Coloration des coupes

Nous nous servons surtout en oto-histologie des matières colorantes et des méthodes de coloration suivantes :

1. Coloration par le carmin. Le carminate d'ammoniaque et le carmin de Beale conviennent surtout pour colorer l'os décalcifié et le protoplasme cellulaire , sans produire la coloration des noyaux. En laissant les coupes pendant 12 à 24 heures ( coloration lente ) dans une solution très étendue , rosée de carmin , on obtient une très belle coloration des coupes (Stôhr).

Le picro-carmin (1) est surtout employé pour des recherches d'histologie pathologique de l'organe auditif. (Ossification pathologique, processus destructeurs et tuberculeux dans le temporal , prolifération de jeunes cellules. ) Le tissu osseux se colore par cet agent en rouge brique , la moelle osseuse et le protoplasme cellulaire , de même que les fibres musculaires prennent une couleur jaune diffuse , tandis que les noyaux se colorent en rouge cerise.

Cette double coloration ne devient alors si marquée que si le traitement a été fait comme suit : colorer pendant une heure, laver pendant une demiheure dans une solution à 1 % d'acide chlorhydrique dans la glycérine, laver pendant 5 minutes dans l'eau distillée, déshydrater dans l'alcool. Il faut ajouter aussi bien à la solution d'acide chlorhydrique dans la glycérine qu'à l'eau ou l'alcool assez d'acide picrique pour qu'ils prennent une coloration jaune.

Le carmin aluné (2) (Grenadier) très recommandable en général donne aussi aux noyaux une coloration rapide et durable ; il présente encore cet avantage qu'il ne se produit pas facilement une coloration exagérée, même en laissant longtemps la coupe dans la solution colorante ; 5-10 minutes suffisent pour une coloration tout à fait manifeste.

2. L'éosine en solution à 5 3/0, versée goutte à goutte dans le verre de montre, rempli d'eau distillée ou d'alcool, dans lequel sont placées les coupes, produit en quelques minutes une coloration rouge clair diffuse,

(1) Carmini , Ammonii pur. liq. âà. 0,50, Aq. destil. 25,0 ; cui digerendo adde Acidi picrin. conc. puri 75,0 et filtra. Deinde adde Phenoli puri gtts. duas.

(2) Carmini 1,0. Alumin. pulv. 5,0. Aq. destil. 95,0 leni calore solvet et filtret.

210 Coloration des coupes microscopiques.

sans différencier les noyaux et les cellules p (coloration rapide ). Nous l'employons par conséquent comme couleur de fond, pour la faire suivre d'une coloration différente appropriée du noyau. Celle-ci est obtenue après lavage à fond des coupes dans l'alcool par coloration consécutive à l'aide de l'hématoxyline, du bleu de méthyle ou du violet de gentiane.

3. Hématoxyline. Nous employons- de préférence la coloration par l'hématoxyline à l'alun, indiquée dans la technique microscopique de Friedlander (Hématoxyline 2 grammes, alcool absolu 100 grammes, eau distillée 100 grammes, glycérine pure 2 grammes, alun pulvérisé 2 grammes à filtrer chaque fois avant l'emploi. Ne colore bien la préparation que 8 jours après). Au bout de quelques minutes la coupe est colorée en brun ; mais dans l'eau distillée, où les coupes doivent être lavées pendant 7. d'heure à 2 heures, elles prennent aussitôt une coloration bleue. L'hématoxyline à l'alun produit une remarquable coloration bleue des noyaux, de l'os décalcifié et de ses vaisseaux.

4. Comme autre agent de coloration des noyaux, il faut mentionner l'hématoxyline à l'alun, dans laquelle ils sont colorés en quelques minutes ; après quoi les coupes sont lavées dans de l'eau distillée en grande quantité et y restent pendant 12-24 heures. Le désavantage de ce moyen consiste en ceci que les coupes sont facilement trop colorées. On remédie à cet inconvénient en portant la préparation dans une solution aqueuse d'alun à 1 °/0.

5. Le brun de Bismarck appartient aussi aux agents de coloration des noyaux. Ici les coupes se colorent directement dans l'alcool fort. Les noyaux sont colorés en beau brun.

6. Nous mentionnons encore le violet de gentiane, le carmin au lithium et au borax, que j'emploie rarement à cause de leurs résultats incertains.

Coloration des bactéries sur les coupes.

Pour la démonstration des micro-organismes sur les coupes de l'organe auditif, qui doit être conservé dans l'alcool absolu et décalcifié par l'acide nitrique ou l'acide chlorhydrique ( voyez : Décalcification), nous recommandons la méthode de colo ration universelle des bactéries de Loffler. Les coupes, parfaitement débarrassées d'acide, demeurent pendant 5-10 minutes dans une solution alcaline de bleu de méthyle (30 cent, cubes de solution alcoolique concentrée de bleu de méthyle pour 100 cent, cubes d'une solution de lessive de potasse à 0,01 % ). Lavage pendant quelques secondes dans l'acide acétique à 1 n/0 , puis alcool , huile de cèdre, baume de Canada. Tous les champignons , surtout les micro-organismes de la diphtérie et les cocci pyogènes, comme aussi les moisissures (aspergillus) se colorent magnifiquement en bleu. La méthode de Gramm donne aussi une coloration isolée des bactéries. Coloration dans la' gentiane d'aniline. Décoloration par l'alcool iodé.

Pour la démonstration des bacilles tuberculeux dans les coupes de parties osseuses du temporal , atteintes de caries, nous recommandons particulièrement la

Eclaircissement et fermeture des coupes. 211

méthode proposée par Ziehl-Neelsen pour la coloration des coupes. Comme solution colorante, ou emploie la fuchsine à l'acide phénique (1), dans laquelle les coupes restent de 15 à 20 minutes. Décoloration par l'acide sulfurique à 25 °/0 , lavage dans l'alcool rectifié. Coloration consécutive ( 3 minutes) dans une solution aqueuse de bleu de méthyle. Bacilles rouges, cellules et tissus bleus.