AnnaUêde VInstUul Pasteur, 1SS8, p. 3o

(PlAXCUES I ET II.)

culeux y est plus rapide et beaucoup plus abondant que sur le sérum Coagulé, de telle sorte que ce milieu convient très bien lorsqu'on a besoin de se procurer de grandes quantités de microbes. En quatre à cinq semaines, la surface de la pomme de terre se recouvre enlièrement d'une masse épaisse de colonies agglomérées, granuleuses, proéminentes et irrégulières, de couleur blanc-grisâtre, tantôt sèches et tantôt humides, suivant la provenance humaine, bovine ou aviaire des bacilles. Sur certaines sortes de pommes déterre, qui contiennent un peu de glucose, la culture prend une couleur rose tirant au rouge brique.

On peut très bien se servir de la pomme de terre glycérinée pour cultiver d'emblée le bacille tuberculeux à partir du pus d'abcès froids ou du produit de broyage d'organes tuberculeux purs de tous autres germes microbiens; mais il est incontestable que les cultures primitives s'obnennent plus sûrement sur le sérum coagulé glycérine. En revanche, les bacilles développés sur pommes de terre poussent ensuite avec beaucoup plus de vigueur lorsqu'on les réensemence sur le même milieu ou sur bouillon glycérine.

b) Cultures sur milieux liquides.

Les cultures en milieux liquides permettent seules la préparation de la tuberculine et l'étude des poisons solubles excrétés par le bacille. Aussi ces milieux sont-ils très employés dans les laboratoires. Le plus fréquemment utilisé est le bouillon pcptoné ordinaire, de veau ou de bœuf, bien clarifié, qu'on additionne de glycérine dans la proportion de 4 à5 p. loo et qu'on alcalinise légèrement en prenant la teinture de tournesol comme indicateur.

Il n'est pas indispensable d'employer de la viande. Ainsi Beck la remplace avantageusement et très simplement par loo ce. de sérum (de cheval, de bœuf ou de porc) qu'on mêle à 900 ce. d'eau et qu'on chauffe à l'ébullilion (dans l'autoclave non boulonné) pendant une heure. On jette ensuite sur un filtre. Le liquide clair est additionné de :

Citrate de magnésie a gr. 5

Asparagine 2

Glycérine ao

On reporte à rauloclave à 112*' pendant i5à vto minutes et on filtre. Le bouillon est réparti dans des ballons à fond plat, dételle serteque chacun renferme une couche de liquide de 2 centimètres de hauteur. On bouche les ballons à l'ouate et on stérilise par une demi-heure de chauffage à l'autoclave à 120**. Après refroîdissomeut, on ensemence chaque ballon en déposant avec précaution, à la surface du liquide, au moyen d'une anse ou d'une spalule de platine, quelques parcelles écailleuses recueillies h la surface dune culture sur pomme de terre, ou un fragment de voile provenant d'une autre culture en bouillon. Les voiles

minces, de développement récent, ou les cultures jeunes sur milieux solides, conviennent le mieux pour ces ensemencements sur bouillon. L'essentiel est de ne pas immerger la semence, car si celle-ci est noyée dans la masse du liquide, elle ne se multiplie pas.

On porte les ballons dans une étuveà température constante, bien réglée à 38* et qu'on évitera d'ouvrir fréquemment. Déjà après quelques jours on voit se former un léger voile très mince qui s'étend tout autour de la pellicule ensemencée. Ce voile couvre, au bout de 3 à 4 semaines, toute la surface du liquide, tend même à grimper sur les parois du ballon, puis s'épaissit en formant des rides de plus en plus épaisses. A six semaines, la culture est achevée ; elle n'augmente plus. Le voile prend Taspect d'une plaque de bougie fondue, à surface chagrinée; puis il se fendille et, au moindre mouvement imprimé au ballon, il tombe au fond du vase. Le liquide sous-jacent reste toujours parfaitement limpide. S'il arrivait qu'il se troublât, c'est que la culture est souillée de quelque autre microbe.

Les réensemencements en séries sur bouillon doivent toujours être effectués avec des voiles jeunes, très minces.

On a cherché à préparer des milieux liquides dont la composition chimique fût mieux définieque ne peut l'être celle, toujours très variable, d'un bouillon de viande. Kuhîie, Proskauer et Beck ^ Uschinski, Hipp. Martin, C. Fraenk.el, \o^ Sghweinitz ^^ Lôwenstein et Pick, ont proposé des formules synthétiques complexes où entrent, avec divers sels minéraux, la leucine. la tyrosine, l'asparagine, le glycocoUe, la sarcosine, l'acide hippurique, certains sucres (glucose, galactose, maltose) et des alcools polyatomiques (dulciteet mannite).

Le milieu de Kuhne ^ s'obtient en préparant d'abord un mélange des produits suivants :

grammes

Chlorure de sodium i6.

Sulfate de magnésie crist 3,5

Plâtre calciné i ,5

Magnésie calcinée a, 5

Potasse anhydre 62,1 3

Soude 7,35

Fer réduit 6, a

Acide phosphorique (de Dé = i,3.) 96.

Acide lactique (de Dé = 1,2) 5o à 60

Eau distillée 600.

On chauffe à Tébullition.

12 ce. de ce mélange représentent 10 gr. environ d'extrait de viande,

i.Zeitsch f. Hygiène^ 1894. vol. XVIH, p. 128. 11. Centralbl /. Bafd., vol. XIV, p. 33o. 1893. 3. Zeitsch f. Biologie, vol. XXX, p. aai.

L* IMFECTiO!! BACILLAIRE 3

c'est-à-dire la quantité nécessaire pour préparer i litre de solution nutritive.

A ces 12 ce. on ajoute (pour i litre) :

grammes

Leucine 4

Tyrosine i .

Asparagine a

Succinate d'ammoniaque a

Taurine • o,5

Glycérine 4o

Chlorure de sodium 5

On alcalinise légèrement à la soude, on stérilise et on répartit en ballons. Le milieu de Proskaver et Beck. contient les éléments suivants :

grammes

Carbonate d'ammoniaque. . o,35

Sulfate de magnésium o,a5

Phosphate de potassium (mono). o,i5

Glycérine i,5o

Eau loo

Au laboratoire de Robert Koch, pour la préparation de la tuberculine sans albumine (tuberculineA. F., albumosefrei) dont il sera parlé plus loin (Chap, V), on Ta modifié comme suit :

grammes

Phosphate de potassium (mono) o,5o

Sulfate de magnésium o,o6

Citrate de magnésium o,a5

Asparagine o,5o

Glycérine a

Soude caustique o,a5

Eau distillée loo

Le milieu que j'ai étudié avec L. Massol et M. Breton convient très bien et est facile à préparer * .

Voici sa composition pour i litre :

grammes

Carbonate de soude i

Sulfate ferreux o,o4o

Sulfate de magnésie o,o5o

Phosphate de potasse i

Chlorure de sodium 8,5

Glucose 10

Glycérine t\o

Peptone de Witte lo

Eau distillée looo