Décalcification
Pour la décalcification du squelette de l'organe auditif , on se sert exclusivement de solutions aqueuses de différents acides métalliques à des degrés variables de concentration.
On distingue une méthode de décalcification de plus longue durée et plus conservatrice et une méthode de décalcification rapide (méthode rapide), clans laquelle on a besoin de degrés de concentration plus élevés des acides. Chacune de ces méthodes a ses avantages et ses inconvénients propres, que nous examinerons à fond à la suite de la description de chacune d'elles.
Toute pièce à décalcifier , après avoir été soumise à un procédé de fixation approprié, doit être lavée dans l'eau fraîche avant d'être placée dans le liquide décalcifiant, jusqu'à ce que l'eau de lavage ne se colore plus et s'écoule pure. Puis la pièce osseuse doit être absolument débarrassée de toutes les parties molles encore adhérentes , surtout la dure-mère doit être détachée du rocher , pour que la solution décalcifiante puisse atteindre directement l'os. La pièce elle-même doit être réduite au plus petit volume possible en enlevant les parties osseuses inutiles , à la scie et à la pince à os ; elle doit être placée dans une grande quantité du liquide décalcifiant , car la décalcification s'opère d'une manière d'autant plus homogène et plus rapide que la pièce est plus petite et la quantité de liquide décalcifiant plus grande.
La décalcification doit être prolongée, jusqu'à ce que la pièce ait acquis une consistance molle, homogène, permettant de la couper. Le meilleur moyen de reconnaître si l'on en est là, c'est d'enfoncer dans le rocher, en divers points, une fine aiguille à préparer. Si l'aiguille pénètre en beaucoup de points sans que l'on doive faire un effort particulier, surtout si l'on ne découvre pas de noyau osseux dans la masse osseuse située derrière le trou auditif interne (Moos), on doit admettre que le rocher se trouve déjà dans un état qui permet de le couper. Mais si l'aiguille enfoncée rencontre dans la profondeur une résistance un peu sérieuse, cela indique qu'il existe encore des noyaux osseux non décalcifiés ; il faut laisser la pièce dans le liquide décalcifiant jusqu'à ce qu'il soit prouvé que la décalcification est complète.
Méthodes de décalcification.
1. Le liquide de Millier que nous avons cité différentes fois et dont nous avons déjà reconnu plus haut les propriétés de fixation et de durcissement des tissus, peut être aussi employé avantageusement pour la décalcification, parce qu'il renferme de l'acide chromique libre ; cela n'est vrai cependant que pour la décalcification d'organes osseux petits (osselets)
Décalcification lente. 203
ou de temporaux relativement mous (embryons, nouveau-nés, jeunes animaux, etc.). On ne peut l'employer pour la décalcification de rochers d'adultes, parce que la quantité d'acide chromique libre qu'elle renferme, est petite. Même pour les os petits, ou pauvres en sels de chaux, il faut employer une grande quantité de liquide et le renouveler fréquemment (au début tous les jours, plus tard tous les 3-4 jours). En ajoutant 5 à 10 gouttes d'acide nitrique concentré à un demi-litre du liquide de Millier après la première semaine et chaque fois que l'on renouvelle la solution, on diminue notablement la durée de l'opération sans nuire aucunement par là à la préparation. Cependant l'opération dure toujours des semaines, même pour des rochers peu résistants d'individus tout jeunes.
Cette méthode est avantageuse' pour l'examen histologique d'organes auditifs provenant d'embryons d'enfants ou de jeunes animaux, parce que les éléments conjonctifs et nerveux sont ainsi absolument conservés et qu'après la décalcification les éléments nerveux de l'appareil de perception des sacs dans le labyrinthe peuvent souvent encore être distingués par les méthodes connues de coloration des nerfs. (Hématoxyline de Weigert.) ■ 2. Méthode à l'acide chromique (Waldeyer, Gottstein, Moos). Waldeyer a recommandé pour décalcifier le rocher, l'acide chromique en solution aqueuse et a indiqué le procédé suivant ; après que l'on a enlevé les parties molles et osseuses inutiles , la pièce est placée dans une faible solution d'acide chromique (1:600), y est laissée quelques jours; on la place ensuite dans une solution d'acide chromique à 1 : 400 eau, pendant le même espace de temps et on la porte dans une solution à 1 : 200 eau. Cette solution est maintenant employée comme le liquide réellement décalcifiant, on la renouvelle tous les 5-6 jours et pour diminuer la durée de l'opération, on ajoute 2 grammes d'acide nitrique concentré officinal par 100 grammes de la solution chromique.
Quand le tout est bien décalcifié , ce qui prend encore trois mois pour les rochers d'adultes, on lave rapidement la pièce et on la place pour quelques heures dans l'alcool pur à préparations anatomiques. Alors seulement on la lave à fond et on la débarrasse de l'acide en l'arrosant d'eau pure pendant plusieurs heures, jusqu'à ce que l'eau en découlant paraisse pure et incolore. La pièce est ensuite conservée dans de l'alcool dont on augmente gr aduellement la concentration ; quelques heures avant de pratiquer les coupes, on le remplace par de l'alcool absolu. En règle générale on obtient par cette méthode de bons résultats, car elle présente l'avantage de durcir parfaitement les parties molles par l'acide chromique. Ce procédé a cependant un inconvénient qui consiste en ceci : il persiste souvent dans le voisinage du conduit auditif interne des noyaux osseux non décalcifiés (Moos) que l'on ne peut plus enlever sans nuire à toute la préparation, lorsque le reste est déjà ramolli, ce qui est préjudiciable à l'examen histologique précis de la préparation. La décalcification du labyrinthe par l'acide chromique et l'acide nitrique détermine assez souvent des altérations des cellules de Corti et de Deiters, des fibres arquées et de la membrane de Reisner (Katz), altérations qui peuvent facilement être prises pour des changements pathologiques,
204 Décalcification par l'acide nitrique et l'acide chlorhydrique.
ce que peuvent confirmer tous ceux qui ont longtemps eu recours à cette méthode. En outre, il peut arriver facilement lorsqu'on l'emploie, qu'à défaut de précautions, les préparations se ramollissent trop et se transforment en une masse friable que l'on ne peut utiliser.
3. L'acide pi crique en solution aqueuse saturée est très utilement employé pour la décalcification de rochers d'embryons ou d'enfants et d'osselets. Lorsqu'il s'agit de l'étude histologique normale des tissus du labyrinthe, on peut faire précéder la décalcification par l'acide picrique du traitement des organes labyrinthiques par l'or. L'acide picrique n'est pas à recommander pour la décalcification des rochers durs d'adulte , à cause de son action relativement lente.
4. Décalcification par l'acide nitrique. Le liquide destiné à la décalcification se compose de 100 parties d'eau, 3 '/3 parties d'acide nitrique et V* de chlorure de sodium. La solution que l'on doit employer en grande quantité , est renouvelée tous les jours au début. Les organes auditifs normaux , dans lesquels on veut examiner la muqueuse de l'oreille moyenne ou le labyrinthe, doivent, avant la décalcification, être soumis à la fixation par le liquide de Millier ou la solution d'acide osmique. Dans les cas pathologiques , je fais précéder en général la décalcification par l'acide nitrique de la fixation dans la solution de Vlakovits ( voyez p. 197). Mais pour l'examen de l'oreille externe et de l'oreille moyenne, il suffit souvent de placer la pièce dans le liquide décalcifiant, car la solution à 3 % d'acide nitrique constitue à elle seule un excellent agent de durcissement, souvent employé en histologie. Dans cette méthode, la décalcification et le ramollissement s'opèrent d'une manière sûre et homogène, sans que les parties molles de l'organe auditif éprouvent de dommage. Pour l'étude des états pathologiques de l'organe auditif, la méthode par l'acide nitrique possède en outre une valeur spéciale, parce que son action rend visible la division des noyaux. La décalcification d'un temporal humain est complète par cette méthode en 20 à 25 jours. Après la décalcification , les pièces sont bien lavées et conservées dans l'alcool à 50 °/0. Par l'alcool rectifié ou .absolu, l'os décalcifié est rendu tellement dur , qu'il faut le placer dans l'eau chaude ou l'alcool dilué chauffé pour lui rendre une consistance qui permette de le couper.
5. Décalcification par l'acide chlorhydrique. En raison du gonflement des parties molles qu'il produit , il doit être employé pour la décalcification de l'organe auditif, non pas en solution aqueuse , mais seulement en solution alcoolique. Il est en outre avantageux d'ajouter une petite quantité de chlorure de sodium à la solution d'acide chlorhydrique. La méthode par l'acide chlorhydrique n'est pas à recommander pour l'examen histologique du labyrinthe, à cause de l'action nuisible qu'elle exerce sur les organes labyrinthiques , les taches acoustiques et l'organe de Corti , mais elle convient comme méthode rapide pour la préparation de coupes topographiques de tout l'organe auditif. Nous employons pour atteindre notre but , un mélange composé de : 5-15 parties d'acide chlorhydrique concentré , 1000 parties d'esprit de vin rectifié , 200 parties d'eau et 5 parties de chlorure
Montage des préparations de l'oreille. 205
de sodium. Ce dernier s'oppose au gonflement du tissu conjonctif par l'acide chlorhydrique. Pour obtenir de bons et rapides résultats , il est de toute nécessité d'employer encore ici de grandes quantités de liquides et de les renouveler tous les jours. Le lavage et la conservation des organes décalcifiés se font comme dans la méthode décrite plus haut.
6. Acide pyroligneux {acidum pyrolignosum purum) sert à l'état de concentration pour la décalcification des tissus fœtaux.
7. Acide lactique à 10 % et en solutions plus fortes. La décalcification se fait assez vite cependant les tissus sont attaqués.
8. Le liquide de décalcification d'Ebner a la composition suivante: acide chromique 2,5 , alcool 500,0, eau distillée 100,0, chlorure de sodium 2,5. L'avantage de ce liquide consiste dans ses propriétés conservatrices des tissus ; cependant la décalcification se fait très lentement. Des pièces qui ont été enfermées préablement dans la celloïdine et chez lesquelles la décalcification ne réussit pas complètement, pourraient être parfaitement décalcifiées par le liquide d'Ebner.
9. Solution de chlorure de palladium consistant en chlorure de palladium à 1 °/0 1000,0 exige après un lavage complet un durcissement consécutif dans de l'alcool graduellement concentré.
10. Méthode par la phloroglucine. Phloroglucine 1,0 et acide nitrique non fumant 10,0 forment la solution nommée basique , à laquelle sont ajoutés 100 centimètres cubes d'une solution aqueuse d'acide nitrique à 10 °/0. La phloroglucine ne sert ici que comme agent protecteur des tissus contre l'acide employé en même temps. Une variété de ce liquide de décalcification est la suivante : phloroglucine 1,0 , acide nitrique 5,0 , alcool 70,5 , eau distillée 30,0. Cependant la décalcification a lieu ici beaucoup plus lentement.
11. Le liquide de décalcification recommandé par Th orna consiste en 5 parties d'alcool à 96 % et une partie d'acide nitrique concentré offlcinalement pur. Après une décalcification complète, la préparation est neutralisée dans l'alcool auquel on ajoute du carbonate de chaux. Cependant pour éviter le dépôt de ce sel, les pièces sont enveloppées dans du papier buvard. Le durcissement dans le liquide de Millier ou dans l'alcool a précédé.
