III. — Une alexine titrée

I. HÉMATIES LAVÉES. — Pour les préparer, on emploie le plus généralement du sang de mouton ou de chèvre qu'on recueille dans un flacon stérile garni de perles de verre jusqu'au huitième environ de sa hauteur. On agile jusqu'à ce que la fibrine soit séparée et que le sang surnageant reste liquide. Ce sang défibriné est décanté avec précautions dans des tubes centrifugeurs, afin de laver les globules rouges pour les débarrasser aussi complètement que possible de sérum. On met dans chaque tube environ i/4 de sang en ayant soin de marquer le niveau d'un trait de crayon, et l'on ajoute 3/4 d'eau salée physiologique (à 8,5 de NaCl p. i.ooo) stérile. Les hématies sont séparées par cenlrifugation. On décante de nouveau le liquide surnageant et on le remplace par un égal volume d'eau salée physiologique. On remet les hématies en suspension, puis on reporte à la centrifuge. Cette opération est recommencée trois fois. Après la troisième décantation on verse dans le tube une quantité d'eau physiologique égale au volume primitif qu'occupait le sang complet défibriné. L'émulsion de globules ainsi obtenue est finalement diluée de moitié avec de l'eau physiologique et prête pour l'emploi.

On peut la conserver telle quelle pendant 2 à 3 semaines en glacière, à la température de + 2° à + 5<*, dans des tubes stérilisés bouchés à l'ouate, ou bien, comme l'a conseillé Armand-Delille, en l'additionnant immédiatement de i p. 5oo de solution normale de formol du commerce (à 4o volumes).

n. SÉRUM HÉMOLYTIQUE. — Pour obtenir un bon sérum hémolytique spécifique vis-à-vis des hématies (de mouton ou de chèvre) qui serviront à l'expérience, on inod'ule asepliquement, sous la peau d'un lapin, I centimètre cube de ces hématies, après les avoir lavées comme il a été dit ci-dessus.

Cette injection est répétée à la dose de 2 ce. au bout de cinq jours et une troisième fois à la dose de 2 ce. cinq jours plus tard.

LES € ANTICORPS » TUBERCULEUX 481

Cinq jours après la dernière injectioD, on saigne le lapin dans l'artère carotide ou fémorale ; on laisse coaguler le sang asepliquement et on en sépare le sérum. Celui-ci contient des hémolysines à la fois anii» mouton et antichèvre (de sorte que les hématies de chèvre ou de mouton peuvent être employées indifféremment). On le répartit dans de petits tubes qu'on scelle à la lampe et qu'on chauffe une demi-heure au bainmarie à 58* pour Vinactiver, c'est-à-dire pour détruire Falexine qu'il contient. L'un de ces tubes servira au titrage, qui est effectué de la manière que voici :

Titrage du pouvoir hémoly tique. — On dilue i ce. du sérum hémolytique dans 99 ce. d'eau salée physiologique et on verse successivement, dans une série de petits tubes à essai, o ce. 1,0 ce. 2, o ce. 3, etc., jusqu'à i ce. ou plus de cette dilution si c'est nécessaire. On complète tous les tubes au même volume (2 cent, cubes par exemple), avec de l'eau salée physiologique. On ajoute à chacun d'eux i/io ce. de sérum frais de cobaye (alexine), puis i goutte de l'émulsion d'hématies lavées de mouton ou de chèvre, préparées comme il a été dit précédemment.

On complète tous les tubes à 3 centimètres cubes avec de l'eau salée physiologique, en ayant soin de leur imprimer un mouvement de rotation entre les doigts pour bien laver leurs parois. Enfin on porte à Tétuve à 37** pendant une heure.

Si l'hémolyse commence à se produire dans le tube contenant o ce. 5 de la dilution de sérum hémolytique et qu'elle soit complète partout où ce sérum est en quantité plus grande, on dit que ce sérum hémolyse à la dose de occ. oo5 en présence de i/io ce. d'alexine fraîche de cobaye.

Dans chaque réaction de fixation il sera toujours indispensable d'employer une dose de sérum hémolytique au moins égale à 10 ou même 20 fois la dose minima hémolysante. La moindre trace d'alexine restée libre manifestera alors sa présence en dissolvant des hématies qu'une dose plus faible de sérum hémolytique eût laissées intactes. Un sérum hémolytique dont la dose minima hémolytique se trouve être de o ce. oo5 sera donc employé constamment, pour chaque tube, à la dose deo ce. I (non dilué).

On peut conserver pendant longtemps (plusieurs mois) à la glacière, en tubes scellés ou en flacons bien bouchés, des provisions d'un même sérum hémolytique. Sa valeur ne baisse que lentement. 11 sera bon toutefois d'en effectuer de temps en temps un nouveau titrage.

IIL ALEXINE. — La meilleure alexine est celle que fournit le sérum frais de cobaye. Ce sérum peut être extrait par centrifugalion du sang défibriné, recueilli aseptiquement par ponction du cœur ou par saignée dans la carotide.

l'iufbgtiom bacillaire ^^

482 PROCESSUS DE DÉFEmE ET DIAGNOSTIC

Dans tous les cas, il sera iadispensaUe dû titrer celte alexine axant de l'utiliser pour les expériences, car sa valeur est variable d'un cobaye à l'autre.

U faut savoir aussi qu'elle perd la moitié de son titre imijal si dUc reste diluée au vingtième de son volume primitif pendant une heure (temps nécessaire à la réaction de fixation), ainsi que Tout nKMitré L. Massol et V. Getsez ^.

Les màmea auteurs ont étudié avec soin Imfluence du vieiliissement sur la valeur de l'alexine. En conservant dix sérums de cobayes kt la glacfôre (de 4^ à 6°), ils otit vu que le pouvoir aleuque baissait rapidement dès le deuxième jour. Le 9*" jour un seul avait conservé 5o p. loo de sa valeur initiale; les autres seulement 13 à 87 p. 100. Après 16 jours ils avaient perdu 85 à go p. 100 et étaient donc devenus pratiquement inutilisables.

Par contre, des expériences inédites de L. Massol, faites dans mon laboratoire et que j'ai pu suivre, montrent qu'il est facile de coofierver pendant longtemps l'alexine dans on appareil frigorigène à la température de — 10 à — i5° (par exemple l'appareil Audiffren, deSu(- GRtiN, qui est d'un emploi très commode).

Pendant le premier mois, la baisse du pouvoir alexique des sérums frais de cobaye, conservés dans ces conditions, a varié de 3a i 5o p. 100. Mais, après 9 mois, les mêmes sérums avaient gardé de 20 à 33 p. 100 de leur valeur initiale.

L. Massol et NowACziKs&i ont encore indicpié un procédé qui lulentit d'une manière appréciable l'aflaiblissement du pouvoir alexique. Il consiste à ajouter au sérum frais un dixième de son volume d'eaù saturée de NaCl (36 gr. par litre). Ce taux de sel n'offre aucun inconvénient puisque, pour effectuer les réactions de fixation, on dilue le sérum dans l'eau salée physiologique. Il suffit de faire la dilution, au moment de l'usage, dans l'eau distillée^ pour restituer au sérum sa tonicité normale. Par cette méthode, le titre alexique reste intact pendant environ \o jours. Après 18 jours il possède encore 75 p. 100 de sa valeur et, après 25 jours, 25 p. 100.

Les indications qui précèdent montrent combien le titrage des alexinés, préalablement à leur utilisation, est nécessaire. Or, beaucoup d'expérimentateurs le négligentet il s'ensuit que les résultatsqu'ils obtiennent sont souvent entachés d'erreurs.

n faut donc déterminer avec le plus grand soin la dosemininm active. variable avec chaque alexine, qui permettra de déceler les plus faibles traces d'anticorps ou d'hémolysine. Il faut aussi se rappeler qu'après une heure de dilution sons le volume de 2 centimètres cubes, — c'està-dire pendant le temps nécessaire à la fixation, — cette dose minima