TROISIÈME PARTIE : LA TUBULAIRE

CHAP. X. Morphologie externe et interne. .................................s.sss.sesrsese esse rec Ë Cap. XI. Les premiers stades du développement.......................................s....s.essee SI. Recherches personnelles (p. 196). — a) Formation du gonophore mâle (p. 202) ; b) Formation du gonophore femelle (p. 204). — $ IL. Histerique et critique (p. 206). — $ III. Conclusion............

CHAP IT Tormanon del ŒUNOTMALs en de meer eheremener esse per eee: dtaner-eecpi .$ I. Recherches personnelles (p. 212). — Deux modes de formation : 4) La cellule initiale est un ovocyte privilégié (p. 213) ; b) Formation de l’œuf par aires plasmodiales (p. 215). — $ II. Historique

et cranique(D 217) STI NC ONCIUSOR ee eee see --eror-crree serrer CHAPAXTIL Maotyration del ŒU) NONMALI SEE ere ceetlree-c-cer-e-er dCi: --0L

$ I. Recherches personnelles (p.223). — a) Formation du premier globule polaire. Cytologie du noyau en prématuration. Digestion de la membrane nucléaire. Première mitose de maturation. Expulsion du

premier globule polaire (p.223); b) Formation du deuxième globule polaire. Structure du deuxième

fuseau de maturation. Expulsion du deuxième globule polaire. Réduction chromatique (p.225). —

$ II. Historique et critique (p. 226). — $ III. Conclusion.....,,....... SHOT Menace can

CHAP2 XIV. Pécondahion del ŒU) NTM Ne. se perse seen elec cs. $ I. Recherches personnelles (p 229.).— Structure de l’œuf mûr. Expulsion de l’œuf mûr. Expulsion des spermatozoïdes. Moment précis de la pénétration du spermatozoïde en un point quelconque de

l’œuf. Rotation du spermatozoïde. Structure du pronucléus mâle. Structure du pronucléus femelle.

Premier noyau de segmentation. — $ II. Histurique et critique (p. 232). — $ III. Conclusion.....

CHAP XVe Développement del ŒuUfNnonMAl eee. rene lrece is casses: $ I. Recherches personnelles (p.234). — Formation du premier fuseau de segmentation. Deux modes de segmentation de l’œuf. 1°r mode : la Karyokinèse suivie immédiatement de cytodiérèse. Stade

planula. Formation de la mésoglée. Formation de la cavité gastro-vasculaire. Couronne équatoriale

tentaculaire. Stade actinula, sa fixation. — $ II. Historique et critique (p. 240). — $ III. CONCLUSION NES EAN eeepc cscceoer cc tLer er oLse s'nremi Ces erlliairs ac cols me pese CHAP XVI. P'aurigéant dela Tubulaire RE nanas ess late ps ee Ne Ch elec aires ele elles

Deux modes de formation : &) La cellule initiale est un ovocyte privilégié (p. 245; b) Formation de l’œuf par aires plasmodiales (p. 246). Formation des œufs secondaires........................s

CHAP KVIL -Mafuralion de l'ŒUT SCORE EEE ee bee en ce sm $ I. Recherches personnelles (p. 247) ; a) Expulsion du premier globule polaire (p. 251) : 1° du noyau normal de l’œuf ; 2° des noyaux secondaires périphériques ; 3° Des noyaux secondaires centraux :

b) Expulsion du deuxième globule polaire (p. 254) ; 1° du noyau normal de l’œuf ; 2° des noyaux secondaires périphériques; 3° des noyaux secondaires centraux. — $ IT. Fuseaux de maturation polycentriques (p. 256) ; a) Historique (p. 256) ; b) Opinion personnelle (p. 257). — $ III. Expuision de glo-

bules polaires pur amitose (p. 257). — Division directe du globule polaire expulsé en deux globules

polaires secondaires. Expulsion probable d’un seul globule polaire par noyau

CHAP XVIII Fécondaiondel ŒUTSecOonTaine eee lee 222 0e eee ee TE $ I. Formation du pronucléus femelle polyénergide (p. 261). — $S II. Formation du pronucléus mâle polyénergide (p.263).— $ IIT. La polyspermie chez la Tubulaire (p. 265). — $ IV. Recherches personnelles. Conditions favorables à la polyspermie. Pronucléus mâle monoénergide et pronucléi mâles polyénergides. Loi de Brachet sur la fusion des pronucléi (p. 265).— $ V. Copulation des pronucléi

miles el femelles polyénergides, Pénétration du pronucléus mâle à l’intérieur du pronucléus femelle. Fécondation multiple mono et polyénergide ou fécondation unique polyénergide. Un ou plusieurs

noyaux de conjugaison (p. 270). — $ VI. Historique et critique

CHAP. XIX. Développement de l'œuf secondaire polyspermique. ................,....,................ Émigration des noyaux de conjugaison. Premières mitoses de segmentation multipolaires. Différentes structures du chromosome. Action des émanations du radium et des rayons X sur la chromatine.

Un seul mode de segmentation : la karyokinèse des noyaux n'est pas suivie immédiatement de cyto-

diérèse. Asters accessoires. Transformation des pseudocellules CHAPR Les US géants dans ia sé aNMOIe RE ERESEEeE O SI. L'œuf géant de l’Ascaris megalocephala (p.288). — $ II. L'œuf géant de l’Abraxas grossulariata....,

CPR ET BP OT EM UVONE td eee à en es A res ce RE dre nn een Ra 290 $ I. Histcrique. — Polyembryonie spécifique. Polyembryonie expérimentale. Blastotomie spontanée. Polyembryonie accidentelle. Polyembryonie des Tatous (p. 290). — $ II. Poyembryonie de la ROTTO Se 6 LS BE0 dose bn se RS ON PR RE I 294 CHAP. XXII. Comparaison entre les phénomènes montrés par les œufs de 7% Tubulaire et ceux des œufs de AR ETES HOTEL RARES Te de EE De me ee PT ne 298 $. I. Historique (p. 298). — $ II. Conclusion... ...... Re 210 De no Re sn Ce ee nn à 302 CESR SE CONS UMONS ATEN CLAIRE nee à ee Us PO UN NC PU nue D, 304 SR UD 0 Re le (D SO AIT TD AU nen nee nl canne se da de ne ns cos een re ee 306 TTC bo TTADQUE an ce Ur on en D TP SU ne Canson SN D eee SDS Peu 311 PNR CRISE à 008 baba dat OA ET Re 2e D 323 INTRODUCTION

$ L — Plan et but de ce travail

Lorsque, sur l’instigation de mon ancien maître, le professeur Armand SABATIER, j’entrepris l’étude des Polypes Hydraires, je me bornais provisoirement à l’étude des premiers stades du développement, stades sur lesquels les opinions les plus contradictoires étaient émises et soutenues par des savants autorisés. Je ne fus pas long à m’apercevoir, que les divergences d'opinions sur la dérivation de la glande germinale du gonophore, à partir de l’un ou l’autre des deux feuillets germinatifs primordiaux, étaient dues à ce qu'aucun des auteurs ne descendait jusqu’au vrai point de départ de l’ovaire ou du testicule, c’est-à-dire jusqu’à la cellule originelle d’où provient la glande génitale. Ce point présentait quelques difficultés, par suite de la rareté et des dimensions très réduites de ces stades, dans les colonies d’Hydraires très développées. Dans les colonies jeunes, qui se développent pendant la mauvaise saison, ces stades de dimensions aussi petites sont beaucoup moins rares, de sorte qu'il est relativement facile de les posséder, si les animaux sont fixés convenablement.

Lorsque l’œil de en est habitué à voir au microscope ces stades de début, il les distingue de plus en plus nettement sur les coupes de colonies adultes. C’est ainsi que chez la Tubulaire, le premier hydraire dont j’étudiais la formation du gonophore, on rencontre les stades les plus jeunes sur les blastostyles, à côté de gonophores entièrement développés, renfermant, soit des spermatozoïdes prêts à être mis en liberté, soit deux ou trois ou quatre générations d’œufs normaux.

88 PAUL IBENOIT

Je fus ainsi, après avoir débrouillé l’origine du noyau médusaire ou glockenkern et de la masse germinale, appelé à étudier la formation de l'œuf et les premiers stades de la segmentation de la Tubulaire, décrits de façon contradictoire et souvent trop schématique par les auteurs. Ici encore, les descriptions étaient basées sur des dessins par trop simplifiés, ce qui, évidemment, correspondait à des préparations défectueuses.

Mais, en étudiant le développement de l’œuf normal, je fus frappé de rencontrer dans les gonophores, au lieu de quatre embryons à des stades très différents, quatre embryons au même stade deux à deux. Je fus ainsi amené à rechercher la formation des œufs donnant ces embryons de même âge et je découvris l’œuf géant de la Tubulaire, se découpant au moyen d’un ou deux sillons radiaires, en deux ou trois œufs secondaires : c'était de la polyembryonie très spéciale.

Dans les œufs secondaires, je constatai toujours des phénomènes de polyspermie naturelle, avec formation de faisceaux de spermatozoïdes devenant pronucléus mâles polyénergides. Dans l’œuf complètement développé, mais non mûr se montraient : le noyau normal de l’œuf, plus un certain nombre de noyaux non dégénérés provenant des ovocytes englobés. Devais-je considérer ces noyaux d’ovocytes non dégénérés comme noyaux multiples de l’œuf ? La réponse à cette question était affirmative, par suite de la découverte dans un même œuf de nombreux fuseaux de maturation disséminés, soit à la périphérie, soit au centre de l’œuf. Ces noyaux multiples de l’œuf faisaient synchroniquement leur réduction chromatique et les pronueléi femelles formés se fusionnaient en plusieurs pronueléi femelles mono et polyénergides.

De la sorte, dans l’œuf secondaire mûr, se trouvaient en présence : des pronucléi mâles mono et polyénergides, des pronucléi femelles mono et polyénergides, donnant des fécondations multiples mono et polyénergides. La succession des stades de segmentation montrait un développement normal et la formation d’un embryon arrivant au stade adulte. Le cycle de l’œuf géant de la Tubulaire était complet.

Je pensais que chez tous les Hydraires à œufs volumineux, comme ceux de la Tubulaire, je pourrais trouver de la polyspermie. Dans ce but je m'adressais à la Wyriothèle, dont les œufs sont encore plus gros. L'étude de la formation du module médusaire montra les stades absolument semblables rencontrés chez la Tubulaire, mais en nombre beaucoup plus

considérable. L’endoderme était aussi le feuillet primordial donnant naissance aux éléments génitaux.

Mais, l’opinion de KoRorN&rr sur le développement embryonnaire de l'œuf de la Myriothèle, caractérisé, d’après lui, par l'absence complète de segmentation, soit directe, soit indirecte, m'avait frappé. J’élevais, à la suite de METSCHNIKOrF, des doutes sur une pareille possibilité. D'autre part, l'opinion de LABBÉ (1899), déclarant impossible de ramener le mode de formation de l’œuf de la T'ubulaire et de la Myriothèle au cycle de l’ovogénèse des Métazoaires, me déterminèrent aussitôt à chercher les stades de maturation et de fécondation, non encore décrits, chez la Myriothèle. Malgré la confection et l’étude de très nombreuses coupes, je ne pus observer pendant longtemps l’expulsion des globules polaires et la fécondation. Cette absence persistante d'images de fuseaux polaires me fit supposer que la maturation et la fécondation chez la Myriothèle devaient s’opérer la nuit. En effet, la seule prise de matériel, fixé sur place, que je fis à Roscoff à la marée du 19 décembre 1922, me donna les stades qui me manquaient, c’est-à-dire les stades de maturation, de fécondation et des premières segmentations du noyau de l’œuf. Aïnsi, je démontrais, contrairement à l’opinion de KoROTNErF, que le noyau de l’œuf de la Myriothèle se divise par mitose, comme c’est le cas général chez les animaux, et aussi, contrairement à l’opinion de LaBBé, que l’œuf de la Tubulaire et celui de la Myriothèle rentrent dans le cycle de l’ovogénèse des Métazoaires. Mais, de la polyspermie, il m'a été impossible d’en observer un seul cas chez la Myriothèle.

$ IT. — Matériel et Technique

Toutes les T'ubulaires que j'ai étudiées appartiennent à l'espèce Tubularia mesembryanthemum Allm. et ont été récoltées à Cette. Les Myriothèles appartiennent à l'espèce Myriothela Cocksi Vigurs, elles m'ont été envoyées par le laboratoire de Roscoff, ou ont été récoltées sur place, par moi, près de l’île Ti-sao-son, lors de mes deux séjours au laboratoire.

J’ai fait la fixation par la plupart des liquides employés en histologie, cependant ce sont les fixateurs suivants qui m'ont donné les meilleurs

résultats :

Le liquide de Flemming fort (fixateur chromo-acéto-osmique),

Le liquide de Bouin-Duboscq (formol picro-acétique alcoolique), Le sublimé acétique, le liquide de Lindsay-Johnston dont la formule

est :

Bichromate de potasse à 2,50 0/0...... 70 parties Acide osmique à 20/0. ..7.. 445. 224000 10 — Chlorure de platine à 10/0.............. 150 — Acide acétique ou formique ........,.... 5 —

Enfin le fixateur de Hollande, qui n’est autre chose que le fixateur de Bouin dans lequel l’addition d’acétate neutre de cuivre permet une dissolution beaucoup plus forte d’acide picrique.

Les Hydraires contenant une proportion d’eau très grande dans leurs tissus, il est nécessaire, dans la déshydratation, de passer insensiblement d’un alcool à l’alcool supérieur et d'éviter totalement le passage des pièces dans l’alcool absolu, qui est trop brutal. Pour cela, je fais passer les pièces à déshydrater de l’alcool à 959 dans l’alcooï à 970, puis je les plonge dans le chloroforme, l’acétone, le sulfure de carbone ou l’essence de bergamote, qui supportent une certaine quantité d’eau, sans se troubler.

L’inclusion doit être aussi rapide que possible et ne doit pas durer plus de deux heures au maximum dans la paraffine à 409 et dix minutes dans la paraffine à 500. Il y à grand intérêt à confectionner les coupes immédiatement après et à les colorer au plus tôt. Au lieu de fixer les animaux en entier, j’ai souvent, au microscope binoculaire, choisi les gonophores contenant le stade approximatif des œufs que je désirais, puis fixé seulement ces, œufs. Leur manipulation à travers tous les liquides successifs, Jusqu'à l'inclusion comprise, est beaucoup plus délicate. Il ne faut pas songer à les changer un à un, soit avec une aiguille, soit avec des pinces, car on les abîme. Il faut alors les placer dans un tube à section inférieure ronde ou carrée (tube de Caullery), de dimensions déterminées. On fixe, à la partie inférieure de ce tube, un morceau d’étofte de soie à trame serrée, qui arrête les œufs ; on peut ainsi, très facilement, passer par tous les alcools, l'essence et les paraffines. On n’a plus qu’à boucher supérieurement le tube, avant de le sortir de la paraffine à 500 et on le plonge rapidement dans l’eau froide, où la paraffine se solidifie. Enfin, on chauffe légèrement le tube, pour faire sortir le bloc, que l’on reçoit dans l’eau.

Les coupes sont quelquefois difficiles à obtenir en séries ininterrompues

(ce qui est absolument nécessaire, pour les phénomènes cytologiques de la maturation ou de la fécondation), par suite de la présence presque constante, sur les T'ubulaires ou les Myriothèles, de Diatomées nombreuses, dont la coque silicieuse produit sur le rasoir de fines brèches qui déchirent les coupes. C’est pourquoi j’ai employé quelquefois, l’inclusion double : collodion-paraffine. Cependant, étant donné le nombre de coupes en série nécessaires, pour l’étude cytologique de l’œuf de ces animaux et la présence des Diatomées surtout sur l’hydrocaule, j'ai le plus souvent fait l'inclusion à la paraffine.

J’ai utilisé, pour la coloration des coupes, les diverses teintures employées en cytologie ; d’abord la coloration par l’hématoxyline d’Ebrlich-éosine et orange, la safranine-lichtgrün de Benda et le carmin boracique-indigo carmin picrique de Ramon y Cajal.

J’ai aussi employé avec succès la coloration de MAxx (bleu de méthyleéosine avec différenciation à l’alcool absolu potassique), la coloration de Morel et Dalous au Crésyl bleu-rubine-orange et enfin la double coloration rouge magenta-picro-indigo-carmin (malgré que cette dernière coloration pâlisse beaucoup en veillissant). Mais la coloration qui m'a donné les plus beaux résultats (et surtout les plus démonstratifs), c’est la coloration à l’hématoxyline au fer de Heidenhain, seule ou suivie de la double coloration de Prenant (hématoxyline, éosine, vert lumière). J’ai pu obtenir une différenciation parfaite de la façon suivante : je mordance les coupes dans l’alun de fer ammoniacal à 3 p. 100 pendant douze heures, puis après lavage très rapide dans l’eau distillée, je mets les lames pendant douze heures dans la solution d’hématoxyline. Au sortir de ce bain, lavage à l’eau courante une heure, puis différenciation dans l’alun à 1 p. 100 pendant vingt-quatre heures. Les coupes deviennent presque incolores. Je recommence alors le mordançage dans l’alun de fer et d’ammoniaque à 3 p. 100 douze heures, lavage très rapide à l’eau distillée, coloration à l’hématoxyline douze heures, lavage à l’eau courante une heure. La différenciation, suivie maintenant au microscope, sera arrêtée au moment voulu. J’ai obtenu par cette nouvelle méthode, d'excellentes différenciations.