PREMIER MODE DE FORMATION DE L'ŒUF

De très bonne heure, l’ovocyte situé dans l’axe du gonophore, contre le spadice, acquiert une taille considérable (fig. xvrir); il a 40 de diamètre, alors que les ovocytes voisins ont à peine 12 y; son cytoplasme, très finement granuleux, se vacuolise dans sa portion centrale, lui donnant une structure alvéolaire, à mailles très fines, dans la partie périphérique.

Quelques éléments figurés, sous forme de grains basophiles, apparaissent dans son intérieur. Le noyau (fig. 1, pl. I) à considérablement augmenté de volume ; il à 15 p de diamètre, celui de l’ovocyte normal étant de 6 u

FiG. xvuI. Différenciation dans le gonophore femelle de l’ovocyte il est sphérique, bien déprivilégié qui donnera l’œuf définitif, x 240. limité par une membrane

nucléaire nette, sur laquelle sont fixés de nombreux fins grains chromatiques. Il possède un réseau à mailles serrées, sur lequel de fins granules chromatiques de même taille, à côté de grains plus gros. Enfin un gros nucléole de 4 y de diamètre, légèrement excentrique chez l’ovocyte normal, mais qui, ici, à émigré contre la membrane nucléaire.

Au stade suivant (fig. 2, pl. I), l’œuf a déjà 100 u de diamètre moyen ; sa face inférieure, la plus large, est intimement appliquée contre le spadice, par l’intermédiaire duquel il reçoit les matériaux nutritifs nécessaires à son développement. Quelques ovocytes voisins se sont fusionnés avec

lui, car dans l’intérieur de son cytoplasme, on reconnaît, quoique très profondément modifiés, quelques noyaux en Karyorhexis. La membrane de ces noyaux a complètement disparu et la chromatine, constituée de filaments moniliformes, se présente en quelques amas qui s’enchevêtrent et finalement se résolvent en fins granules, qui passent dans le cytoplasme de l’œuf, qui n’est plus nettement vacuolaire. Le noyau de l’œuf a quitté la position centrale qu’il avait au stade précédent, pour se rapprocher de la périphérie du côté supérieur : il a maintenant 24 u de diamètre. Son nucléole, sphérique et fortement chromatique auparavant, devient ovoide achromatique et prend une coloration grisâtre, un peu plus foncée sur les bords. C’est qu’en effet il est facile d'assister à l’émiettement de la sphère chromatique nucléolaire, en parcelles de différentes tailles, qui passent dans le suc nucléaire et renforcent la chromaticité générale du noyau.

Les ovocytes qui avoisinent immédiatement l’œuf, subissent

son influence. Leur contour devient moine apparent et leur FIG. XIX. Œui en He (17 mode de formation) noyau commence à dégénérer, avant la fusion. La membrane nucléaire disparaît, la chromatine plus colorée forme une dizaine de masses étoilées, à prolongements arborescents. Dans le nucléole, formant d’abord une sphère chromatique homogène, apparaissent de nombreux nucléolules, à centre plus clair que leur périphérie, puis ce nucléole disparaît sur place, sans laisser de trace visible. Dans le stade suivant (fig. 3, pl. I), nous voyons le passage du nucléole de l’œuf, à travers la membrane nucléaire. Il est done expulsé dans le cytoplasme, où nous le perdons de vue. Ce cytoplasme présente de nombreux éléments figurés, sous la forme de grains basophiles. Ce sont évidemment les pseudocellules du stade précédent, dont la chromatine complètement dégénérée, s’est réduite en grains plus ou moins visibles.

À partir de ce moment (fig. xix), l'œuf grossit par addition du cyto-

plasme des ovocytes voisins. Il s'étend, comme un amibe gigantesque, autour du spadice qu’il finit par entourer complètement. Toute la partie externe du gonophore présente encore des ovocytes qui seront finalement englobés. Les noyaux de ceux-ci, peu dégénérés, resteront très longtemps reconnaissables, constituant les pseudocellules. L’œuf complètement développé, s’entoure d’une membrane anhiste de 2 4 d'épaisseur, qui se colore comme la mésoglée. Appliqué intimement contre toute la surface digestive du spadice, l’œuf reçoit une grande quantité de matériaux nutritifs, qui augmentent considérablement son volume. Retenu extérieurement par la paroi du gonophore qui s’aplatit de façon à constituer une couche très mince, mais à 3 assises de cellules toujours reconnaissables, il exerce une pression très forte sur le spadice, qu’il refoule complètement vers la cavité du blastostyle. Le gonophore est, à ce moment, entièrement rempli par l’œuf qui à 1 mm. de diamètre. Son cytoplasme, très finement alvéolaire, contient de nombreux granules basophiles provenant de la dégénérescence complète, par karyorhexis, des noyaux des ovocytes englobés et enfin de nombreuses pseudocellules, provenant des noyaux légèrement dégénérés des derniers ovocytes englobés.

Le noyau de l’œuf complètement développé (fig. 4, pl. D) s’est encore rapproché de la périphérie, dans le plan médian du gonophore. Il mesure maintenant 50 L de diamètre et est à 10 u de distance de la surface. Il est entouré d’une auréole cytoplasmique très fine. La membrane nucléaire, bien colorée, porte de nombreux grains chromatiques, très petits. Un réseau délicat, à travées nombreuses, contient un suc nucléaire incolore et porte une infinité de granules chromatiques en chaîne ou isolés. Il y à un certain nombre (une vingtaine au moins) de nucléoles chromatiques sphériques, ayant 1 u 5 de diamètre. Certains d’entre eux deviennent incolores, leur chromatine passant, en fins grains, sur les travées du réseau. Finalement, on peut voir le noyau de l’œuf renfermant ces mêmes nucléoles devenus complètement achromatiques.

b) SECOND MODE DE FORMATION DE L'ŒUF

Ce mode de formation est beaucoup plus fréquent que le précédent. L'œuf commence déjà à se former, que la partie inférieure des deux culsde-sac latéraux du gonophore, est encore remplie d’ovogonies en multiplication active. L’on voit, en effet (fig. xx), à la partie supérieure d’abord,

puis sur les parties latérales du gonophore, tout contre le spadice, un certain nombre (cinq au plus) de zones cytoplasmiques séparées et à contours très nets. Elles ressemblent à des ovocytes qui auraient doublé de volume et contiennent 2 ou 3 noyaux qui s’accolent l’un à l’autre, donnant à s’y méprendre l'illusion d’un noyau d’ovocyte, divisé par amitose. En regardant attentivement, l’on voit ces noyaux chevaucher les uns sur les autres, et d’ailleurs à un stade plus avancé on voit (fig. xx), dans une de ces aires cytoplasmiques, un plus grand nombre de noyaux accolés les uns aux autres, comme des grains de raisins. Chaque aire cytoplasmique, est donc formée d’abord, par la fusion du cytoplasme de 2 ovocytes dont les noyaux légèrement dégénérés persistent un certain temps.

Ces aires grossissent, non par vacuolisation de leur cytoplasme, mais par addition, ou de nouveaux 0vo-

cytes isolés, ou de petites aires formées postérieure- MUR ee ie ne. cytoplasmiques ment. Dans chacune d’elles,

le noyau central subit peu de modifications. Il se présente (fig. xx), entouré d’une couche cytoplasmique très fine, contenant des grains basophiles expulsés du noyau. La membrane légèrement plissée est bien colorée, son réticulum peu visible, tandis que le nucléole forme une sphère chromatique très homogène et non vacuolisée. Le suc nucléaire est incolore et la chromatine, rassemblée en quelques blocs irréguliers, présente des arborescences qui s’entrecroisent.

Les autres noyaux des ovocytes englobés subissent une dégénérescence immédiate et complète. La chromatine du nueléole passe dans le noyau en grains plus ou moins gros ; la membrane disparaît et ce noyau se résout en un certain nombre de sphérules de différentes tailles, qui se transforment finalement en granules.

Bientôt ces aires cytoplasmiques absorbent tous les ovocytes de la partie centrale et alors le spadice est coiffé par ces aires, accolées l’une à l’autre, mais séparées par une lame anhiste (fig. xx). A ce stade, le gonophore contient à sa base 5 ou 6 aires plasmodiales, possédant chacune un noyau. Chaque aire donne l'impression d’un œuf parfait, avec sa vésicule

F1G. xxI. Les zones cytoplasmiques se sont accolées, mais restent séparées par [une membrane anhiste. X 80.

et sa tache germinative. Ces aires sont recouvertes extérieurement par une calotte d’ovocytes, non encore transformés. Ceux-ci ne tardent pas cependant à se fusionner, le plus souvent deux à deux et à être finalement englobés. Comme dans le premier stade de formation, leurs noyaux ne dégénéreront pas complètement et constitueront les pseudocellules. L’œuf a alors la forme d’une calotte épaisse, qui recouvre le spadice et est ainsi divisé entièrement, par des rayons complets, allant du spadice à

l'épithélium sous-ombrellaire, en 5 ou 6 tranches très régulières. La fusion de ces aires plasmodiales entre elles commence au niveau du spadice, et s'étend vers l’extérieur (fig. xxu). Pendant ce temps, la nutrition de l’œuf excessivement active augmente beaucoup son volume et l’œuf, ne pouvant s'étendre extérieurement, repousse le spadice et finit par le refouler complètement dans la cavité gastrique du blastostyle. À ce moment, les membranes anhistes de séparation des différentes aires plasmodiales ont disparu.

L'un des noyaux des ovocytes, situé dans le plan de symétrie

du gonophore à subsisté, sans altération FIG. XXII. Fusion des aires plasmodiales incomplète. x 80. sensible. Il à aug-

menté de volume et prend l'aspect caractéristique, déjà décrit, du noyau de l’œuf complètement développé.

$ IT. — Les pseudocelluies

Chez la Myriothèle, les pseudocellules caractéristiques ne s’observent que dans l’œuf ayant presque achevé son développement. Dans les stades de début, de l’un quelconque des modes de formation de l’œuf, son cytoplasme est toujours finement granuleux. On trouve rarement des stades (fig. 10, pl. T) où l’on puisse reconnaître des noyaux d’ovocytes fusionnés. La dégénérescence de ces noyaux est excessivement rapide et la transformation de la chromatine en de nombreux granules, qui s’éparpillent rapidement dans le cytoplasme, a pu passer inaperçue à beaucoup d’auteurs, qui ont décrit une vacuolisation intense du cytoplasme augmentant jusqu’à 100 fois le volume de l’œuf. En réalité, la vacuolisation est bien peu

apparente et l'augmentation de volume provient surtout de l'apport du cytoplasme des ovocytes fusionnés.

Lorsque les aires plasmodiales ont atteint une taille assez considérable, les pseudocellules dégénèrent moins hâtivement, ne se résolvent plus en granules très nombreux et très petits, mais en sphérules de diamètre inégal qui se disséminent dans l’aire plasmodiale. Ces sphérules, entourées d’une auréole claire, remplies de liquide peu colorable, contiennent des grains chromatiques de différente taille, sur un réseau à mailles très serrées. Les grosses sphérules se subdivident en un certain nombre de petites sphérules, qui s’éparpillent dans le cytoplasme de l’œuf, constituant un matériel vitellin de réserve. Les pseudocellules qui persistent pendant un certain temps dans le cytoplasme de l’œuf complètement développé, sont formées par les noyaux de la couche corticale des ovocytes du gonophore. Ces noyaux subissent très peu de modifications immédiates. Leur nucléole, coloré d’abord d’une façon intensive, se décolore à son centre, toute sa chromatine passant dans le noyau, dont la chromaticité augmente, au point de former une sphère homogène, très réfringente. À ce stade, le noyau de l’ovocyte, sous forme de boule noire, n’est plus reconnaissable. Comme stade intermédiaire, on peut voir, à la périphérie du noyau, la condensation de la chromatine, sous forme d’anneau avec une vacuole centrale :claire.

L’œuf ayant terminé son grand accroissement, se présente donc comme une masse sphérique très grande (1 mm. de diamètre), à noyau complètement excentrique. Vu à un fort grossissement, son cytoplasme très finement alvéolaire, contient de très nombreux granules basophiles irréguliers, se fragmentant en granules plus petits, puis des corps arrondis de 2 y de diamètre, ayant tout à fait l’aspect de petits noyaux. Ils possèdent un globule chromatique central, entouré d’une zone claire, bien limitée du cytoplasme environnant par une membrane très nette. Ces corps à aspect de noyaux proviennent de la division d’une pseudocellule. En effet, dans la figure 15, planche I, on voit ‘une masse centrale arrondie de 15 u de diamètre. C’est une pseudocellule dont la chromatine condensée s’est divisée en petits blocs arrondis et égaux disposés symétriquement, ce

- qui pourrait faire croire à un stade de multiplication de sporozoaire.

Une petite quantité de cytoplasme s’est individualisée autour de chacun d’eux, devenant plus dense à la périphérie. La membrane de la pseudocellule disparaît, tous ces pseudo-noyaux sont mis en liberté et s’'éparpillent dans la partie centrale de l’œuf, la partie périphérique con-

tenant les pseudocellules, à l’état de boule chromatique condensée et homogène. Ces pseudo-noyaux ne constituent pas, comme les granules basophiles du cytoplasme, un matériel nutritif mort. Comme nous le verrons bientôt, ce sont des formations qui croîtront et par un vrai bourgeonnement donneront naissance aux globules vitellins de l’œuf.

$ IIT. — Historique et critique

Etant donné son volume définitif relativement considérable, l’œuf de la Myriothèle paraît être un matériel de choix, pour l’étude de l’ovogénèse. Cependant bien peu de chercheurs ont décrit la formation de l’œuf et aucun n’a vu les phénomènes si importants de la maturation et de la fécondation. |

ALLMAN (1875) voit les ovocytes ayant acquis leur taille définitive émettre par leur cytoplasme des expansions irrégulières, semblables à des pseudopodes qui les relient l’un à l’autre, se raccourcissent de plus en plus et ainsi les masses qu'ils relient finissent par se fusionner ensemble en une masse cytoplasmique commune. Dans cette masse, il y a de nombreux noyaux avec nucléoles très nets, qui sont les noyaux des ovocytes primitifs. La fusion commence par les ovocytes en contact immédiat avec le spadice, formant ainsi plusieurs plages accolées sur toute sa surface ; puis les ovocytes placés en arrière subissent le même sort. Il se forme, de la sorte, une dizaine de plages à forme ovale, qui se détachent du spadice et ne remplissent pas complètement le gonophore, laissant entre elles et la paroï externe un résidu d’ovocytes dégradés, utilisés plus tard pour la formation de l’œuf définitif. A la périphérie des plages, se sont développés, sous forme de poils transitoires, de minuscules processus ou petits pseudopodes, utilisés pour l’absorption des matières nutritives. En définitive, ces plages cytoplasmiques accrues et fusionnées forment un grand plasmode, qui remplit la cavité du gonophore et contient beaucoup de noyaux, dont les uns deviennent très finement granuleux, les autres complètement homogènes.

ALLMAN décrit donc seulement, le second mode de formation de l'œuf par aires plasmodiales ; le premier, le plus important étant passé inaperçu. Je dis le mode le plus important, parce que c’est celui où l’on suit, pas à pas, les diverses transformations, qui font du noyau de l’ovocyte privilégié, le noyau de l’œuf définitif. C’est pourquoi d’ailleurs, il paraît ne pas avoir vu ce noyau, puisqu'il n’en parle pas.

Les poils signalés par ALLMAN à la surface des zones cytoplasmiques en accroissement et qui assurent leur nutrition n'existent pas et sont sûrement des artefacts. Ces zones, se mettent au contraire, de plus en plus en contact immédiat et complet avec le spadice, les matières nutritives passant ainsi directement, par osmose, à travers la mésoglée, de l’endoderme du pédoncule qui en est bourré dans leur intérieur. De sorte, que de très bonne heure, ces zones coiffent complètement toute la surface digestive du gonophore, assurant ainsi d’une façon parfaite la nutrition de l’œuf.

Pour KOROTNEFrF (A.) (1880), lorsque le gonophore a pris sa forme définitive, les ovocytes ont leurs protoplasmes qui paraissent confluer ensemble. Une cellule située au sommet du spadice acquiert un cytoplasme plus granuleux et plus foncé qui la différencie des autres ; son noyau, sans réseau plasmatique, s'accroît et son nucléole se vacuolise. Cette cellule grossit beaucoup, d’abord bien délimitée, puis se fusionne avec les cellules voisines centrales, les périphériques se fusionnant les dernières, pour donner l’œuf définitif.

Quelques années plus tard, KoROTNEFF (1888) distingue dans le gonophore adulte deux sortes de cellules : les cellules germinatives et les cellules vitellines. Une des cellules germinatives prévaut sur les autres : c’est la cellule-mère qui à un noyau énorme, les autres cellules germinatives forment deux corps agrandis à la base de la cellule-mère. Le noyau des cellules vitellines change d’aspect, le nucléole devient réfringent, s’entoure d’un cercle clair et présente un globule amorphe, qui devient boule graisseuse, pendant que les cytoplasmes se fusionnent, formant ça et là des plasmodiums. Les cellules germinatives deviennent énormes, leurs noyaux ayant tendance à se dégrader et à disparaître, sauf celui de la cellulemère, qui se place au sommet du gonophore, au-dessous de son ouverture. Les noyaux des cellules vitellines forment les globules vitellins de l’œuf ; quelques-unes de ces cellules conservent leur apparence primitive, mais se fusionnent bientôt avec les autres et leurs noyaux ne sont pas autre chose que les « Pseudozellen de KLEINENBERC. »

En résumé, il y a dans le gonophore de la Myriothèle des éléments germinatifs et des éléments witellins. Les éléments germinatifs, au nombre de 20, proviennent d’une cellule germinative-mère, mais un seul donne la vésicule germinative, les autres disparaissent. Les noyaux des cellules vitellines, ou pseudocellules, se transforment en globules graisseux ou vitellins. Tout cet ensemble forme l’œuf définitif, avec sa vésicule germinative.

Donc, la vésicule germinative de l’œuf est le noyau d’une cellule germinative, son plasma formatif est le plasma des autres cellules germinatives et les substances de réserve, les cellules vitellines.

Dans son premier travail, KOROTNEFF (1880) n’a observé que le premier mode de formation de l’œuf, tandis que dans son deuxième (1888), il décrit seulement le second ; il ne s’est donc pas rendu compte que ces des modes de formation existaient en même temps. Les ovocytes qui remplissent les gonophores sont parfaitement séparés (fig. XVII et XVII) et non à protoplasme confluent, comme le pense KoRoïNerr. D'autre part, le noyau de l’ovocyte privilégié, présente un réseau plasmatique à mailles très serrées, qu’il nie catégoriquement. Quant aux éléments contenus dans le gonophore femelle adulte, ce sont des ovocytes qui ont tous même structure et même valeur. Seuls, certains ovocytes privilégiés, placés contre le spadice, formeront le point de départ des aires plasmodiales, parce qu’ils reçoivent directement, en grande quantité, les matières nutritives assimilables. C’est donc leur situation spéciale et non leur structure différente qui les désigne comme point de départ de la formation de l’œuf.

Harpy (1891) voit, assez tard, dans le gonophore femelle deux ou trois cellules germinales, qui deviennent plus larges et plus proéminentes que les autres ; puis, lorsque le gonophore a acquis une structure bien définie et qu’il renferme une grande quantité de matière nutritive, alors grâce à une cause indéterminée, une de ces cellules devient plus volumineuse en incorporant les autres. HARDY n’a pas suivi pas à pas la formation de l’œuf, de sorte que sa description est très incomplète. Sans faire de distinction avouée, en cellules germinatives et cellules vitellines, il parle, comme point de départ, de deux ou trois cellules germinales qui grossissent, une de celles-ci devenant l’œuf définitif.

LABBÉ (A.) (1899) suppose le gonophore femelle de la Myriothèle complètement développé et plein d’ovocytes ne formant pas un tissu, mais libres. L’œuf se forme de trois façons différentes : 1° par plasmodium ; 20 par aires plasmodiales ; 3° par plasmolyse. Ces trois modes se rattachant l’un à l’autre, par des transitions.

19 Par PLasmopium. Le gonophore est d’abord rempli d’ovocytes libres, qui augmentent de nombre, mais ne s’accroissent pas : ils ont des mouvements amœæboïdes actifs, puisque d’après WEISSMANN et DE VA- RENNE, ils ont émigré de loin. D’abord, leurs pseudopodes se fusionnent, laissant entre eux des vacuoles. Certains noyaux grossissent et se divisent par amitose, les autres dégénèrent par karyolyse. Finalement, un seul

OVOGÉNÈSE CHEZ LA MYRIOTHÈLE ET LA TUÜBULAÏRE 16

persiste, c’est la vésicule germinative de l’œuf ; les noyaux dégénérés sont les pseudocellules.

29 PAR ATRES PLASMODIALES. — (C’est le cas le plus fréquent. Au voisinage du spadice, en 3 ou 4 endroits différents, quelques ovocytes se fusionnent et forment 3 ou 4 aires plasmodiales, augmentant de volume en se vacuolisant, et devenant ainsi 100 fois plus grandes que leur volume primitif. Leurs noyaux, à l'exception de 1 ou 2, qui deviennent très gros, se résorbent par kKaryolyse, formant les pseudocellules. Le noyau, qui persiste, devient la vésicule germinative. En réalité, il y a addition de cytoplasme et non phagocytose. Donc, pas de distinction en cellules germinales et cellules vitellines, le gonophore ne contenant que des ovocytes. Ces aires plasmodiales, présentent d’abord une phase d’accroissement propre, Sans pseudopodes, puis une phase d’accroissement par fusion des ovocytes, avec nombreux pseudopodes, protoplasme vacuolisé et noyaux en régression. Finalement, on a une amibe gigantesque, entourant le spadice, et l’œuf est mûr, lorsque la fusion est complète,

30 Par PLrasmorysg. Ici, les ovocytes qui entourent le spadice et ceux qui sont situés sur le pourtour du gonophore sont intacts et par leur fusion constituent le plasma formatif de l’œuf, dont tous les noyaux dégénèrent, sauf un seul, qui devient la vésicule germinative. Les autres ovocytes subissent une plasmolyse, accompagnée de karyolyse, et donnent le matériel nutritif.

La plasmolyse peut être totale, en ce sens que tous les ovocytes du gonophore entrent en plasmolyse ; alors, leurs cytoplasmes s’additionnent et se reconstituent après, pour donner le cytoplasme formatif de l’œuf. Quant aux pseudocellules, LABBÉ se rallie à la théorie, qui les fait dériver des noyaux des ovocytes par karyolyse. Ces noyaux peuvent se diviser par amitose spéciale : pas de centrosome, et il y a division du noyau et division du karyosome indépendantes. Cette division peut avoir lieu plusieurs fois de suite et donner des ovocytes à 3 ou 4 noyaux. La chromatine, dans les pseudocellules, peut se condenser en masse réfringente et homogène, se fragmenter en plusieurs sphérules, se condenser en un anneau.

En résumé, LABBÉ conclut que l’œuf de la Myriothèle est plasmodial, la phagocytose n’intervenant que pour les noyaux des ovocytes, qui donnent les pseudocellules. Le noyau de l’ovocyte privilégié est dans l’axe du gonophore, et les ovocytes se fusionnent, sous l'influence d’une attraction : cyto ou adelphotactisme.

On ne peut, dit-il, ramener le mode de formation de l’ œuf de la Myriothèle au cycle normal de l’ovogénèse des Métazoarres.

Des trois modes de formation de l’œuf décrits par LABBÉ, je n’ai moi-même observé que les 2 premiers, sur lesquels je suis à peu près de son avis. Je ne puis admettre, que les ovocytes ont au début, une structure très voisine de celle des cellules somatiques, et que ces ovocytes augmentent de nombre dans le gonophore. Ce que LABBÉ appelle des ovocytes, c’est sans nul doute des ovogonies, qui ressemblent en effet au début aux cellules endodermiques. Les ovocytes formés prennent une structure caractéristique dans le gonophore, et n’augmentent plus en nombre, mais s’accroissent. Ils remplissent la cavité du gonophore, se pressent mutuellement, en prenant la forme polygonale et ne présentent jamais de mouvements amoeboïdes, car ils ont été formés sur place et l’émigration de WEissmAx et de DE VARENNE, ne peut s’appliquer à eux.

Quant à la présence de plusieurs noyaux dans l’ovocyte expliquée par l’amitose, je pense plutôt que ces noyaux multiples proviennent de la fusion de plusieurs ovocytes ; d’abord, parce que toujours les noyaux accolés chevauchent les uns sur les autres et le cytoplasme qui les entoure est plus volumineux, ensuite parce que je n’ai jamais vu de noyau allongé en train de s’étrangler, ce qui me paraît extraordinaire, étant donné le grand nombre d’ovocytes à noyau double que j’ai pu examiner. Enfin les 2 noyaux, provenant de la division amitotique supposée, ont toujours un gros nucléole chromatique. Si dans une coupe déterminée un seul noyau sur les deux présente cette tache germinative, on est absolument sûr que, sur la coupe précédente ou sur la coupe suivante, on trouve la tache germinative de l’autre noyau, Or, dans l’amitose classique, le karyosome passe le plus souvent tout entier [dans l’un des produits, l’autre formant plus tard un nouveau karyosome. De plus, on trouve quelquefois de petites zones cytoplasmiques avec 6, 7 ou 8 noyaux accolés l’un à l’autre et non dégénérés. Il faudrait supposer qu'ici l’amitose s’est répétée successivement plusieurs fois. Pour toutes ces raisons, j’ineline à penser que l’amitose des ovocytes n'existe pas, qu’il y à simplement fusion hâtive de 2 ou plusieurs ovocytes en maïnts endroits du gonophore et que leurs noyaux par chimiotactisme s’accolent les uns aux autres, puis dégénèrent par karyorehxis et non par karyolyse. Cependant, les figures de LABBÉ chez la Myriothèle et celles de DorLEIx (1896) chez la T'ubulaire paraissent bien démonstratives.

Les aires plasmodiales s’accroissent toujours par fusion d’ovocytes.

Si, en effet, le premier aspect paraît être une phase d’accroissement propre, c’est parce que les noyaux des ovocytes englobés dégénèrent par karyorhexis dans un laps de temps très court ; malgré cela, on tronve toujours des traces de pseudocellules et des sphérules, ou des grains basophiles de différentes tailles, phases intermédiaires de la destruction des noyaux. Au contraire, dans la deuxième phase d’accroissement par fusion d’ovocytes de LABBÉ, les noyaux dégénèrent très lentement ou ne dégénérent plus et l’œuf contient alors un grand nombre de pseudocellules à la périphérie, tandis qu’elles sont absentes à la partie centrale.

Quant à la formation de l’œuf par plasmolyse, je n’ai jamais observé rien de semblable. Les ovocytes, qui sont situés sur le pourtour du gonophore, sont d’abord presque intacts, mais ne contribuent, pas plus que les autres, à la formation du plasma formatif de l’œuf. Au contraire, l’ovocyte privilégié et les ovocytes qui entourent le spadice s’accroissent dès le début, par fusion, pour constituer les aires plasmodiales. Quant au matériel nutritif central, ce n’est pas, comme dit LABBÉ, du matériel mort, réduit à l’état de balles vitellines, mais un matériel bien vivant, que nous verrons se multiplier par accroissement, suivi de division.

Tous les auteurs précédents ont, avant tout, dans la formation de l’œuf, étudié l’évolution du cytoplasme. La plupart d’entre eux se contentent de dire que le noyau de l’ovocyte privilégié devient la vésicule germinative de l’œuf définitif. Mais ce noyau a, au point de vue cytologique, une évolution très intéressante qui le distingue nettement du noyau de l’œuf des autres animaux.

Nous devons considérer le gonophore femelle adulte, rempli d’éléments différenciés, tous à peu près égaux, qui sont les ovocytes I.

L’ovocyte I subit, dans l’ovogénèse en général, le grand accroissement. Pour cela, son noyau prend la structure du repos. Ici, la période de grand accroissement est représentée par la fusion des ovocytes et celui-ci est fini, lorsque tous les ovocytes fusionnés constituent l’œuf définitif. Mais, dès le commencement de cette fusion, la tache germinative perd sa chromatine, qui passe dans le noyau. Cette tache devient achromatique et est expulsée dans le cytoplasme. Deviendra-t-elle, comme certains le supposent (O0. Herrwi@ (1894), WAstELEWSKY (1892), KARSTEN (1983)) le centrosome, qui pénétrera à nouveau dans le noyau, au moment de sa préparation à la réduction chromatique ? Nous n’en savons rien. Dans tous les cas, dans le noyau de l’œuf complètement formé et qui s’est très rapproché de la périphérie, nous retrouvons un grand nombre de nucléoles

chromatiques, qui deviennent achromatiques, en perdant leur chromatine et se présentent, sous forme de petites sphères grises, dispersées très régulièrement dans le noyau.

Il m’est donc impossible d’admettre la conclusion de LABBÉ qui prétend qu’on ne peut ramener le mode de formation de l’œuf de la Myriothèle au cycle normal de l’ovogénèse des Métazoaires. LABBÉ aurait été moins affirmatif, s’il avait étudié l’ovogénèse de la Myriothèle jusqu’à la maturation, par l’expulsion des globules polaires. Il aurait alors eu la fin du cycle normal de l’ovogénèse, avec l’ovocyte IT et l'œuf mûr.

$ IV. — Conclusion

En résumé, les ovocytes I qui remplissent le gonophore femelle adulte ont été formés sur place et ne sont pas amœæboïdes.

L'œuf se forme suivant deux modes différents : 1° par vacuolisation et accroissement par fusion d’un ovocyte, déterminé par sa situation, dans l’axe du gonophore. Cette fusion se fait progressivement, en commençant par les ovocytes voisins du spadice, dont les noyaux dégénèrent complètement et se résolvent en sphérules et en granules très petits.

Il reste une écorce externe d’ovocytes qui se fusionnent tard et dont les noyaux peu dégénérés constituent les pseudocellules.

La vésicule germinative de l’œuf est le noyau de l’ovocyte privilégié, qui à grossi et évolué.

20 Par formation d’aires plasmodiales provenant chacune de la fusion de plusieurs ovocytes, voisins du spadice. Ces aires fusionnent les ovocytes voisins, s'appliquent les unes contre les autres, séparées par une lame anhiste. Dans chaque aire, un noyau conserve sa structure primitive, les autres dégénèrent. Comme dans le mode précédent, les pseudocellules sont constituées par les noyaux de l’écorce externe d’ovocytes fusionnés les derniers. Finalement, tous les noyaux dégénèrent. sauf celui de l’aire plasmodiale qui se trouve dans l’axe du gonophore ; il devient la vésicule germinative de l'œuf. L’œuf est alors divisé en 7 ou 8 quartiers, à peu près égaux et réguliers séparés par des lames anhistes. La disparition de ces lames se produit du spadice vers l'extérieur. Seule, persiste l'enveloppe anhiste secrétée par l’œuf et qui l’entoure complètement. Il peut y avoir fusion hâtive d’ovocytes, avec noyaux accolés qui donnent l'illusion d’une amitose.

Les pseudocellules sont les noyaux des ovocytes fusionnés pour cons-

tituer l'œuf définitif. Ils dégénèrent plus ow moins hâtivement par karyorhexis. Dans la première partie de la formation de l'œuf, la dégénérescence est complète et se produit très tôt, produisant des sphérules ou des granules très petits. Dans la deuxième partie, la dégénérescence est incomplète et les noyaux sont toujours reconnaissables un certain temps. Ils se transforment en une masse chromatique réfringente. Certains d’entre eux ont leur masse chromatique se divisant en petites sphères qui s’entourent d’une zone claire, donnant ainsi l’aspect de petits noyaux accolés qui par rupture de la membrane de la pseudocellule, s’éparpillent dans le centre de l’œuf et formeront plus tard en s’accroîssant et se multipliant par division, le matériel vitellin de l’œuf mûr. Il est donc évident, que la formation de l’œuf de la Myriothèle reproduit le cycle normal de l’ovogénèse des Métazoaires. Dans le gonophore jeune, le plancher du nodule médusaire est formé de cellules progerminales, qui par multiplication donnent naissance aux ovogonies. Celles-ci se multiplient toujours par mitose et leur dernière génération donne l’ovocyte I. Les ovocytes I remplissent le gonophore femelle adulte. Ils dégénèrent tous, sauf un qui donne l’œuf. C’est le stade de grand accroissement.

à CHAPITRE VI MATURATION DE L’ŒUF

$ I. — Généralités

Aucun des auteurs précédents. qui ont fait l’étude de la Myriothèle, n’a observé les phénomènes de la maturation et de la fécondation de l'œuf. J’ai été moi-même, pendant longtemps, dans l’impossibilité de les étudier, malgré la confection et l'observation d’un très grand nombre de coupes, sur des sujets récoltés aux diverses époques de l’année. J’ai été ainsi amené, devant ces résultats négatifs, à penser que la maturation et la fécondation de l’œuf de la Myriothèle devaient se faire la nuit, et dans un laps de temps relativement court. Mes prévisions se trouvèrent justifiées, car une récolte de matériel faite à la marée de nuit du 19 décembre 1922, avec fixation sur place, me donna la presque totalité des stades de la maturation et de la fécondation qui me manquaient. Je puis

done en déduire, avec quelque certitude, que pendant la période d’hiver, où le gonosome de la Myriothèle porte de très nombreux gonophores, la maturation de l’œuf et sa fécondation se produisent pendant la première partie de la nuit. C’est donc à la marée de nuit qu’on doit aller les chercher et les fixer sur place, si l’on veut avoir ces stades si intéressants. Par conséquent, rien d’extraordinaire à ce que ALLMAN, KOROTNEFF, HARDY et LABBÉ ne les aient jamais rencontrés.

$ IL. — Formation du premier globule polaire

Lorsque l’œuf a atteint son complet développement, il est entouré directement par une membrane anhiste de 3 1 d'épaisseur que son ectoplasme à secrétée et sur laquelle repose l’épithélium sous-ombrellaire, réduit à une traînée cytoplasmique, avec quelques noyaux aplatis et isolés, de loin en loin. Sous l’action du fixateur et de la déshydratation qui suit, le cytoplasme de l’œuf plus aqueux que la membrane anhiste qui le recouvre s’est séparé d’elle en se contractant, laissant un vide circulaire, qui se creuse en fossé, en face du noyau, qui est recouvert d’une zone cytoplasmique plus finement granuleuse et partant plus délicate.

La section du noyau (fig. 5, pl. [) se présente sous la forme d’un triangle équilatéral, à sommets arrondis. Il est de taille relativement considérable, mesurant 40 & de hauteur. Sa membrane, très visible, est parsemée de grains basophiles nombreux. A l’intérieur, un réseau à mailles serrées, porte une infinité de granules chromatiques, à contours anguleux, mais de taille à peu près semblable, présentant une coloration plus ou moins accusée. On y trouve encore quelques sphérules arrondies, plus grosses que les grains et qui sont de petits nucléoles ayant perdu leur chromatine et sur le point d’être expulsés dans le cytoplasme. Autour du noyau, des sphérules de différentes tailles provenant de la fragmentation des pseudocellules, qui se réduisent elles-mêmes en grains d’abord réunis qui s’éparpillent ensuite. Sur une des faces du noyau (fig. 5, p. L), à très peu de distance de la partie extérieure de sa membrane, apparaît un grain très basophile. Autour de lui, se forme une petite sphère claire, de laquelle partent des rayons d’abord rares et peu visibles, puis nombreux, formant une irradiation très nette. C’est l'appareil centrosomien ou centrosome, composé du grain coloré ou centriole, de la sphère et des rayons qui constituent l’aster.

D'où provient ce centrosome ? Se forme-t-il aux dépens du cyto-

plasme, du noyau, ou du nucléole ? Chacun de ces lieux d’origine à de nombreux partisans.

Lorsque le centrosome apparaît chez la Myriothèle, la membrane nucléaire est intacte sur toute son étendue, laissant ainsi supposer qu'il a pris naissance dans le cytoplasme. Cependant, étant donné l’évolution du nucléole du noyau de l’ovocyte, pendant la préparation à la maturation, il se peut que le centriole soit formé par un des grains de division du nucléole. Nous avons vu en effet le nucléole, d’abord très basophile chez l’ovocyte, formant une sphère homogène de chromatine. Puis ce nucléole va devenir achromatique par passage de la chromatine en fragments reconnaissables dans le noyau, enfin expulsion d’une partie de ces grains dans le cytoplasme qui l’entoure. Il aurait donc une origine nucléaire comme cela semble avoir été vu dans un certain nombre de cas chez les Métazoaires (HERMANN (1889), CARNOY et LEBRUN (1897), Dorzæein (1897), GOLDSCHMIDT (1902).)

Au stade suivant (fig. 6, pl. I), les rayons de l’aster du centrosome, arrivent au contact de la membrane nucléaire. Cette membrane apparaît alors, en certains points, comme digérée, rongée par ces rayons qui la traversent et l’irradiation s'enfonce dans l’intérieur du noyau. En ce point, la membrane n’est plus visible. L’aster s’accroît et pénètre de plus en plus profondément, dans le réseau de linine. Les rayons, paraîssent se réunir avec les travées du réseau et grandir à ses dépens. Finalement, toute la figure astérienne achromatique est placée au centre du noyau. A ce moment. la membrane nucléaire, très nette au début, devient de plus en plus indécise et disparaît. Le centriole unique se divise en deux petits grains égaux, d’abord accolés l’un à l’autre, puis qui se séparent, restant toujours réunis par un mince petit filament achromatique ou centrodesmose. L’aster unique et formé de longs et nombreux rayons, commence à se dédoubler, chacun des deux centrioles devenant un centre dynamique, d’où partent les rayons. Déjà, le petit filament achromatique qui réunit les deux centrioles s’allonge, s’épaissit en son milieu, et se subdivise en fibrilles, formant un tonnelet, première ébauche du fuseau.

A ce stade, la direction du fuseau est parallèle à la tangente au point le plus rapproché de la périphérie de l'œuf. Ce n’est qu’ensuite, en se déplaçant pour mettre un de ses deux pôles au contact avec la surface de l'œuf, qu’il prend une direction perpendiculaire à la tangente, c’est-àdire radiaire. Mes observations m’invitent à interpréter la figure fusoriale de la façon suivante : l’aster primitif se formant dans le cytoplasme de

l'œuf, la sphère et ses rayons sont d’origine cytoplasmique, alors que le centriole très chromatique peut être d’origine nucléaire.

Arrivé à ce point, mes observations présentent une solution de continuité bien regrettable. Dans la figure 6, planche I, le fuseau n’est pas complètement développé. Aucun chromosome n’est visible. Le noyau, dont la membrane a complètement disparu, est encore reconnaissable, formant un nuage sombre, à grains chromatiques, à contours irréguliers, et de dimensions différentes : des grains relativement gros, nombreux, fortement colorés en noir, puis toutes les dimensions intermédiaires jusqu'aux granules avec toute la gamme de coloration décroissante, du noir au gris. On à l’impression très nette, qu’une partie de la chromatine du noyau passe dans le cytoplasme. Et d’ailleurs, cette impression se trouve confirmée, si l’on tient compte, du volume du noyau avant la division (40 u de diamètre), et après l’expulsion du premier globule polaire (8 y de diamètre). Le même phénomène, à été bien démontré dans l’œuf de Cerebratulus marginatus par KoSTANECKI (1902) et dans l’œuf de Chætopterus par LILL:E (1906).

Il m’a été impossible, malgré l’examen approfondi de très nombreuses coupes, de trouver la première mitose de maturation. Je ne puis donc décrire la formation des tétrades que je n’ai pas observée et leur mise en fuseau. Dans la figure 7, planche I, le premier globule polaire vient d’être expulsé. Il se présente avec une forme ellipsoïdale de 13 u de grand diamètre, enchassé dans la membrane anhiste de l’œuf. Déjà son centrosome s’est divisé et si on ne reconnaît pas la présence des deux centrioles, on voit à chacune de ses extrémités les rayons de l’aster encore peu développés. Dans son intérieur, un suc nucléaire très clair, avec des masses chromatiques.

Dans l’œuf, l’aster inférieur du premier fuseau de réduction n’est pas visible. On aperçoit sur la figure 7, planche I, 5 petites vésicules arrondies, de 3 u de diamètre. Sur la coupe suivante, 3 autres vésicules sont visibles. Ces 8 vésicules, accolées l’une à l’autre, représentent la première phase de reconstitution du noyau, après l’expulsion du premier globule polaire. Chacune de ces vésicules présente l’aspect d’un tout petit noyau, bien délimité par une membrane très nette, avec granules chromatiques à la surface. Dans leur intérieur, un ou plusieurs grains chromatiques plus gros. Autour de ces vésicules, un cytoplasme germinatif finement granuleux et fortement colorable.

$ IIT. — Formation du second globule polaire

Après l'expulsion du premier globule polaire, existe une courte période de repos, puisque les chromosomes restés dans l’œuf se transforment en vésicules qui se rapprochent et s’accolent les unes aux autres. Mais la télophase est-elle complète et une fusion progressive transforme-t-elle ces vésicules en un noyau unique ? Je ne suis pas en mesure de l’affirmer. Je suis plutôt porté à croire que la période de repos est très courte et que la fusion des vésicules n’a pas lieu. Ce processus de reconstitution des noyaux à la télophase, par gonflement des chromosomes en vésicules et fusion progressive de ces vésicules, à été d’ailleurs bien décrit par de nombreux auteurs, dans beaucoup de segmentations d’animaux les plus divers : chez l’Ascaris, les Annélides Polychètes, VOursin, la Truite, les Amphibiens, etc. Il est quelquefois difficile de dire si chaque vésicule correspond à un chromosome, qui s’est vacuolisé en grossissant.

Dans le cytoplasme germinatif, qui entoure les vésicules (fig. 7, pl. I) et contient un nombre très considérable de fins granules très basophiles, il est impossible d’observer l’aster inférieur du premier fuseau de réduction. Aucun grain plus fortement coloré, n’indique qu’on se trouve en présence d’un centriole simple ou déjà géminé. Tout autour de cette zone germinative, constituant un vrai pôle animal extrêmement réduit, on trouve de nombreux sphérules ayant 1 u de diamètre, véritables noyaux minuscules, composés d’un grain chromatique central entouré d’une aréa claire. Ces sphérules, que j'ai déjà signalées, proviennent de la division intensive des pseudocellules et constituent le matériel vitellin, dont nous suivrons l’évolution ultérieurement.

Dans la figure 8, planche I, le deuxième fuseau de maturation est déjà formé et a une direction radiale. Son grand axe qui mesure 9 pu est la centième partie du diamètre de l’œuf (900 y). Sauf chez les Protozoaires (Grégarines), l'on n’a guère d’exemples, dans toute la série animale, où une pareille proportion soit atteinte, même chez les œufs à deutoplasme abondant. Son petit axe à 4 pu. Il a ainsi la forme d’un tonnelet très allongé, terminé en pointe au pôle inférieur, où l’on observe un centriole très net, mais sans sphère claire, ni sans aster. Cependant, il semble bien que les granules placés autour de lui s’orientent en rayons qui vont se terminer insensiblement dans le cytoplasme. Au pôle supérieur, pas de centrosome visible. Le fuseau est tronqué, il s’est avancé vers l'extérieur

traversant l'enveloppe anhiste en entier. Les fibres du fuseau sont excessivement fines et très nombreuses. Les chromosomes, au nombre de 5 sur la figure 8, planche I,et de 3 sur la coupe suivante, forment la plaque équatoriale. Ils constituent les dyades, mais déjà au début de l’anaphase. On voit très bien, en effet, leur forme en haltère dont les deux boules, qui constitueront chacune un chromosome monovalent, commencent leur ascension vers leur centrosome respectif.

Le premier globule polaire expulsé à émigré légèrement à la gauche du deuxième fuseau. Enchassé dans l'enveloppe anhiste de l’œuf, il a, en s’accroîssant, produit une encoche à la surface de l’œuf. Il est, lui aussi, en mitose au stade de l’anaphase. Son fuseau à fibres délicates et nombreuses ne’ présente pas à ses pôles de centrosome visible. Il est oblique par rapport à celui de la deuxième mitose de maturation. La figure 9, planche I, nous montre le 2€ globule polaire complètement expulsé et situé dans l’enveloppe anhiste de l’œuf. Le premier globule polaire, placé à son contact, a terminé sa mitose et s’est divisé en 2 globules polaires secondaires.

À ce stade, la réduction chromatique du noyau de l’œuf est opérée. L’œuf est müûür. Son noyau, reconstitué au moyen des chromosomes du 2e fuseau de maturation restés dans l’œuf, constitue le pronucléus femelle, qui se présente figure 9, planche I, sous la forme d’un corps allongé de 8 à de longueur sur 2 de largeur. Son contour, assez irrégulier, paraît vésiculeux, ce qui semble indiquer que les chromosomes ont encore pris l’aspect de vésicules avant de se fusionner. A l’un de ses pôles, une étroite irradiation cytoplasmique apparaît dans le sens transversal. C’est un reste de l’aster ; un petit centrosome, primitivement situé au pôle inférieur du 2€ fuseau de maturation, va constituer l’ovocentre de l’œuf mûr.

$ IV. — Conclusion

Les phénomènes de la maturation de l’œuf de la Myriothèle sont dans leurs grandes lignes conformes à ceux des Métazoaires. Ils présentent, cependant, quelques particularités qui méritent d’être signalées. Nous avons vu, en effet, le nucléole de l’ovocyte I, au commencement de sa phase de grand accroissement, devenir achromatique et émigrer dans le cytoplasme. Sa chromatine, d’abord sous la forme de boule homogène, se fragmente et se distribue dans le suc nucléaire. Cette émigration du nucléole, suivie de sa disparition dans le cytoplasme, a été observée chez

beaucoup d’animaux, mais jamais à un stade aussi précoce. Le nucléole chromatique persiste toujours jusqu’à ce que l’œuf ait terminé son grand accroissement, c’est-à-dire pendant tout le stade de la prématuration, tandis que chez la Myriothèle, nous assistons à son émigration dans le Cytoplasme, dès qu’il commence à se fusionner avec les premiers ovocytes voisins. Dans la prématuration de l’œuf de la Myriothèle, le centrosome apparaît extérieurement contre la membrane du noyau, digère cette membrane et pénètre à l’intérieur. Là, le centriole se divise en deux grains réunis par une centrodesmose qui forme le fuseau. Les deux asters sont d’origine cytoplasmique et les fibres du fuseau d’origine nucléaire formées par le réseau plasmatique.

La membrane nucléaire disparaît alors complètement et il se produit une véritable épuration nucléaire, la plus grande partie de la chromatine du noyau passant dans le cytoplasme, reconnaissable pendant longtemps à la coloration foncée prise par la zone germinative. La dimension des fuseaux de maturation n’est pas en rapport avec la taille relativement considérable du noyau avant la maturation. Le pronucléus femelle a un diamètre cinq fois plus petit que le noyau de l’œuf. En résumé, les divers stades de la formation de l’œuf de la Myriothèle se ramènent d’une façon complète au [cycle bien connu de l’ovogénèse des Métazoaires. L’assimilation qui paraît difficile à LABBÉ est au contraire

bien naturelle.