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MaSSON et C'^, KDITEURS.

et il faut les reporter immédiatemeot sur un nouveau milieu de culture où elles se développent avec plus de vigueur. Pour cela, on les charge sur une ispatule de platine flaml>ée et on les écrase en les étalant sur toute la surface d'un nouveau tube de sérum glycérine coagulé qu'on reporte à Téluve 38**. Généralement, après 3 à 4 semaines, le développement des colonies est devenu assez abondant pour qu'on puisse les réensemencer soit sur d'autres tubes de sérum, soit sur du bouillon glycérine, soit sur des pommes de terre glyoérinées, et les cultures en séries sont désormais faciles à obtenir. (Planches let IL)

Ces cultures en séries, en partant d'une première semence bien développée sur sérum glycérine coagulé, se font le plus aisément sur pommes de terre glycérinées ou sur bouillon glycérine.

On peut, comme l'a indiqué K. K. Wedensky *, enricbir en bacilles la matière qui doit servir de semence initiale en suspendant, au bout d'un (il stérilisé, un fragment de tissu (rate ou ganglion lymphatique) prélevé aseptiquement, et en l'introduisant dans un gros tube à essai ou une fiole d'-Brfe/ïAnayer contenant un peu de bouillon glycérine, de telle sorte que ce fragment ne soit que partiellement immergé. En une ou deux semaines la pultulation des bacilles est suffisante pour qu'on puisse en obtenir plus aisément des cultures.

a) Cultures sur pommes [de terre,

La méthode de culture sur pomme de terre glycérinée a été décrite d'abord par A. D. Pawlowskt * qui l'avait étudiée en i888 à l'Institut Pasteur, en utilisant les tubes à essai, étranglés au niveau de leur tiers inférieur, employés déjà pur E. Roux depuis i886 :

On coupe avec un emporte-pièce des tranches demi-cylindriques de grosses pommes de terre, de telle sorte que chaque tranche, débarrassée de pelure, ait environ 5 à 6 centimètres de longueur et une largeur correspondante au diamètre intérieur, des tubes. Les tranches, fraîchement coupées, doivent être immergées aussitôt dans un cristallisoir contenant une solution à lo p. looo de carbonate de soude. On les y laisse tremper une ou deux heures, puis on les essore dans un linge et on les introduit une à une dans chaque tube à essai dont on a préalablement garni le tiers inférieur, jusqu'à l'étranglement, de bouillon ou simplement d'eau salée physiologique glycérinée à 5 p. loo. On bouche à l'ouate et on stérilise en une seule fois à l'autoclave à 120*" pendant 3o minutes. Au sortir de l'autoclave on obture les tubes avec des capuchons de caoutchouc stérilisés pour éviter l'évaporalion de leur contenu.

L'ensemencement à la surface de la pomme de terre se fait avec une spatule de platine un peu rigide. Le développement des bacilles tuber-

i.Centralbl.f. Bakt., ibim], iqiS.