Comptes rendus Académie des sciences ^ 3o mars

ihine el que les sérums de sujets tuberculeux cbauffés à 58**, donc privés d'alexine, activent le venin de cobra, c'est-à-dire le rendent hémolytique in viiro^ tandis que les sérums des sujets sains en sont incapables, j'ai pensé qu'on pourrait, dans quelque mesure, tirer parti de cette propriété pour corroborer ou infirmer le diagnostic dans l'infection tuberculeuse.

L'affinité des bacilles tuberculeux pour la lécithine est mise en évidence par l'expérience suivante :

Dans une série de tubes à essais, A, A', A",,., mettons i cm^ d'une émulsion de bacilles tuberculeux frais (origine bovine, correspondant à 5 p. i.ooo en poids de bacilles secs) en présence de quantités variables de lécithine (o cm^4 à i cm^ de solution à i p. lo.ooo) *. Laissons en contact pendant 2 heures à l'étuve à 87**, puis ajoutons à chaque tube 1 cm^ d'émulsion à 5 p. 100 d'hématies de cheval lavées, et o cm^ 5 d'une solution de venin de cobra à i p. 5. 000. Des tubes témoins, B, B', B",... reçoivent les mêmes quantités de lécithine + hématies + venin. D'autres tubes témoins, C, C reçoivent des bacilles tuberculeux -f hématies + venin sans lécithine.

En moins de 3o minutes, l'hémolyse est complète dans tous les tubes B, B', B"... Elle est nulle, même après 18 heures, en C, C ; nulle également dans les tubes de la série A où les bacilles tuberculeux étaient restés en contact avec o cm^ 4, o cm^ 5, o cm^ 6 de solution de lécithine. Dans les autres tubes de la série A, contenant o ce. 7 ou davantage de lécithine, les hématies sont hémolysées.

La même expérience est répétée en remplaçant les bacilles tuberculeux

frais par des bacilles secs, par des bacilles chauffées à 120°, par une

solution de tuberculine brute à o,5 p. 100 (ou de tuberculine précipitée

par l'alcool à froid à 5 p. 100), parla même solution stérilisée à 120°,

' et enfin par le bouillon de culture sans bacilles.

On trouve alors que les bacilles secs sont tout aussi avides de lécithine que les bacilles frais, mais que, par contre, les bacilles stérilisés à lao** perdent presque complètement leur avidité initiale (hémolyse avec occ. 5 de lécithine). La tuberculine préparée à froid dévie également la lécithine et Tempêche d'agir sur le venin jusqu'à la dose maxima de 4 ce. (de solution à i p. 10.000) pour i ce. de solution de tuberculine à 5 p. 100 La même tuberculine stérilisée à 120" est beaucoup moins avide. Le bouillon de culture, sans bacilles et sans tuberculine, ne Test pas du tout.

En présence de ces résultats et de la constatation que nous avions

1. La solution de lécithine se prépare en dissolvant i gr. de lécithine dans 100 gr. d'alcool méth^flique pur. On prend i ce. de cette dilution qu'on porte dans 9 ce. d'eau salée à o,85 pour 100, et l'on fait une seconde dilution de i ce du précédent mélange dans 9 ce, d'eau salée. Cette dernière dilution au dix millième est utilisée pour la réaction.

faite précédemment des propriétés activantes à l'égard du venin manifestées par les sérums qui renferment des lipoïdes capables d'activer le venin (cheval, chien, chèvre, lapin, rat), nous avons aussitôt pensé à étudier comparativement la manière dont se comportent les différents sérums d'animaux ou d'hommes sains, d'animaux ou d'hommes tuberculeux, soit vis-à-vis du venin seul, soit après contact préalable avec-une émulsion de bacilles tuberculeux + venin.

Vis-à-vis des venins seuls la mise en " évidence de la propriété activante des sérums lécithifères est réalisée très aisément suivant la technique que voici :

Dans une série de tubes à essais on verse i centimètre cube d'une solution de venin de cobra au millième (soit i milligr.) fraîchement préparée, chauffée une demi-heure à 75*" et filtrée sur papier. On ajoute à chaque tube i centimètre cube d'une dilution d'hématies de cheval à 5 p. 100 préalablement lavées à l'eau physiologique et centrifugées au moins trois fois pour les débarrasser de toute trace de sérum.

Chaque tube reçoit ensuite respectivement o ce. 01, o ce. o5, o ce. i, 0 ce. 5 et 1 ce. du sérum à étudier, préalablement chauffé une demiheure à 58**. On complète partout à 3 ce. avec de l'eau salée physiologique à o,85 de NaCI p. 100. On porte à l'étuve à 87'* pendant une demi-heure et on lit les résultats. L'hémolyse est d'autant plus complète qu'il y a davantage de léeithine libre dans le sérum employé, de sorte que la méthode peut servir à faire un dosage approximatif de la quantité de lécilhine que ce sérum contient.

Dans une autre série de tubes témoins on verse la même quantité uniforme de venin de cobra, 1 milligr. ; la même quantité d'hématies de cheval lavées et des proportions variables de o ce. o5, o ce. 08, o ce. I, etc., d'une solution de léeithine pure au dix-millième préparée comme il a été dit ci-dessus, dans Teau salée physiologique. On complète à 3 ce. et on porte également à l'étuve. On lit les résultats après une demi-heure.

Si le tube de la première série, contenant o ce. i du sérum à étudier, donne une hémolyse complète dans le même temps que le tube de la seconde série (contenant o ce. o5 de léeithine au dix-millième par exemple), on en déduit que i ce. de sérum renferme la quantité de léeithine contenue danse ce. 5 de la solution de léeithine au dix-millième, donc o gr. oooo5 de léeithine ou d'autres lipoïdes susceptibles d'activer le venin. La part de la léeithine dans cette activation peut être isolée par l'addition de chlorure de calcium qui empêche l'action activante des acides gras et des savons.

Les séries d'expériences que nous avons effectuées avec les méthodes qui précèdent nous ont permis d'établir les faits suivants :

I" Les sérums qui renferment de la léeithine, soit qu'on les ait chauffés à 58°, soit qu'on ait annihilé, par l'addition d'une quantité

suffisante de chlorure de calcium^ Tactiou des acides gras activanis qu'ils contiennent h l'état frais, révèlent la présence de cette l^cithine par l'aptitude qu'ils confèrent au venin de cobra d'hémolyser les hématies lavées.

a* On peut titrer approximativement la quantité de lécithine contenue dans les sérums en mesurant les quantités de sérum qui sont capables^ d'activer un poids déterminé de venin.

S"" La lécithine des sérums activants peut être déviée ou fixée soit par les bacilles tuberculeux ajoutés en quantité suffisante, soit par les solutions de tuberculine préparées à froid, de telle sorte que, lorsque ces sérums ont été mis pendant un temps convenable en présence des bacilles ou de la tuberculine, ils perdent la propriété d'activer le venin (5 mgr. de bacilles pesés à l'état sec peu vent fixer ogr.oooi de lécithine^ soit 2 p. loode leur poids).

4° Les sérums d'hommes ou d'animaux luberculeiix (non cachectiques) renferment une proportion importante de lécithine décelable par la réaction qui précède, alors que les sérums d'hommes ou d'animaux de mêmes espèces» sains, n'en renferment pas. Dans nos expériences^ jamais le sérum des nouveau-nés sains, non plus que celui des veaux, ne s'est montré, après i heure de chauffage à 58% capable d'activer le venin. Il en est de même pour les sérums des bovidés adultes qui n& réagissent pas à la tuberculine et pour celui d'hommes ou de porcs-sains. Tous ces sérums, chauffés à 58**, sont inaciifs.

Par contre, les sérums d'homme ou de bœuf tuberculeux, également chauffés à 58**, activent le venin, et là lécithine qu'ils renferment peut être déviée in vilro par les bacilles tuberculeux.

Mais les sérums de tuberculeux ne sont pas seuls à contenir de la lécithine : ceux des sujets normaux soumis à l'action des anesthésiques tels que le chloroforme ou Téther ; ceux des syphilitiques, nouveau-nés ou adultes, ceux des sujets atteints de méningite cérébro-spinale, des addisoniens, des déments, des paralytiques généraux, et peut-être ceux de beaucoup de malades atteints d'affections caractérisées par une altération plus ou moins profonde des cellules nerveuses ou des capsaies^ surrénales, en renferment également. Ils activent le venin de cobra comme le sérum des sujets tuberculeux. Il semble pourtant que la lécithine s'y trouve sous un état différent, car les bacilles tuberculeux ne peuvent pas la fixer.

Peut-être l'affinité si manifeste des bacilles tuberculeux et de la tuberculine (préparée à froid) pour la lécithine joue- 1- elle un rôle important dans la réaction générale fébrile et dans les réactions locales de la peau» ou des muqueuses (cuti et ophtalmo-réaction) qui apparaissent après les injections sous-cutanées ou les instillations de tuberculine sut les muqueuses. On constate en effet que, lorsqu'une solution de tubercu^ line a été laissée en contact à l'étuve pendant quelques heures avec un

sérum de cheval ou de chien préalablement chauffé i heure à 58** et riche en lécithine, de telle sorte que, dans le mélange, il reste encore après fixation un excès de lécilhine capable d'activer le venin, la tuberculine ainsi traitée n'est plus capable de provoquer Topbtalmo- réaction ; cependant sa toxicité ne semble pas diminuée pour les cobayes tuberculeux.

On peut se demander si ce n*est point à celle affinité particulière pour la lécithine des cellules nerveuses qu'il faut attribuer les accidents si caractéristiques delà méningite tuberculeuse etaussi la toxicité de la tuberculine pour les animaux sains lorsque cette substance est introduite directement dans le cerveau, tandis cju'ellecst inoffensive pour ces mêmes animaux sains lorsqu'on l'introduit sous la peau,, ou dans le péritoine, ou dans les veines.

En poursuivant nos expériences, nous avons pu constater avec L. MASsoLet C. GuÉRiN * que certaines espèces animales ont un sérum constamment lécithifère. Ce sont, dans l'ordre de richesse moyenne décroissante : le cheval, le chien, le rai, la chèvre, le mouton, le lapin.

Or ces espèces sont précisément les plus difficilement iuberculisables.

Par contre, le sérum de cobaye est très pauvre en lécithine ; celui de porc, de veau et de bœuf sain et, ainsi que nous l'avons vu précédemment, celui de nouveau-né et A'homme sain, nen renferment jamais. Ces espèces sont les plus facilement tuberculisables.

Il y a donc lieu de se demander :

1° Si la lécilhine qui existe constamment dans le sang de certains animaux sains est susceptible d'être yîx^e ou déviée par les bacilles tuberculeux et par la tuberculine préparée à froid ;

2** Si la luberculisation ou la tuberculinisation artificielle des animaux dont le sang ne contient pas de lécithine peut faire apparaître celle-ci dans le sérum.

Pour répondre à la première question, nous mettons en contact, dans une série de tubes à essai, des mélangés de i ce. d'une émulsion à 5 pour i.ooo de bacilles tuberculeux (pesés à l'état sec) dans l'eau salée physiologique, plus la dose du sérum à expérimenter qui s'est montrée capable d'activer, en i heure environ, o ce. 5 d'une solution de venin de cobra à i pour S.ooo ; ou bien i ce. d'une solution à 5 pour i.ooo de tuberculine préparée à froid avec la même dose de sérum. Les tubes sont portés à l'étuve à 87** pendant 2 heures et agités de temps en temps. On ajoute ensuite à chacun d'eux les globules rouges et le venin comme dans les expériences d'activation et l'on note, après des temps variables de i à 6 heures, si l'hémolyse se produit à la température du laboratoire.