CHAPITRE I

I. Historique. — La nature parasitaire de la blennorrhagie a depuis longtemps préoccupé les auteurs.

Donné en 1844 avait constaté dans le pus d’une vaginite blennorrhagique la présence d'organismes tels que le Trichonomas vaginalis, le Vibrio linolea.

En 1863 Jousseaume décrit le Genitalia qu’il avait vu dans le pus blennorhagique, c'était, écrit-il « une algue «constituée par de très longs filaments de 0,010 à « 0%®,020 d'épaisseur, presque toujours courbés en arc « plus ou moins ouvert. Cette courbure peut s’exagérer « jusqu’à permettre l’entrecroissement de leurs extrémités ; « d’autres fois au lieu de se plier en arc, ces filaments se « coudent brusquement sous un angle variable ; ils portent « tous des rameaux qui s’amincissent ou s’éloignent de « la tige et dont le volume est en rapport avec l’âge. « Quand ils sont jeunes leurs bords sont nets et leur inté- « rieur transparent, ce qui permet d’apercevoir avec faci- « lité les organes reproducteurs sous la forme de petits « globules arrondis. Les rameaux peuvent eux-mêmes se

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« couvrir de ramifications de deuxième et de troisième «ordre. Si, sur des filaments d’un certain volume, on « n’aperçoit pas de ramifications, on est presque certain « de n’avoir sous les yeux qu’une partie du tube détaché « des filaments, comme le démontre l'inégalité de ses ex- « trémités. Les jeunes rameaux que remplissent des spo- «res séparées par des espaces vides sont d’une transpa- « rence parfaite, mais à un âge un peu plus avancé, aux « spores se joignent des cloisons transversales et longitu- « dinales, et une transparence beaucoup moins grande qui « disparaît presque complètement dans les rameaux qui « ont atteint le dernier degré de leur développement. Les « filaments d’un âge très avancé sont sillonnés par des «stries longitudinales, obliques, ou transversales, renfer- « mant de distance en distance les organes reproducteurs « sous forme de corps arrondis dont les bords sont d’au- « tant plus bruns et l’intérieur moins transparent qu'ils « sont plus volumineux. »

Cette conception ne présente plus aujourd'hui qu'un intérêt historique, et il faut arriver en 1872 pour avoir une description sommaire du microcoque classique de la blennorrhagie,

À cette époque, en effet, Hallier, professeur de botanique à l’Université d’Iéna, reprend la question et trouve dans le pus de la blennorrhagie une infinité de micrococcus qui sont en partie libres, en partie logés dans les cellules de pus; dans ces dernières ils forment des vacuoles d’abord ; ils les détruisent ensuite complètement. Des corpuscules identiques se trouvent dans le sang d'individus affectés de blennorhagie d’après Hallier ; ils pénètrent

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dans les globules sanguins après en avoir d'abord occupé la surface.

En 4873, Salisbury reprenant les recherches commencées en 1850, décrit des spores très ténues et bien délimitées qu'on trouve groupées par deux ou par quatre. Elles se développent rapidement dans et sur les cellules de la muqueuse affectée, où elles produisent une violente irritation ; de plus elles provoquent autour d'elles la formation de cellules de muco-pus, lequel devient ainsi un véhicule pour l'élimination du virus hors des cellules mères de la muqueuse. Il constata aussi cà et là des filaments isolés en petits pelotons qu’il trouvait tantôt seuls, tantôt accompagnant les spores.

En 1878, le professeur Bouchard avait vu constamment dans le pus de la blennorrhagie un micro-organisme spécial, mais il lui décrivait un prolongement qui le faisait ressembler à une virgule ; c'était le sillage laissé derrière le microbe par les mouvements de ce dernier qu’il considérait comme en faisant partie.

Il appartient à Neïisser, en 1879, de donner une description exacte du micro-organisme de la blennorrhag ie. Il le trouvait dans le pus uréthral et dans celui de l’ophthalmie blennorrhagique. Les recherches de Weiss exposées dans sa thèse inaugurale ont confirmé les observations de Neisser et actuellement le micro-organisme est décrit sous le nom de Gonocoque de Neisser.

II, Morphologie. —- Deux caractères semblent lui être propres ; sa présence presque constante à l’intérieur des globules de pus, et sa décoloration par une méthode spéciale, la méthode de Gram, signalée par M. Roux (de Lyon)

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et sur laquelle nous aurons à nous étendre un peu plus loin.

Au microscope, avec un fort grossissement, après avoir étalé sur une lamelle le pus blennorrhagique, on constate la présence d'éléments ovoides, légèrement concaves sur leur face interne. Le grand axe de l’ovoïde mesure 0,6 à 0,7 ; le petit axe n'a guère que 0,5u. Ces éléments sont d'habitude réunis par couple en diplocoques associés fréquemment en deux petits amas. Le nombre des diplocoques ainsi que leurs rapports avec les cellules que le pus tient en suspension sont variables suivant l’âge et la nature de l’écoulement. {Ces détails ont déjà été précisés par le docteur Legrain. }Au début, au milieu des cellules épithéliales et des globules de pus, on ne voit que deux ou trois pour cent de ces derniers qui contiennent des gonocoques. Le second jour, leur nombre est plus considérable ; cela tient à ce que, d’une part, les globules de pus qui renferment des gonocoques sont plus nombreux, et que d'autre part, le nombre de gonocoques contenus dans chaque élément est plus considérable. On a compté, en effet, dix, trente, quatre-vingt et même jusqu’à cent-vingt dans un globule de pus. Plus tard, en pleine période aiguë, les cellules épithéliales disparaissent, les globules de pus augmentent ; le gonocoque pénètre dans l'épaisseur de la muqueuse où il se développe très activement. A la période de décroissance, les cellules épithéliales redeviennent nombreuses et sont très rarement habitées ; les globules de pus, au contraire, sont envahis en très grand nombre. Quand l'écoulement devient chronique, il est souvent difficile de trouver un globule de pus au milieu des éléments épithé-

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liaux, qui alors sont presque tous attaqués par la bactérie ; il y en a très peu relativement à l'intérieur des globules de pus. On conçoit d'après ces renseignements sur le siège du gonocoque aux différentes périodes de la blennorrhagie toute l'importance qu’un traitement rationnel peut en retirer.

Le gonocoque est mobile. Ses mouvements difficiles à constater dans le pus sont très facilement perceptibles dans les cultures. Nous les décrirons en examinant ces dernières.

III. Coloration. — Le gonocoque se colore aisément par les couleurs d’aniline, mais il se décolore par la méthode de Gram. Lorsqu’on veut en constater la présence dans le pus, il faut le soumettre aux diverses réactions suivantes : étaler le pus sur la lamelle en évitant de frotter deux lamelles l’une contre l’autre pour conserver le plus possible la présence intra-cellulaire du micro-organisme. Après avoir séché ‘et passé à la flamme la lamelle ainsi chargée, on la traite par une solution anilinée (ainsi composée : aniline 3 cent. cubes, alcool à 50°, 7 cent. cubes, eau 90 cent. cubes) et une solution hydro-alcoolique de bleu de méthylèae. Après un séjour de deux à trois minutes, lavez à grande eau, et plongez pendant deux minutes dans le liquide de Gram (iodure de potassium, 2 gr. ; iode  gr. ; eau distillée 100 gr.) Placez ensuite la préparation dans l'alcool absolu jusqu'à la décoloration complète; lavez à nouveau et traitez pendant deux ou trois minutes par une solution aqueuse concentrée d’éosine. Déshydratez par l’alcoo! et montez la lamelle au brôme de Xylol,

Le diplocoque de Neisser est alors décoloré et réduit à

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des petits points roses ou peu foncés. S'il y a d’autres microbes ils sont colorés en bleu et d’une manière très nette. On s'assure alors qu’ils siègent à la fois dans le liquide où ils sont à l’état libre, et à la surface, aussi bien que dans le protoplasma des globules de pus et des cellules épithéliales.

Un seul auteur, le docteur Pouey, conteste la valeur de Ia méthode de Gram à la recherche du gonocoque. Il résulte de l'examen de son mémoire que les résultats contradictoires qu’il a obtenus, il les devait à des cultures impures.

Le docteur Jullien préfère comme colorant le violet de méthyle. Il emploie une légère solution aqueuse de ce dernier, phéniquée et filtrée. Après avoir exposé pendant une à deux minutes la gouttelette de pus, à examiner à des

vapeurs d'acide osmique, on les mélange à une quantité :

égale de la solution colorante ; puis on laisse sécher la préparation. Plus tard on éclaircira avee le baume de Canada et on lute. Il suffirait de laver légèrement avec de l'essence de girofle si la matière colorante était en excès, où si elle s'était déposée en cristaux obscurcissant le champ du microscope. Enfin, il recommande de n'employer que des grossissements variant de 900 à 2.000 diamètres ; de plus nous insisterons sur ce fait, avec Welander, qu’il ne faut * pas recueillir sur la lamelle, la première goutte de pus dont on provoque l'issue par pression sur le canal de l'urèthre, celle-ci étant très souvent exempte de gonocoques.

IV. Cultures. — Le gonocoque a été cultivé ; mais les premières mises en culture ont été faussées par la pullula-

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tion sur les milieux ensemencés de bactéries saprophytes de l’urèthre qui se développaient avec une facilité beaucoup plus grande.

Examinons maintenant, aussi brièvement que possible, quels sont les différents procédés de culture du gonocoque.

Bumm en 1887 le cultive sur du sérum de sang humain coagulé et maintenu dans l’étuve à une température oscillant entre 33 et 37° centigrades. Pour obtenir le sérum, il recommande la méthode suivante. Aussitôt après la section d’un cordon ombilical, alors que le placenta est encore dans l’utérus, on recueille avec soin le sang qui s'écoule, et on obtient ainsi environ de 40 à 60 cent. cubes de sang ; puis on laisse reposer pendant une durée de 24 heures. Après la coagulation complète, on a de 16 à 20 cent. cubes de sérum. On pourrait encore employer les sérosités de l'hydrocèle, de la plèvre, du péritoine.

Bumm obtient ainsi une culture après 18 à 24 heures. Son apparition et son développement sont lents ; elles se présentent sous la forme d’ilots à bords escarpés, à surface humide, lisse et brillante, ressemblant à une mince couche de vernis.

Bockhardt et Kreiss confirment les résultats de ce der. nier et démontrèrent en plus que le gonocoque pouvait être cultivé sur la gélose et la gélatine peptonifiée.

Avant d'étudier ces cultures, signalons en passant un procédé qui se rapproche de celui de Bumm, et mis en avant par A. Risso dans la Réforma Medica de mai 1892. Il cultive le pus d’un urèthre atteint de blennorhagie sur sérum sanguin provenant d'un placenta et additionné de

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deux fois son volume d’eau. Ces cultures ont donné, en 24 heures, de très petites colonies punctiformes, à peine visibles, transparentes, très rapprochées les unes des autres. En 4$ heures, les colonies toujours transparentes n’atteignaient pas le volume d'une tête d'épingle; leur surface était arrondie, presqu'hémisphérique, un peu saillante ; le troisième jour, certaines colonies étaient restées très petites ; d'autres qui avaient atteint le volume d’une tête d’épingle étaient plus aplaties à leur surface qui avait pris une teinte blanchâtre. Le quatrième jour, les colonies les plus volumineuses avaient atteint les dimensions d’un grain de millet ; elles étaient encore saillantes à leur partie centrale, mais plus aplaties à leur périphérie; leurs bords étaient un peu dentelés, leurs centres avaient une teinte blanche plus intense. Au bout de sept à huit jourss, les colonies avaient cessé de s'étendre par leur périphérie et s'étaient amincies de façon à former une mince pellicule. ;

Les colonies les plés jeunes étaient formées de cocci réunis deux à deux ou quatre à quatre ; les plus anciennes, de cocci plus petites isolés au.sous-forme de diplocoques. Les cultures transportées dans le bouillon, la gélatine, l'agar-agar, n’ont donné lieu au développement d'aucune colonie. Sur le sérum additionné d’agar, elles ont reproduit des cellules semblables aux premières.

La culture sur gélose a été faite par Crivelli et Lober ; elle s'effectue à la température de 35°. centigrades. Dès la troisieme ou la quatrième heure après la piqûre d'inoculation dans l’agar-agar, dit Crivelli, on constate une liquéfaction superficielle de la gélose, tandis que la profondeur

est presque intacte, Lober, de sun côté, signale l'apparition, au bout de 24 heures, de petits points blancs qui au bout du deuxième jour forment des taches de deux à trois millimètres de diamètre. Quelques-unes de ces taches deviennent jaune citron ou jaune or. D’après ce détail, on peut être porté à croire que la gélose a.êté envahie par des bactéries accessoires de l’urèthre. Aussi pour éviter cette pullulation, doit-on, avec Legrain, recueillir le pus ou le «Gronococcus Gonorrheae » qui existe presque seul, ou du moins en plus grand nombre que ceux qui l’accompagnent. Il faut autant que possible choisir des sujets atteints pour la première fois, et recueillir le pus des premiers jours au moins quinze heures après le début de l’écouiement. :

En examinant un tube de gélose ensemencé dans de pareilles conditions, on voit, après la vingtième heure, la gouttelette de pus devenir friable. Les éléments cellulaires et purulents se désagrègent. Les noyaux sont épars, leurs contours mal délimités, et les microcoques qu'ils renferment ont pullulé autour d’eux. Vers la trentième heure, il se forme une auréole, mince, claire et transparente, qui atteint trois à quatre millimètres à la fin du troisième jour. Au dixième jour, la culture a un centimètre de profondeur. L'aspect de la culture est vernissé, luisant, et plutôt sec qu'humide. Sa consistance est nulle. Dès cette époque, la forme de la culture est moins régulière. Autour de l’auréole se développent des cercles secondaires sur les limites desquels apparait une troisième série. Aux points d’accolement de ces différents cercles entre eux se montrent de petits mamelons mousses transparents comme

Sn la culture ; puis celle-ci reste stationnaire, se déssèche, se fendille, et n’a plus aucune vitalité. |

La culture sur gélatine n’exige pas une température aussi élevée ; on l'obtient soit par piqûre, soit par simple dépôt d'une goutte de pus à la surface du tube. Au bout de quelques jours il, se forme une légère dépression au dessous de la colonie, puis une cupule de un centimètre de profondeur. Ces cultures sont moins résistantes que celles faites sur gélose ; les gonocoques y sont uniformément disséminés.

Enfin, nous signalons la culture sur bouillon. Elle se fait à la température de 35° centigrades. La gouttelette de pus pure que l’on y dépose, après s’être gonflée, forme une masse blanchâtre qui nage dans le liquide. Si, après une quinzaine d'heures, on examine une portion de cette goutelette ainsi modifiée, on trouve les globules de pus très distendus et remplis de gonocoques. Il s’en trouve fort peu dans le liquide ambiant. Au bout de trente heures se produit la désagrégation de la gouttelette ; les microcoques se répartissent alors dans tout le liquide.

La culture sur ce dernier milieu rend bien compte du peu de vitalité du gonocoque puisqu'après un second ensemencement avec une parcelle de la première culture, on n'obtient plus de développement.

Nous avons eu déjà l'occasion de parler des mouvements du gonocoque ; ces derniers sont très appréciables sur les culture du bouillon. On observe, alors, suivant M. Legrain, « qu’un diplocoque est animé d'un mouvement assez com- « plexe qui peut être considéré comme la résultante de « mouvement élémentaires :

«1° Un mouvemeni de translation assez lent :

« 2 Un mouvement d'oscillation autour du premier « COMME axe ; Me

«€ 3° Enfin un mouvement de rotation, chacun des deux « éléments prenant le dessus à son tour par rapport à « l’autre.

« C'est dans ce dernier mouvement qu’on voit très net- « tement les rapports qui existent entre les deux éléments « d'un couple.

« Ils sont assez libres l'un par rapport à l’autre, et à «certains moments, lorsque leurs mouvements sont brus- « ques, on les voit s'éloigner l’un de l’autre pour se rap- « procher ensuite. Ils peuvent ainsi pendant quelques se- « condes être distants d’une longueur égale à leur dia- « mètre. »

En résumé, en jetant un coup d'œil sur les différents milieux de culture du gonocoque, on voit que les opinions des auteurs diffèrent beaucoup à cet égard. Aussi, ne puis-je laisser passer sous silence dans cette récapitulation les idées émises par certains d’entre eux.

Bumm emploie, comme milieu de culture, le sérum et surtout le sérum sanguin. Tout diplocoque qui peut se cultiver sur gélatine ne serait pas pour lui le gonocoque.

Oppenheïimer et Krause réussissent aussi très bien avec le sérum.

Neisser se sert de la gélatine et ne réussit pas avec le sérum ; Lundstrom emploie également la gélatine ;:Kreiss, l'agar ; Bokaï,Sternberg,G.Paul emploient le bouillon alors que d’autres affirment que le gonocoque ne peut jamais s’y developper, Leiskhoff emploie indifféremment le sérum,