Préparation de la solution de celloïdine

Pour les études otologiques , on doit toujours tenir prêtes trois solutions de concen- " tration différente : une faible , une un peu plus concentrée , une épaisse. La première se prépare en plaçant 30 grammes de celloïdine chimiquement pure, en tablettes, découpées en petits cubes avec un mélange de 30 grammes d'alcool absolu et 30 grammes d'éther sulfurique, dans un vase muni d'un bouchon de verre fermant hermétiquement. La deuxième solution s'obtient en dissolvant 30 grammes de celloïdine dans un mélange de 25 grammes d'alcool et de 25 grammes d'éther. La solution la plus concentrée , enfin , s'obtient en plaçant 30 grammes de celloïdine dans 20 grammes d'alcool et 20 grammes d'éther. En agitant fréquemment le mélange, on obtient en quelques jours les solutions de consistance voulue (huileuse ou sirupeuse épaisse) qu'on emploie comme masse de montage, d'après les principes que nous décrirons plus bas.

2. Préparation des organes auditifs pour le montage dans la celloïdine.

a) Les pièces absolument décalcifiées sont d'abord lavées à fond dans de l'eau distillée, plusieurs fois renouvelée, jusqu'à ce qu'elles soient entièrement débarrassées d'acide.

Montage dans la celloïdine. 207

Puis on ouvre, par les méthodes décrites, la cavité tympanique, les canaux demi-circulaires et le limaçon pour permettre la pénétration de la masse à montage dans les cavités du temporal.

b) Il faut maintenant enlever à la pièce toute trace d'eau, car la celloïdine ne peut pénétrer dans les tissus et les espaces renfermant de l'eau. Dans ce but, la pièce en question est placée pendant 24 heures dans l'alcool dilué, puis pendant 1-2 heures dans l'alcool concentré. Pour l'examen des organes de l'oreille externe et de l'oreille moyenne, l'objet peut être placé directement de l'alcool absolu dans la solution de celloïdine. Pour les examens du labyrinthe par contre, où il est de toute nécessité que toutes les cavités labyrinthiques soient remplies de la' masse de celloïdine, autant que possible la pièce est encore portée de l'alcool dans un mélange de 6 parties d'éther sulfurique et d'une partie d'alcool absolu et y est laissée au moins pendant 12 heures.

c) La pièce est ensuite placée dans la solution diluée de celloïdine et y reste de un à trois jours, d'après la grandeur de l'objet. Les préparations de l'oreille externe et de l'oreille moyenne peuvent être montées immédiatement dans la masse de celloïdine épaisse, au sortir de cette solution. Mais les préparations du labyrinthe, pour que le montage réussisse d'autant plus sûrement, sont portées de la solution faible dans une solution un peu plus forte et de celle-ci seulement dans la masse de celloïdine épaisse.

3. Les organes pénétrés par la solution de celloïdine sont enlevés de la solution après 24 à 36 heures et placés dans une petite boîte de papier de grandeur appropriée, que l'on a rempli jusqu'au tiers environ de masse de celloïdine déjà légèrement solidifiée. Puis la pièce est rapidement arrosée de la solution la plus concentrée de celloïdine , qu'on laisse s'épaissir par évaporation , sous une cloche de verre pendant 2-3 heures. Alors la pièce montée est placée dans l'alcool à 80 % et après 5 à 6 heures dans l'alcool à 70 % ; au bout de 24 à 48 heures , toute la masse est solidifiée et peut être coupée.

Avant le moulage des pièces, il faut s'assurer qu'elles n'ont pas été trop durcies par l'alcool absolu , auquel cas l'objet doit être de nouveau ramolli dans l'alcool dilué et chauffé. Il faut agir de même, lorsque l'organe a cté trop durci par le montage dans a celloïdine elle-même, ce qui est assez souvent le cas pour les pièces décalcifiées par la solution d'acide nitrique et de chlorure de sodium.

Pour ne pas se tromper sur la direction à donner à la coupe sur la pièce montée , la surface de la pièce qui doit être dirigée vers le haut, dans le microtome , est teintée en carmin avant le montage ; la couleur rouge se voit par transparence à travers la masse diaphane de celloïdine.

Lorsque le montage est parfaitement réussi , la celloïdine durcie doit entourer entièrement toutes les parties du tissu sur la coupe microscopique et les maintenir fixées in situ. Comme la celloïdine en coupes microscopiques minces est tout à fait transparente, elle n'empêche en aucune manière l'examen microscopique. La celloïdine peut être facilement enlevée des coupes , en les plaçant pendant un quart d'heure dans le mélange connu d'alcool et d'éther et en employant l'essence de girofle pour les éclaircir. Mais il ne faut le faire en aucun cas , lorsqu'il s'agit de l'examen de ces

208 Préparation de coupes microscopiques de l'organe auditif.

organes de l'oreille moyenne (osselets, ponts conjonctif) et du labyrinthe (saccules, ampoules, canaux demi-circulaires et membranes du limaçon), qui ne sont attachés que lâchement aux parois osseuses , car dans ce cas , par suite de la solution de la masse de celloïdine qui les fixe , ces organes tomberaient de la coupe. Il faut , au contraire , chaque fois que les diverses parties de l'organe doivent rester in situ, veiller toujours, pendant toutes les manipulations auxquelles on soumet la coupe , à ce que la couche de celloïdine qui les fixe, soit conservée. En coupant la pièce, il ne faut employer pour humecter la lame du couteau , que de l'alcool à préparations anatomiques ordinaire et pas de l'alcool absolu.

Dans mes recherches oto-histologiques , je n'ai pas eu à me louer de la photoxyliné, récemment recommandée comme succédané de la celloïdine pour le montage des pièces, autant que de celle-ci. La photoxyline a certes l'avantage de se dissoudre en quelques minutes dans l'alcool et l'éther, mais elle présente ce grand inconvénient , que pendant la déshydratation de la coupe microscopique dans l'alcool absolu, la couche de photoxyline se liquéfie facilement et que la pièce se désagrège. Il faudrait signaler encore ici le montage un peu plus détaillé par la paraffine, employé dans le laboratoire de M. le professeur Klebs ; je n'ai pas à ce sujet d'expérience personnelle, mais, d'après les communications de M. le docent docteur Rohrer, de Zurich , ce montage offre cependant plusieurs avantages pour l'examen spécial du tympan et du labyrinthe.

1. La pièce fixée et décalcifiée au préalable est placée dans l'alcool absolu pour être tout à fait déshydratée.

2. De l'alcool la pièce passe dans l'huile d'aniline pure ; elle y reste pendant 24 à 36 heures , à une température constante de 40 à 60° , jusqu'à ce qu'elle ait la transparence du verre.

3. Ensuite la pièce est placée pendant 24 à 36 heures dans le xylol , que l'on doit renouveler deux fois pendant ce temps, jusqu'à complet déplacement de l'huile d'aniline.

4. La pièce est maintenant portée dans le xylol qui le remplace, avec un peu de paraffine et pour terminer

5. dans de la paraffine pure fondue non employée encore, à 56° C, où elle reste pendant 48 heures , à une température constante de 56°.

6. Après refroidissement et solidification de la masse de paraffine , la pièce en est retirée et coupée au microtome.

On coupe les pièces d'après les règles généralement en usage dans la technique microscopique. En général , il faut aussi préférer de beaucoup pour notre but, couper les préparations à l'aide de microtomes à coulisses bien construits, à l'emploi de toutes les autres méthodes, surtout à cause de l'égalité des coupes que l'on peut obtenir ainsi sans perte de matériel et de l'exécution plus rapide de toute la manipulation. Lorsqu'il s'agit de la préparation de coupes en série , cette méthode ne saurait en aucune façon être remplacée par une autre. J'emploie déjà depuis plusieurs années le microtome automatique à coulisse de Reichert de Vienne, rarement son microtome à main , qui suffit parfaitement pour de petits objets et pour des recherches moins minutieuses.

Coloration des coupes microscopiques. 209

Comme le tissu osseux décalcifié oppose au couteau du microtome une résistance plus grande que les parties molles durcies , la plupart des pièces de l'oreille doivent être ùii-ises dans l'étau du microtome pendant la coupe , car la fixation simple sur un bouchon au moyen de celloïdine qui se solidifie, telle qu'on l'emploie souvent, n'assure pas une fixité suffisante de l'objet.