouvent en grand nombre et sont beaucoup plus aisément cultivables sur les mêmes milieux.

Robert Kocn *, après de multiples tentatives infructueuses, réussit le premier à obtenir une culture pure en étalant des tubercules, fraîchement ramollis et préalablement écrasés, sur du sérum de bœuf ou de mouton coagulé et stérilisé par plusieurs chauffages successifs à 68**. Le sérum, contenu dans de petits godets de cristal recouverts d'un disque de verre, était, après ensemencement, maintenu dans un thermostat à la température de 37°. En examinant à la loupe il vit appa raltre, au bout de dix à quinze jours, h la surface de ce milieu semitransparent, de très petites colonies écailleuses grisâtres qui, reportées sur d'autres godets semblables, donnaient lieu à un nouveau développement, plus rapide cette fois, d'amas irréguliers de colonies proéminentes, toujours écailleuses et sèches. L'examen de ces colonies au microscope après coloration monti-ait des bacilles identiques à ceux que contenaient les tubercules d'où ils étaient issus, et leur inoculation au cobaye et au lapin reproduisait exactement les mêmes lésions qu'on obtenait lors(|ue, selon la technique de Villemin, on introduisait dans l'organisme de ces animaux le produit de broyage d'organes tuberculeux.

Robert Koch essaya d'autres milieux de culture. En déposant, à la surface de sérum liquide stérile, des lamelles écailleuses provenant d'une culture initiale sur sérum coagulé, il obtint un développement peu abon-

dant, sous la forme d'un voile mince extrêmement fragile. Mais il ne réussit pas à cultiver le bacille sur bouillon ni sur gélose nutritive, et après avoir relaté tous ses essais il déclara « qu'il n'y a pasr à espérer que la culture du bacille de la tuberculose joue un très grand rôle dans l'étude de la maladie ».

Bientôt après, Nocard el Roux ^ publiaient dans les Annales de rinstUut Pasteur un important mémoire dans lequel ils décrivaient un perfectionnement de technique auquel nous sommes redevables des grands progrès réalisés par la suite dans l'étude du bacille tuberculeux et de ses produits de sécrétion. Ces savants avaient constaté que la glycérine, ajoutée en proportion convenable (5 à 8 p. loo) au bouillon, h la gélose ou au sérum, rend ces milieux particulièrement favorables à la muitipUcatîon du microbe.

A. -CULTURE OU BACILLE PROVENANT OE PAOOUJTS PATHOLOGIQUES PURS 0£ TOUS AUTRES GERMES MICROBIENS.

Maigre les perfectionnements de la technique, il est toujours difficile d'obtenir une première culture de bacilles, même en prenant comme semence initiale un organe tuberculeux dans lequel ils existent k ïéiai pur.

Le procédé le plus recommandable consiste à tuer un animal tuberculeux (par le chloroforme par exemple). On en fait rapidemeni l'autopsîe avec toutes les précautions d'asepsie usuelles, de manière à découvrir d'abord la rate, puis les principaux groupes ganglionnaires, surtout les médiastinaux. On cautérise, avec une spatule rougic à la flamme, la surface de l'organe et, avec un fin scalpel stérilisé, on en découpe, i travers la partie cautérisée, de petits fragments qu'on introduit aussitôt dans un lube stérile en verre un peu épais, bouché à l'ouate. On fait pénétrer dans le tube un agitateur stérile en verre à extrémité rodée et on écrase le plus finement possible les fragments, de manière à en former une pulpe homogène. Cette pulpe, chargée sur une spatule de platine, est alors étalée àlasurface de plusieurs tubes contenant, en couche inclinée, du sérum de bœuf glycérine à 4 p. loo et coagulé par chauflage à 70®. On doit s'être assuré prëalablctnent que ces tubes sont parfaitement stériles. Onlesporteàl'étuve après les a voir obturés avec des capuchons de caoutchouc stérilisés et on les maintient soigneusement à la température de 38°, en position inclinée, presque horizontale. Tous les tubes ainsi ensemencés ne cultivent pas. Mais si on les examine attentivement après 8 à 12 joui^s, on aperçoit sur quelques-uns d'entre eux, à la surface du sérum, de petites masses grises légèrement proéminentes qui sontdes colonies de bacilles. Dès qu'elles sont bien apparentes, ou en vérifie la nature et la pureté par l'examen au microscope

i. Annales de Vlnst'Uil Pasteur, 1887, p. 19.